A necessidade de criopreservação seminal vem aumentando cada vez mais, concomitantemente à evolução das biotecnologias aplicadas à reprodução animal. Sabe-se que a principal causa da diminuição do desempenho reprodutivo de um touro, criado em clima tropical, é o estresse térmico. Raças de origem européia (Bos taurus taurus) são consideravelmente mais sensíveis à essas condições climáticas quando comparadas aos animais de origem indiana (Bos taurus indicus). Esses animais não adaptados podem apresentar decréscimo na qualidade espermática, como alterações estruturais, funcionais e maior suscetibilidade ao estresse oxidativo, após a descongelação do sêmen. Para avaliar essa hipótese, foram utilizadas amostras criopreservadas de 40 touros, sendo 20 da raça Nelore (Bos taurus indicus) e 20 da raça Simental (Bos taurus taurus), criados em clima tropical, dessas, 10 amostras seminais de cada raça foram coletadas durante inverno e 10 durante o verão. Após a descongelação das amostras, foram realizados os testes espermáticos convencionais como motilidade progressiva, vigor e índice de motilidade espermática, e os testes funcionais tais como integridade de membrana plasmática (Eosina/Nigrosina), integridade acrossomal (POPE), integridade de DNA (Ensaio Cometa) e atividade citoquímica mitocondrial (3\'3 diaminobenzidina DAB). Também foi avaliada a suscetibilidade das células espermáticas à peroxidação lipídica induzida, através da mensuração da concentração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Os dados foram analisados levando em conta as classes: raça (Nelore e Simental) ou estação do ano (verão e inverno), através do programa SPSS 13.0 para Windows. A variável DAB I foi maior (p=0,04) nas amostras dos touros Nelore em comparação com Simentais (17,85 ± 2,38 vs 11,4 ± 1,84). Observou-se o efeito das estações do ano sobre as variáveis motilidade progressiva (26,50% inverno e 13,30% verão; p=0,02), DAB I (22,32% inverno e 13,30% verão; p=0,04) e DAB III (13,88% inverno e 22,10% verão; p=0,01), somente no sêmen dos touros Nelore, e o efeito das raças (p=0,03) sobre as variáveis DAB I (22,34% Nelore e 11,60% Simental) e DAB III (13,88% Nelore e 21,19% Simental), apenas durante o inverno, quanto ao nível de TBARS, não foi verificado diferença entre nenhum grupo. Houve correlação entre alguns testes funcionais e convencionais, porém a variável integridade de DNA não correlacionou com nenhum teste convencional. Esses resultados podem indicar que a peroxidação lipídica sofrida, espontaneamente, pelos touros Europeus, devido ao estresse térmico, selecionou espermatozóides mais resistentes à criopreservação. / Seminal cryopreservation technique has been increasing concomitant reproductive biotechnologies. It is known that heat stress is the main cause that affects bulls reproductive performance under tropical environment. European breeds (Bos taurus taurus) are much more sensible to these conditions than Indian breeds (Bos taurus indicus). These non-adapted animals present a fast decrease in sperm quality as structural and functional parameters and higher oxidative stress susceptibility. In order to test this hypothesis, cryoprotected semen samples of twenty Nelore (Bos taurus indicus) and twenty Simmental (Bos taurus taurus) bulls, raised under tropical conditions, were analyzed; ten samples of each breed were collected during summer and ten during winter. After thawing, semen samples were submitted to following conventional tests: progressive motility, vigor and sperm motility index (IME), and following functional tests: plasmatic membrane integrity (eosin-nigrosin), acrosomal membrane integrity (POPE), DNA fragmentation (Comet Assay) and mitochondrial activity (3\'3 diaminobenzidine - DAB). The spermatozoa susceptibility to the induced lipid peroxidation followed by measurement of thiobarbituric acid reactive substances concentration (TBARS), was used as an oxidative stress index. Statistical analysis were performed for breed (Nelore and Simmental) and season (summer and winter), using SPSS 13.0 for Windows. Comparing Nelore and Simmental, DAB I was higher (p=0,04) in the first group (17,85 ± 2,38 and 11,4 ± 1,84, respectively). Season effect was observed only in Nelore samples on: progressive motility (26,50% winter and 13,30% summer; p=0,02), DAB I (22,32% winter and 13,30% sumer; p=0,04) and DAB III (13,88% winter and 22,10% summer; p=0,01); and breed effect (p=0,03) was observed only during winter on: DAB I (22,34% Nelore and 11,60% Simmental) and DAB III (13,88% Nelore and 21,19% Simmental). TBARS index, did not differ in breed or season. Correlations were observed between some of functional and conventional tests, however, the DNA integrity did not correlate with any conventional test. These results may indicate that probably, the spontaneous peroxidation that European bulls suffer due to the heat stress may have selected sperm more resistant to the cryopreservation.

