Estudos clínicos tem mostrado resultados satisfatórios na aplicação da matriz derivada de esmalte (MDE) nas superfícies radiculares. Porém, a completa regeneração de todos os tecidos periodontais perdidos permanece como um desafio. Na tentativa de alcançar esse objetivo o uso de células tronco mesenquimais derivadas de medula óssea (CTM-MO) em um veículo apropriado na engenharia tecidual vem sendo bastante estudada. Uma interessante aplicação da MDE seria como um mediador biológico específico para CTMMO no intuito de promover a diferenciação e proliferação celular e auxiliar nos processos de regeneração periodontal. Sendo assim, o objetivo do presente estudo é avaliar a influência do Emdogain (EMD) e seu veículo alginato de propileno glicol (APG) na proliferação, diferenciação e mineralização de CTM-MO CD 45-90+. Células estromais de medula óssea (CE-MO) foram coletadas da crista ilíaca de ratos Wistar-Kyoto, isoladas pelo método Ficoll e separadas em CTM-MO CD 45-90+ por citometria de fluxo. A caracterização dessas células como células tronco se deu por meio de análise da presença de marcadores de células tronco (gene REX-1 e antígeno de superfície CD 90), habilidade de formação de colônias e capacidade de expressar fenótipo osteogênico e adipogênico. Após a caracterização, as CTM-MO CD 45-90+ foram plaqueadas com um dos seguintes tratamentos: Grupo Controle Positivo - meio contendo 10% de soro fetal bovino (SFB); Grupo Controle Negativo - meio contendo 2% de SFB; Grupo APG meio contendo 2% de SFB associado a 25 μg/ml de APG; Grupo EMD meio contendo 2% de SFB associado a 25 μg/ml de EMD. A avaliação da proliferação celular foi realizada por ensaio de MTT em 3, 7, 10 e 14 dias. Após diferenciação osteoblástica, a atividade de fosfatase alcalina (ALP) e a avaliação da capacidade de diferenciação celular feita por análise genética (PCR) dos genes osterix (OSX), osteopontina (OPN), ALP e RUNX2 foram mensuradas em 7, 10 e 14 dias. A mineralização de matriz extracelular foi avaliada qualitativamente por meio de ensaios de Von Kossa e Alizarina Red e quantitativamente pela mensuração do teor de cálcio. CTM-MO CD 45-90+ apresentaram maior expressão de REX-1, maior quantidade de antígeno de superfície CD 90, e mais unidades formadoras de colônia do que CE-MO. Além disso, foram capazes de expressar fenótipos osteoblástico e adipogênico. EMD e APG não influenciaram a proliferação de CTM-MO CD 45-90+. A atividade de ALP não foi influenciada pelo EMD e foi reduzida no grupo APG. Ambos EMD e APG não influenciaram a expressão dos genes OSX e RUNX2 em 7 e 10 dias e reduziram em 14 dias. O EMD não influenciou a expressão gênica de ALP e OPN, mas a presença do gel de alginato de propileno glicol pareceu prover melhores resultados, com maiores expressões de OPN e ALP. Os grupo EMD e APG apresentaram menor mineralização de matriz extracelular em 28 dias comparados aos grupos controles. Conclui-se que o EMD não influenciou a proliferação, atividade de ALP e diferenciação de CTM-MO CD 45-90+, mas a presença do gel (APG) parece otimizar a diferenciação dessas células. Ambos, APG e EMD reduziram a mineralização de matriz extracelular. / Clinical studies have shown satisfactory results in the application of the enamel matrix derivate (EMD) on root surfaces. However, the complete regeneration of all lost periodontal tissues remains a challenge. To achieve this aim the use of bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSCs) in an appropriate vehicle in tissue engineering has been extensively studied. An interesting application of the EMD would be like a specific biological agent for BM-MSCs in order to promote cell differentiation and proliferation and assist in periodontal regeneration processes. Therefore, the aim of this study is evaluate the influence of Emdogain (EMD) and its vehicle (Propylene Glycol Alginate - PGA) in proliferation, differentiation and mineralization of CD 45-90+ bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSCs). Rat bone marrow stromal cells (BMSCs) were colleted from iliac crest of rat Wistar-Kyoto, isolated by Ficoll method and separated into CD 45-90+ BM-MSCs by flow cytometer. For