Orientador: Helio Langoni / Resumo: Com relação ao desenvolvimento do quadro clínico e a transmissão transplacentária, a toxoplasmose em humanos e ratos é similar, e a infecção em ratos pode servir como um modelo para a enfermidade humana. Foram inoculados, pela via oral, sete grupos de ratos com 105 (Grupo 1), 104 (Grupo 2) e 103 (Grupo 3) bradizoítos de Toxoplasma gondii cepa BTU-2 (altamente virulenta para camundongos), 105 (Grupo 4), 104 (Grupo 5) e 103 (Grupo 6) bradizoítos de T.gondii cepa ME-49 (pouco virulenta para camundongos) e solução salina estéril (Grupo 7 - Controle). Os animais foram observados durante 84 dias, com colheita semanal de sangue para obtenção de soro e realização das provas sorológicas pelos métodos de aglutinação direta (MAD) e imunofluorescência indireta (RIFI) para anticorpos das classes IgG e IgM. Ao final do período os animais foram sacrificados e fragmentos de tecidos colhidos para reisolamento do parasita em camundongos e para detecção de DNA do T.gondii pela reação em cadeia pela polimerase (PCR), utilizando-se oligonucleotídeos dirigidos para a detecção dos genes SAG- 1, B1, rDNA e para uma seqüência repetida não codificadora (REP). Foi realizada a tipagem da cepa BTU-2 pela avaliação do polimorfismo do gene SAG-2. Todos os ratos desenvolveram títulos de anticorpos detectáveis pelas diferentes técnicas, havendo, independente da cepa inoculada, diferenças mais frequentes entre os grupos que receberam 105 e 103 bradizoítos. Para IgM a partir do 35o DPI e para a RIFI-IgG e o MAD, a cepa BTU-2 induziu títulos mais elevados que a cepa ME-49. A cepa BTU-2 foi isolada de todas as amostras de cérebro e musculatura estudadas, independente da dose utilizada na infecção dos animais, enquanto que para a cepa ME-49, o parasita foi isolado mais frequentemente do cérebro do que da musculatura, com influência da dose infectante... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Referring to the symptoms and transplacentary transmission, toxoplasmosis in humans and rats is similar and rats can be used as a model for the disease in humans. 7 groups of rats were inoculated, by oral administration, using 105 (Group 1), 104 (Group 2) and 103 (Group 3) Toxoplasma gondii bradyzoits from strain BTU-2, which is highly infective to mice and with 105 (Group 4), 104 (group 5) and 103 (Group 6) T.gondii bradyzoits of strain ME-49, which is less infective to mice and, finally, sterile saline solution (Group 7) as a control one. The animals were observed during 84 days, with weekly blood samples, in order to obtain serum and then submitted to serological tests by modified agglutination test (MAT) and imunofluorecent antibody test (IFAT) to antibodies from subtypes IgG and IgM. At the end of time of observation, the animals were killed and samples of their tissues were obtained in order to reisolate the parasite and to detect the T.gondii DNA by polymerase chain reaction (PCR), using specific oligonucleotids to detect the genes SAG-1, B1, rDNA and to no coding repetitive sequence (REP). The BTU-2 strain was classified by the SAG-2 gene polymorphism. All the rats developed detectable antibodies titers, no matter which strain was used between the techniques. The most frequent differences in the serological results were among the groups that received 105 and those who received 103 bradizoits, no matter the strain used. The BTU-2 strain induced higher titles to IgM since 35 DPI and to IFAT-IgG and MAT than the ME-49 strain. The BTU-2 strain also was isolated from all the brain and muscles samples, no matter the dosage used to infect the animals. When the ME- 49 strain was used, the parasite was isolated more frequently... (Complete abstract, click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T18:42:11Z : No. of bitstreams: 1 silva_av_dr_botfm_prot.pdf: 636648 bytes, checksum: 53bbd69b49e6f85da36a6c425cb8447c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Com relação ao desenvolvimento do quadro clínico e a transmissão transplacentária, a toxoplasmose em humanos e ratos é similar, e a infecção em ratos pode servir como um modelo para a enfermidade humana. Foram inoculados, pela via oral, sete grupos de ratos com 105 (Grupo 1), 104 (Grupo 2) e 103 (Grupo 3) bradizoítos de Toxoplasma gondii cepa BTU-2 (altamente virulenta para camundongos), 105 (Grupo 4), 104 (Grupo 5) e 103 (Grupo 6) bradizoítos de T.gondii cepa ME-49 (pouco virulenta para camundongos) e solução salina estéril (Grupo 7 – Controle). Os animais foram observados durante 84 dias, com colheita semanal de sangue para obtenção de soro e realização das provas sorológicas pelos métodos de aglutinação direta (MAD) e imunofluorescência indireta (RIFI) para anticorpos das classes IgG e IgM. Ao final do período os animais foram sacrificados e fragmentos de tecidos colhidos para reisolamento do parasita em camundongos e para detecção de DNA do T.gondii pela reação em cadeia pela polimerase (PCR), utilizando-se oligonucleotídeos dirigidos para a detecção dos genes SAG- 1, B1, rDNA e para uma seqüência repetida não codificadora (REP). Foi realizada a tipagem da cepa BTU-2 pela avaliação do polimorfismo do gene SAG-2. Todos os ratos desenvolveram títulos de anticorpos detectáveis pelas diferentes técnicas, havendo, independente da cepa inoculada, diferenças mais frequentes entre os grupos que receberam 105 e 103 bradizoítos. Para IgM a partir do 35o DPI e para a RIFI-IgG e o MAD, a cepa BTU-2 induziu títulos mais elevados que a cepa ME-49. A cepa BTU-2 foi isolada de todas as amostras de cérebro e musculatura estudadas, independente da dose utilizada na infecção dos animais, enquanto que para a cepa ME-49, o parasita foi isolado mais frequentemente do cérebro do que da musculatura, com influência da dose infectante... / Referring to the symptoms and transplacentary transmission, toxoplasmosis in humans and rats is similar and rats can be used as a model for the disease in humans. 7 groups of rats were inoculated, by oral administration, using 105 (Group 1), 104 (Group 2) and 103 (Group 3) Toxoplasma gondii bradyzoits from strain BTU-2, which is highly infective to mice and with 105 (Group 4), 104 (group 5) and 103 (Group 6) T.gondii bradyzoits of strain ME-49, which is less infective to mice and, finally, sterile saline solution (Group 7) as a control one. The animals were observed during 84 days, with weekly blood samples, in order to obtain serum and then submitted to serological tests by modified agglutination test (MAT) and imunofluorecent antibody test (IFAT) to antibodies from subtypes IgG and IgM. At the end of time of observation, the animals were killed and samples of their tissues were obtained in order to reisolate the parasite and to detect the T.gondii DNA by polymerase chain reaction (PCR), using specific oligonucleotids to detect the genes SAG-1, B1, rDNA and to no coding repetitive sequence (REP). The BTU-2 strain was classified by the SAG-2 gene polymorphism. All the rats developed detectable antibodies titers, no matter which strain was used between the techniques. The most frequent differences in the serological results were among the groups that received 105 and those who received 103 bradizoits, no matter the strain used. The BTU-2 strain induced higher titles to IgM since 35 DPI and to IFAT-IgG and MAT than the ME-49 strain. The BTU-2 strain also was isolated from all the brain and muscles samples, no matter the dosage used to infect the animals. When the ME- 49 strain was used, the parasite was isolated more frequently... (Complete abstract, click electronic access below)

Orientador: João Aristeu da Rosa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T20:03:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mendonca_VagnerJose_M.pdf: 9704244 bytes, checksum: c343d08640ae10d944866e45beb0b3ae (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Triatomíneos silvestres coletados por Cerqueira em 1975 em Santo Inácio/BA foram estudados por Papa et al. (2002) que concluíram tratar-se de uma nova espécie, denominada T. sherlocki ao compará-la com outros Triatominae. No intuito de ampliar o conhecimento dessa nova espécie e inferir relação filogenética para as espécies da subfamília Triatominae foram seqüenciados genes nucleares, ITS-2 e 28S, e mitocondriais, citocromo b e 16S, de T. sherlocki e T. brasiliensis. As seqüências foram alinhadas no programa Clustal W do BioEdit e as relações filogenéticas construídas utilizando metodologias