A necessidade de criopreservação seminal vem aumentando cada vez mais, concomitantemente à evolução das biotecnologias aplicadas à reprodução animal. Sabe-se que a principal causa da diminuição do desempenho reprodutivo de um touro, criado em clima tropical, é o estresse térmico. Raças de origem européia (Bos taurus taurus) são consideravelmente mais sensíveis à essas condições climáticas quando comparadas aos animais de origem indiana (Bos taurus indicus). Esses animais não adaptados podem apresentar decréscimo na qualidade espermática, como alterações estruturais, funcionais e maior suscetibilidade ao estresse oxidativo, após a descongelação do sêmen. Para avaliar essa hipótese, foram utilizadas amostras criopreservadas de 40 touros, sendo 20 da raça Nelore (Bos taurus indicus) e 20 da raça Simental (Bos taurus taurus), criados em clima tropical, dessas, 10 amostras seminais de cada raça foram coletadas durante inverno e 10 durante o verão. Após a descongelação das amostras, foram realizados os testes espermáticos convencionais como motilidade progressiva, vigor e índice de motilidade espermática, e os testes funcionais tais como integridade de membrana plasmática (Eosina/Nigrosina), integridade acrossomal (POPE), integridade de DNA (Ensaio Cometa) e atividade citoquímica mitocondrial (3\'3 diaminobenzidina DAB). Também foi avaliada a suscetibilidade das células espermáticas à peroxidação lipídica induzida, através da mensuração da concentração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Os dados foram analisados levando em conta as classes: raça (Nelore e Simental) ou estação do ano (verão e inverno), através do programa SPSS 13.0 para Windows. A variável DAB I foi maior (p=0,04) nas amostras dos touros Nelore em comparação com Simentais (17,85 ± 2,38 vs 11,4 ± 1,84). Observou-se o efeito das estações do ano sobre as variáveis motilidade progressiva (26,50% inverno e 13,30% verão; p=0,02), DAB I (22,32% inverno e 13,30% verão; p=0,04) e DAB III (13,88% inverno e 22,10% verão; p=0,01), somente no sêmen dos touros Nelore, e o efeito das raças (p=0,03) sobre as variáveis DAB I (22,34% Nelore e 11,60% Simental) e DAB III (13,88% Nelore e 21,19% Simental), apenas durante o inverno, quanto ao nível de TBARS, não foi verificado diferença entre nenhum grupo. Houve correlação entre alguns testes funcionais e convencionais, porém a variável integridade de DNA não correlacionou com nenhum teste convencional. Esses resultados podem indicar que a peroxidação lipídica sofrida, espontaneamente, pelos touros Europeus, devido ao estresse térmico, selecionou espermatozóides mais resistentes à criopreservação. / Seminal cryopreservation technique has been increasing concomitant reproductive biotechnologies. It is known that heat stress is the main cause that affects bulls reproductive performance under tropical environment. European breeds (Bos taurus taurus) are much more sensible to these conditions than Indian breeds (Bos taurus indicus). These non-adapted animals present a fast decrease in sperm quality as structural and functional parameters and higher oxidative stress susceptibility. In order to test this hypothesis, cryoprotected semen samples of twenty Nelore (Bos taurus indicus) and twenty Simmental (Bos taurus taurus) bulls, raised under tropical conditions, were analyzed; ten samples of each breed were collected during summer and ten during winter. After thawing, semen samples were submitted to following conventional tests: progressive motility, vigor and sperm motility index (IME), and following functional tests: plasmatic membrane integrity (eosin-nigrosin), acrosomal membrane integrity (POPE), DNA fragmentation (Comet Assay) and mitochondrial activity (3\'3 diaminobenzidine - DAB). The spermatozoa susceptibility to the induced lipid peroxidation followed by measurement of thiobarbituric acid reactive substances concentration (TBARS), was used as an oxidative stress index. Statistical analysis were performed for breed (Nelore and Simmental) and season (summer and winter), using SPSS 13.0 for Windows. Comparing Nelore and Simmental, DAB I was higher (p=0,04) in the first group (17,85 ± 2,38 and 11,4 ± 1,84, respectively). Season effect was observed only in Nelore samples on: progressive motility (26,50% winter and 13,30% summer; p=0,02), DAB I (22,32% winter and 13,30% sumer; p=0,04) and DAB III (13,88% winter and 22,10% summer; p=0,01); and breed effect (p=0,03) was observed only during winter on: DAB I (22,34% Nelore and 11,60% Simmental) and DAB III (13,88% Nelore and 21,19% Simmental). TBARS index, did not differ in breed or season. Correlations were observed between some of functional and conventional tests, however, the DNA integrity did not correlate with any conventional test. These results may indicate that probably, the spontaneous peroxidation that European bulls suffer due to the heat stress may have selected sperm more resistant to the cryopreservation.