cellular characterization the presence of stem cells markers (Rex-1 gen and surface antigen CD 90), capacity to form colonies (CFU) and to express osteoblast and adipogenic phenotype was assessed. Four experimental groups was plated with CD 45-90+ BM-MSCs: Positive Control group: media containing 10% of fetal bovine serum (FBS); (2) Negative Control Group: media containing 2% FBS; (3) EMD Group: 25 μg/ml EMD in 2% FBS media; (4) PGA Group: 25 μg/ml PGA in 2% FBS media. Cellular proliferation was assed in 3, 7, 10 and 14 days with MTT assay. After osteogenic induction, alkaline phosphatase (ALP) activity and gene expression of osterix (OSX), osteopontin (OPN), ALP and RUNX2 by RT-PCR was assessed at 7, 10 and 14 days. Extracellular matrix mineralization was evaluated at 21 and 28 days qualitatively by Von-kossa and Alizarina Red staining, and quantitatively by calcium content. CD 45-90+ BM-MSCs presented higher Rex-1 gen expression, more surface antigen CD 90 and more CFU/well than BMSCs, and expressed osteoblast and adipogenic phenotype. EMD and PGA not influenced proliferation of CD45-90+ BM13 MSCs. ALP activity was not influenced by EMD and was reduced in PGA group. EMD and PGA not influenced expression of OSX and RUNX2 in 7 and 10 days and reduced in 14 days. EMD not influenced ALP and OPN expression, but the presence of the gel provided better results, with higher expressions of ALP and OPN genes. Both PGA and EMD groups presented less mineralized ECM in 28 days. It concludes that EMD not influenced the proliferation, differentiation and ALP activity of CD 45-90+ BM-MSCs, but the presence of the gel (PGA) seems optimize the differentiation of these cells. Both reduced ECM mineralization.

Estudos clínicos tem mostrado resultados satisfatórios na aplicação da matriz derivada de esmalte (MDE) nas superfícies radiculares. Porém, a completa regeneração de todos os tecidos periodontais perdidos permanece como um desafio. Na tentativa de alcançar esse objetivo o uso de células tronco mesenquimais derivadas de medula óssea (CTM-MO) em um veículo apropriado na engenharia tecidual vem sendo bastante estudada. Uma interessante aplicação da MDE seria como um mediador biológico específico para CTMMO no intuito de promover a diferenciação e proliferação celular e auxiliar nos processos de regeneração periodontal. Sendo assim, o objetivo do presente estudo é avaliar a influência do Emdogain (EMD) e seu veículo alginato de propileno glicol (APG) na proliferação, diferenciação e mineralização de CTM-MO CD 45-90+. Células estromais de medula óssea (CE-MO) foram coletadas da crista ilíaca de ratos Wistar-Kyoto, isoladas pelo método Ficoll e separadas em CTM-MO CD 45-90+ por citometria de fluxo. A caracterização dessas células como células tronco se deu por meio de análise da presença de marcadores de células tronco (gene REX-1 e antígeno de superfície CD 90), habilidade de formação de colônias e capacidade de expressar fenótipo osteogênico e adipogênico. Após a caracterização, as CTM-MO CD 45-90+ foram plaqueadas com um dos seguintes tratamentos: Grupo Controle Positivo - meio contendo 10% de soro fetal bovino (SFB); Grupo Controle Negativo - meio contendo 2% de SFB; Grupo APG meio contendo 2% de SFB associado a 25 μg/ml de APG; Grupo EMD meio contendo 2% de SFB associado a 25 μg/ml de EMD. A avaliação da proliferação celular foi realizada por ensaio de MTT em 3, 7, 10 e 14 dias. Após diferenciação osteoblástica, a atividade de fosfatase alcalina (ALP) e a avaliação da capacidade de diferenciação celular feita por análise genética (PCR) dos genes osterix (OSX), osteopontina (OPN), ALP e RUNX2 foram mensuradas em 7, 10 e 14 dias. A mineralização de matriz extracelular foi avaliada qualitativamente por meio de ensaios de Von Kossa e Alizarina Red e quantitativamente pela mensuração do teor de cálcio. CTM-MO CD 45-90+ apresentaram maior expressão de REX-1, maior quantidade de antígeno de superfície CD 90, e mais unidades formadoras de colônia do que CE-MO. Além disso, foram capazes de expressar fenótipos osteoblástico e adipogênico. EMD e APG não influenciaram a proliferação de CTM-MO CD 45-90+. A atividade