de distâncias com os parâmetros p-distance e Kimura-2 do algoritimo Neighbor-Joining, do programa MEGA 3.1, e Máxima Parsimônia, do programa PAUP 4.1. A filogenia baseada nos dois genes mitocondriais revelou que a espécie T. sherlocki é estritamente relacionada com a espécie T. melanica, e que T. brasiliensis aparece como espécieirmã dessas duas, exceção para a análise de Parcimônia do gene 16S que apresenta T. melanica como espécie-irmã da relação mais estreita entre T. sherlocki e T. brasiliensis. P. megistus e T. infestans aparecem relacionadas com espécies norte-americanas nas filogenias inferidas do gene 16S e das seqüências dos aminoácido do citocromo b, respectivamente. A filogenia baseada no gene nuclear 28S revelou uma politomia envolvendo as espécies T. sherlocki, T. brasiliensis e T. melanica. Essa filogenia foi subestimada pelo baixo número de espécies presentes na árvore. Essa mesma relação ocorreu na filogenia do gene do ITS-2 na análise baseada em Parcimônia. A análise de distância desse gene revelou a proximidade entre T. sherlocki e T. brasiliensis, com T. melanica como espécie-irmã. Essa filogenia apresentou as espécies T. maculata, T. brasiliensis e T. infestans estritamente relacionadas com espécies de triatomíneos norte-americanas. Algumas espécies como T. infestans e P. megistus apresentaram mais de uma topologia dependendo do gene analisado, sendo necessários mais estudos para definir uma posição filogenética dessas espécies. A proximidade de T. sherlocki com os haplótipos de T. brasiliensis, principalmente com a espécie T. melanica, pode inferir uma possível filogeografia a partir de ancestrais de T. brasiliensis, tratando-se portanto de espécies derivadas / Abstract: Wild triatomines collected by Cerqueira in 1975 in Santo Inácio,BA, Brazil were studied by Papa et al. (2002), who observed morphological differences from other species of the Triatominae, concluding that they represented a new species, named Triatoma sherlocki. Mitochondrial (cytocrome b and 16S) and nuclear (ITS-2 and 28S) gene sequencing of T. sherlocki and T. brasiliensis was carried out with the aim of learning more about the new species and its phylogenetic relationship to the species of the Triatominae subfamily. The sequences ware aligned with the Clustal W application of the BioEdit freeware program and the phylogenetic relationship inferred by estimating distances with the Kimura 2-parameter and p-distance methods of the Neighbor-Joining algorithm in the MEGA 3.1 program and Maximum Parsimony (MP) method of the PAUP 4.1 program. The phylogeny based on the two mitochondrial genes disclosed that T. sherlocki and T. melanica were closely related and that T. brasiliensis was a sister species of the two, with the exception that in for the Parsimony analysis of the 16S gene, T. melanica appeared as a sister species of the clade formed by T. sherlocki and T. brasiliensis. The species Panstrongylus megistus and T. infestans are related to North American species in phylogenetic analyses of the large subunit ribosomal RNA mitochondrial gene (16S) and the amino acid sequences of cytocrome b, respectively. The phylogeny based on the large subunit ribosomal D2 (28S) nuclear gene revealed to a polytomy involving T. sherlocki, T. brasiliensis and T. melanica. This phylogeny was underestimated due to the small number of species present in the tree. This same relationship occurred in the phylogeny of internally transcribed spacer 2 (ITS-2) nuclear gene, in analysis based on Maximum Parsimony. The analysis of distance in this gene revealed proximity between T. sherlocki and T. brasiliensis, with T. melanica as sister species. This phylogeny showed T. maculata, T. brasiliensis and T. infestans to be closely related to North American triatomines. Certain species, such as T. infestans and P. megistus, exhibited more than one topology with different genes, and fusther study is needed to define the phylogenetic positions of these species. The proximity of T. sherlocki to the T. brasiliensis haplotypes, especially with the species T. melanica, may reveal a possible phylogeography originaling from T. brasiliensis ancestors, thus implying derived species / Mestrado / Mestre em Parasitologia