Entre as biotécnicas da reprodução, a inseminação artificial (IA) é a que proporciona maior amplitude de resultados nos programas de melhoramento genético animal. A adequada seleção dos atributos produtivos e reprodutivos de fêmeas e principalmente dos machos é a base essencial para a maximização do potencial dessa técnica. O sêmen para IA pode ser fresco, fresco diluído, refrigerado e congelado. Os diluidores têm papel fundamental na expansão do volume seminal, permitindo seu fracionamento na preservação do sêmen no processo de refrigeração, eles devem ser atóxicos, ter pH e pressão osmótica compatíveis com a sobrevivência espermática, de baixo custo e fácil preparo. Sendo assim o objetivo deste trabalho foi avaliar a conservação de sêmen ovino resfriado com diluente de Kenney (K) ou diluente de Kenney mais gema de ovo (KG) por até 48 horas. Foram utilizados quatro carneiros, sendo feitas 40 colheitas. Logo após o sêmen era dividido em duas alíquotas uma com o diluente de K e outra alíquota com diluente de KG. As amostras foram resfriadas à 10ºC. As análises subjetivas usuais foram feitas nos tempos 0, 24 e 48 horas. Estas análises incluíram turbilhonamento, motilidade e vigor. Foram feitas também análises de testes funcionais como a avaliação da integridade das membranas plasmática e acrossomal através das colorações de eosina-nigrosina e técnica da coloração Fast Green / Rosa Bengala (POPE, 1991) respectivamente, avaliação da atividade citoquímica mitocondrial através da coloração de diaminobenzidina (DAB) e avaliação da susceptibilidade do espermatozóide ao estresse oxidativo através da avaliação dos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico após a incubação com sistema gerador constituído de sulfato de ferro e ascorbato. Neste trabalho o tempo afetou significativamente a motilidade e o vigor espermático, caindo de 79,16±1,41 para 40,25±2,55 após 48hs e de 3,92±0,06, para 2,57±0,10 após 48hs respectivamente. O tempo influenciou também a integridade das membranas plasmática e acrossomal, fazendo com que houvesse uma queda gradativa nas integridades (0hs=95,75±0,36, 24hs=90,69±0,99, 48hs=86,11±1,45) e (0hs=90,34±0,80, 24hs=84,33±1,30, 48hs=76.67±1,69) respectivamente. Foi possível observar também que ao longo do tempo houve uma diminuição da atividade mitocondrial e um aumento nas espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), que diferiu do tempo 0hs para o tempo 48hs (807,42±39.22 e 937,76 ± 41,87). Verificou-se ainda que o meio K apresentou maiores valores de vigor do que o meio KG (p=0,0144), e que o meio K foi capaz de preservar melhor a atividade mitocondrial P=0,0005. A concentração de TBARS no diluente K correlacionou-se negativamente com as variáveis motilidade, vigor, integridade de membrana plasmática e acrossomal. No diluente KG as correlações do TBARS e DAB III foram positiva (r=0,35), demonstrando que quanto maior a quantidade de células com baixa atividade mitocondrial, maior a concentração de TBARS. Foi também encontrada uma correlação negativa entre a variável integridade de acrossomo (ACRO) e TBARS (r=-0,40; P=0,0001), mostrando que quanto menor a porcentagem de células com acrossomo integro, maior a concentração de substancias reativas ao acido tiobarbitúrico. Concluindo que o diluente K foi eficaz em preservar as características seminais de ovino por até 48 horas e que a adição da gema de ovo ao diluente de Kenney não foi capaz de melhorar estas características. / Among the reproductive biotechniques routinely used in animal production, the artificial insemination (AI) is known to provide a greater gain in genetic improvement programs. The adequate selection of female and especially male productive and reproductive traits is the keystone to maximize the potential of this technique. Semen used for AI can be used fresh diluted or not, chilled and frozen. An essential role is played by semen extenders on volume expansion, allowing not only the fractioning in multiple insemination doses, but also the maintenance of sperm fertilizing potential. Therefore, for semen fractioning, chilling or cryopreservation, extenders are required to be atoxic, must maintain pH and osmolarity compatible to the sperm survival, and should be preferably inexpensive and easy to prepare. Therefore, the objective of the present study was to evaluate chilled ram semen using the Kenney extender (K) of the Kenney extender with egg yolk (KG) for 48 h. Forty ejaculates of four rams were (n=40) were used. Samples were equally divided into two aliquots and extended in K extender and KG extender. Samples were chilled at 10ºC and evaluated immediately after chilling (0h), 24 and 48 h later. These analyses included gross motility (swirl pattern), individual motility and vigor. Functional test analyses such as evaluation of plasma membrane integrity using the eosin-nigrosin staining technique, acrosome integrity using the fast green / bengal rose staining method (POPE, 1991), mitochondrial cytochemical activity evaluation utilizing diaminobenzidine (DAB) staining and assessment of sperm susceptibility to the oxidative stress based the levels of thiobarbituric acid reactive substances after the incubation with ferrous sulphate and ascorbate (TBARS) were performed. In this study, a significant influence of chilling period was found for spermatic motility and vigor dropping from 79.16±1.41 to 40.25±2.55 after 48 hours and from 3.92±0.06 to 2.57±0.10 after 48 hours, respectively. Time also negatively influenced the integrity of plasma and acrosomal membrane (0hr=95.75±0.36, 24hrs=90.69±0.99, 48hrs=86.11±1.45; and 0hr=90.34±0.80, 24hrs=84.33±1.30, 48hrs=76.67±1.69, respectively). Also, during the course of time there was a decrease in mitochondrial activity and an increase in TBARS, with an increase from moment 0 to 48 hrs (807.42 ± 39.22 and 937.76 ± 41.87). It was also found that the medium K had greater values of vigor than the medium KG (p=0.0144), and that the medium K was capable of better preserve mitochondrial activity (P=0.0005). A negative correlation was found between the TBARS concentration with motility and vigor and plasma and acrosomal membrane integrity when samples were stored with the extender K. In the KG extender, the TBARS and DAB III correlations were positive (r=0, 35) indicating that showing that the greater the number of cells with low mitochondrial activity, the higher the TBARS concentration. Also, a negative correlation between the acrosomal integrity variable (ACRO) and TBARS (r=-0, 40; P=0,0001) was found, which demonstrates that the lower the percentage of cells with intact acrosomal, the higher the susceptibility to the oxidative stress. Therefore, results indicated that the K extender was effective in preserve the seminal characteristics of ovine for 48 hours and the addition of egg yolk to kenney extender was not capable of improving such characteristics.

Sheep rearing is an activity that in the last years has undergone several changes related to the production systems, focusing its search in efficient managements that provide the creation profitability. Among the main obstacles in the activity, the errors in sanitary and nutritional management are directly responsible for the decrease in production, the costs with treatments and the loss of genetic material by death, mainly of fetuses and females in peripartum. There fore microminerals used as nutraceuticals can minimize these losses. In order to evaluate the metabolism of a new source of injectable zinc, called zinc edetate and its effect on metabolic and oxidative parameters in postpartum ewes, two experimental studies were performed. In the first one, six male lambs were used and housed in individual metabolic cages. The animals went through a period of 10 days of adaptation and later were divided into two experimental groups. Three animals received a dose of 3mg/kg (2ml) of zinc edetate subcutaneous (SC), being considered the treated group (GT), and other three animals received the same dose of 0.9% sodium chloride solution by the same route, being denominated control group (CG). After the adaptation period the animals were monitored for 30 days to determine the production of faeces and urine and the zinc excretion was measured. During the first 7 days, blood samples were collected for the determination of serum zinc. After this initial period, the blood collections were performed on interspersed days up to 30 days. Water and food samples were also collected to determine the diet concentration of zinc. At the end of the study, the animals were submitted to euthanasia, where 5 grams each of liver, muscle (Longissimus dorsi), heart and kidney were collected in order to determine the concentration of tissue zinc. At the end of the experiment, it was concluded that the zinc edetate presented a greater urinary excretion than the fecal one, as well as being the main route of elimination of this mineral. The use of zinc edetate did not alter the concentrations of this mineral in the tissues and blood of the animals, but presented a higher apparent absorption and retention of this mineral. In the second study, which aimed to evaluate zinc edetate on metabolic and oxidative variables in ewes in the immediate postpartum period, 26 Texel ewes, raised extensively, aged 3 to 4 years, with pregnancy confirmed by ultrasonography at 45 days of gestation, and with mean body score 3.0 were used. Only sheep with simple gestation distributed in two experimental groups were used in the study: the animals in the treated group (GT; n = 13) received 100mg of zinc edetate SC (2mL) 15 days before the expected delivery date and the group control (CG; = 13) received 2mL of 0.9% sodium chloride solution SC at the same date as GT. Blood samples were collected 15 days before the expected delivery date and immediately after delivery for evaluation of the effect of zinc edetate. The 20mL of blood sample was collected in a silicone tube without anticoagulant. The levels of insulin-like growth factor (IGF-1), fructosamine, cholesterol, triglycerides, and oxidative stress index were obtained by measuring the total antioxidants and oxidants, and the blood levels of zinc. There was no difference in oxidative metabolic parameters between the experimental groups (P> 0.05) as well as in blood zinc concentrations (P> 0.05). Zinc edetate had no action on metabolic and oxidative variables in the postpartum period of sheep with reduced metabolic challenge. / A ovinocultura é uma atividade que nos últimos anos passou por uma série de mudanças relacionadas aos sistemas de produção, focando sua busca em manejos eficientes que proporcionem a lucratividade da criação. Dentre os principais entraves na atividade destacam-se os erros nos manejos sanitário e nutricional que são responsáveis diretos pela diminuição da produção, custos com tratamentos e perda de material genético por morte, principalmente de fetos e fêmeas no perirparto. Diante disso, os microminerais utilizados como nutracêuticos podem minimizar estas perdas. Com o objetivo de avaliar o metabolismo de uma nova fonte de zinco injetável, denominada edetato de zinco e seu efeito em parâmetros metabólicos e oxidativos em ovelhas no pós-parto, realizou-se dois estudos experimentais. No primeiro utilizou-se-se 6 cordeiros machos que foram alocados em gaiolas metabólicas individuais. Os animais passaram por um período de 10 dias de adaptação e, posteriormente, foram divididos em dois grupos experimentais. Três animais foram tratados com uma dose de 3mg/kg (2ml) de edetato de zinco por via subcutânea (SC), sendo considerado o grupo tratado (GT), e três receberam a mesma dose de solução de cloreto de sódio a 0,9% pela mesma via, sendo denominado grupo controle (GC). Os animais foram monitorados durante 30 dias para determinação da produção de fezes e de urina e da excreção de zinco. Durante os 7 primeiros dias foram realizadas coletas de amostras de sangue para determinação do zinco sérico. Após este período, as coletas foram realizadas em dias intercalados até 30 dias. Também foram coletas amostras da água e do alimento para determinar a concentração de zinco na dieta. Ao final do estudo os animais foram submetidos à eutanásia com posterior coleta de 5 gramas dos seguintes tecidos: fígado, músculo (Longissimus dorsi), coração e rim, com a finalidade de determinar a concentração de zinco tecidual. Ao final concluiu-se que o edetado de zinco apresentou uma excreção urinária maior que a fecal, assim como foi a principal via de eliminação deste mineral. A aplicação do edetato de zinco não alterou as concentrações de zinco nos tecidos e no sangue dos animais, porém apresentou uma maior absorção e retenção aparentes deste mineral. No segundo estudo, que teve por objetivo avaliar o edetato de zinco sobre variáveis metabólicas e oxidativas em ovelhas no pós-parto imediato, utilizou-se 26 ovelhas da raça Texel, criadas extensivamente, com idade entre 3 e 4 anos, com prenhez confirmada através de ultrassonografia aos 45 dias de gestação e com média de escore corporal 3,0. Foram utilizadas somente ovelhas com gestação simples distribuídas em dois grupos experimentais: grupo tratado (GT; n= 13), animais que receberam 100mg de edetato de zinco SC (2ml) 15 dias antes da data prevista do parto e grupo controle (GC; n= 13), animais que receberam 2ml de cloreto de sódio a 0,9% no mesmo momento experimental. Foram coletadas amostras de sangue 15 dias antes da data prevista do parto e imediatamente após o parto para avaliação do efeito do edetato de zinco. Foram mensurados os teores de Fator de Crescimento Semelhante à Insulina Tipo 1 (IGF-1), de frutosamina, de colesterol, de triglicerídeos, do índice de estresse oxidativo, sendo este obtido através da mensuração do total de antioxidantes e de oxidantes, e dos teores sanguíneos de zinco. Não houve diferença nos parâmetros metabólicos oxidativos entre os grupos experimentais (P>0,05), bem como nas concentrações de zinco sanguíneo (P>0,05). O edetato de zinco não tem ação sobre variáveis metabólicas e oxidativas no pós-parto de ovelhas com reduzido desafio metabólico.

Entre as biotécnicas da reprodução, a inseminação artificial (IA) é a que proporciona maior amplitude de resultados nos programas de melhoramento genético animal. A adequada seleção dos atributos produtivos e reprodutivos de fêmeas e principalmente dos machos é a base essencial para a maximização do potencial dessa técnica. O sêmen para IA pode ser fresco, fresco diluído, refrigerado e congelado. Os diluidores têm papel fundamental na expansão do volume seminal, permitindo seu fracionamento na preservação do sêmen no processo de refrigeração, eles devem ser atóxicos, ter pH e pressão osmótica compatíveis com a sobrevivência espermática, de baixo custo e fácil preparo. Sendo assim o objetivo deste trabalho foi avaliar a conservação de sêmen ovino resfriado com diluente de Kenney (K) ou diluente de Kenney mais gema de ovo (KG) por até 48 horas. Foram utilizados quatro carneiros, sendo feitas 40 colheitas. Logo após o sêmen era dividido em duas alíquotas uma com o diluente de K e outra alíquota com diluente de KG. As amostras foram resfriadas à 10ºC. As análises subjetivas usuais foram feitas nos tempos 0, 24 e 48 horas. Estas análises incluíram turbilhonamento, motilidade e vigor. Foram feitas também análises de testes funcionais como a avaliação da integridade das membranas plasmática e acrossomal através das colorações de eosina-nigrosina e técnica da coloração Fast Green / Rosa Bengala (POPE, 1991) respectivamente, avaliação da atividade citoquímica mitocondrial através da coloração de diaminobenzidina (DAB) e avaliação da susceptibilidade do espermatozóide ao estresse oxidativo através da avaliação dos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico após a incubação com sistema gerador constituído de sulfato de ferro e ascorbato. Neste trabalho o tempo afetou significativamente a motilidade e o vigor espermático, caindo de 79,16±1,41 para 40,25±2,55 após 48hs e de 3,92±0,06, para 2,57±0,10 após 48hs respectivamente. O tempo influenciou também a integridade das membranas plasmática e acrossomal, fazendo com que houvesse uma queda gradativa nas integridades (0hs=95,75±0,36, 24hs=90,69±0,99, 48hs=86,11±1,45) e (0hs=90,34±0,80, 24hs=84,33±1,30, 48hs=76.67±1,69) respectivamente. Foi possível observar também que ao longo do tempo houve uma diminuição da atividade mitocondrial e um aumento nas espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), que diferiu do tempo 0hs para o tempo 48hs (807,42±39.22 e 937,76 ± 41,87). Verificou-se ainda que o meio K apresentou maiores valores de vigor do que o meio KG (p=0,0144), e que o meio K foi capaz de preservar melhor a atividade mitocondrial P=0,0005. A concentração de TBARS no diluente K correlacionou-se negativamente com as variáveis motilidade, vigor, integridade de membrana plasmática e acrossomal. No diluente KG as correlações do TBARS e DAB III foram positiva (r=0,35), demonstrando que quanto maior a quantidade de células com baixa atividade mitocondrial, maior a concentração de TBARS. Foi também encontrada uma correlação negativa entre a variável integridade de acrossomo (ACRO) e TBARS (r=-0,40; P=0,0001), mostrando que quanto menor a porcentagem de células com acrossomo integro, maior a concentração de substancias reativas ao acido tiobarbitúrico. Concluindo que o diluente K foi eficaz em preservar as características seminais de ovino por até 48 horas e que a adição da gema de ovo ao diluente de Kenney não foi capaz de melhorar estas características. / Among the reproductive biotechniques routinely used in animal production, the artificial insemination (AI) is known to provide a greater gain in genetic improvement programs. The adequate selection of female and especially male productive and reproductive traits is the keystone to maximize the potential of this technique. Semen used for AI can be used fresh diluted or not, chilled and frozen. An essential role is played by semen extenders on volume expansion, allowing not only the fractioning in multiple insemination doses, but also the maintenance of sperm fertilizing potential. Therefore, for semen fractioning, chilling or cryopreservation, extenders are required to be atoxic, must maintain pH and osmolarity compatible to the sperm survival, and should be preferably inexpensive and easy to prepare. Therefore, the objective of the present study was to evaluate chilled ram semen using the Kenney extender (K) of the Kenney extender with egg yolk (KG) for 48 h. Forty ejaculates of four rams were (n=40) were used. Samples were equally divided into two aliquots and extended in K extender and KG extender. Samples were chilled at 10ºC and evaluated immediately after chilling (0h), 24 and 48 h later. These analyses included gross motility (swirl pattern), individual motility and vigor. Functional test analyses such as evaluation of plasma membrane integrity using the eosin-nigrosin staining technique, acrosome integrity using the fast green / bengal rose staining method (POPE, 1991), mitochondrial cytochemical activity evaluation utilizing diaminobenzidine (DAB) staining and assessment of sperm susceptibility to the oxidative stress based the levels of thiobarbituric acid reactive substances after the incubation with ferrous sulphate and ascorbate (TBARS) were performed. In this study, a significant influence of chilling period was found for spermatic motility and vigor dropping from 79.16±1.41 to 40.25±2.55 after 48 hours and from 3.92±0.06 to 2.57±0.10 after 48 hours, respectively. Time also negatively influenced the integrity of plasma and acrosomal membrane (0hr=95.75±0.36, 24hrs=90.69±0.99, 48hrs=86.11±1.45; and 0hr=90.34±0.80, 24hrs=84.33±1.30, 48hrs=76.67±1.69, respectively). Also, during the course of time there was a decrease in mitochondrial activity and an increase in TBARS, with an increase from moment 0 to 48 hrs (807.42 ± 39.22 and 937.76 ± 41.87). It was also found that the medium K had greater values of vigor than the medium KG (p=0.0144), and that the medium K was capable of better preserve mitochondrial activity (P=0.0005). A negative correlation was found between the TBARS concentration with motility and vigor and plasma and acrosomal membrane integrity when samples were stored with the extender K. In the KG extender, the TBARS and DAB III correlations were positive (r=0, 35) indicating that showing that the greater the number of cells with low mitochondrial activity, the higher the TBARS concentration. Also, a negative correlation between the acrosomal integrity variable (ACRO) and TBARS (r=-0, 40; P=0,0001) was found, which demonstrates that the lower the percentage of cells with intact acrosomal, the higher the susceptibility to the oxidative stress. Therefore, results indicated that the K extender was effective in preserve the seminal characteristics of ovine for 48 hours and the addition of egg yolk to kenney extender was not capable of improving such characteristics.