de ALP não foi influenciada pelo EMD e foi reduzida no grupo APG. Ambos EMD e APG não influenciaram a expressão dos genes OSX e RUNX2 em 7 e 10 dias e reduziram em 14 dias. O EMD não influenciou a expressão gênica de ALP e OPN, mas a presença do gel de alginato de propileno glicol pareceu prover melhores resultados, com maiores expressões de OPN e ALP. Os grupo EMD e APG apresentaram menor mineralização de matriz extracelular em 28 dias comparados aos grupos controles. Conclui-se que o EMD não influenciou a proliferação, atividade de ALP e diferenciação de CTM-MO CD 45-90+, mas a presença do gel (APG) parece otimizar a diferenciação dessas células. Ambos, APG e EMD reduziram a mineralização de matriz extracelular. / Clinical studies have shown satisfactory results in the application of the enamel matrix derivate (EMD) on root surfaces. However, the complete regeneration of all lost periodontal tissues remains a challenge. To achieve this aim the use of bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSCs) in an appropriate vehicle in tissue engineering has been extensively studied. An interesting application of the EMD would be like a specific biological agent for BM-MSCs in order to promote cell differentiation and proliferation and assist in periodontal regeneration processes. Therefore, the aim of this study is evaluate the influence of Emdogain (EMD) and its vehicle (Propylene Glycol Alginate - PGA) in proliferation, differentiation and mineralization of CD 45-90+ bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSCs). Rat bone marrow stromal cells (BMSCs) were colleted from iliac crest of rat Wistar-Kyoto, isolated by Ficoll method and separated into CD 45-90+ BM-MSCs by flow cytometer. For cellular characterization the presence of stem cells markers (Rex-1 gen and surface antigen CD 90), capacity to form colonies (CFU) and to express osteoblast and adipogenic phenotype was assessed. Four experimental groups was plated with CD 45-90+ BM-MSCs: Positive Control group: media containing 10% of fetal bovine serum (FBS); (2) Negative Control Group: media containing 2% FBS; (3) EMD Group: 25 μg/ml EMD in 2% FBS media; (4) PGA Group: 25 μg/ml PGA in 2% FBS media. Cellular proliferation was assed in 3, 7, 10 and 14 days with MTT assay. After osteogenic induction, alkaline phosphatase (ALP) activity and gene expression of osterix (OSX), osteopontin (OPN), ALP and RUNX2 by RT-PCR was assessed at 7, 10 and 14 days. Extracellular matrix mineralization was evaluated at 21 and 28 days qualitatively by Von-kossa and Alizarina Red staining, and quantitatively by calcium content. CD 45-90+ BM-MSCs presented higher Rex-1 gen expression, more surface antigen CD 90 and more CFU/well than BMSCs, and expressed osteoblast and adipogenic phenotype. EMD and PGA not influenced proliferation of CD45-90+ BM13 MSCs. ALP activity was not influenced by EMD and was reduced in PGA group. EMD and PGA not influenced expression of OSX and RUNX2 in 7 and 10 days and reduced in 14 days. EMD not influenced ALP and OPN expression, but the presence of the gel provided better results, with higher expressions of ALP and OPN genes. Both PGA and EMD groups presented less mineralized ECM in 28 days. It concludes that EMD not influenced the proliferation, differentiation and ALP activity of CD 45-90+ BM-MSCs, but the presence of the gel (PGA) seems optimize the differentiation of these cells. Both reduced ECM mineralization.

Orientador: Sérgio Lucio Pereira de Castro Lopes / Resumo: O objetivo deste estudo foi comparar as possíveis alterações em parâmetros geométricos dimensionais das lesões de furca em molares superiores - área máxima de abertura da lesão (AMA), as angulações formadas entre as raízes (ANG), o volume e densidade da lesão (VDL) e a presença e altura de defeitos infraósseos relacionados com a lesão (DIO) – obtidos em imagens por tomografia computadorizada de feixe cônico (TCFC), de pacientes acometidos por periodontite grau C, após a terapia regenerativa com a utilização de proteínas derivadas da matriz do esmalte (EMD). Para tal, foram estudados 02 grupos: controle (cirurgia) (n=17) e grupo teste (cirurgia+EMD) (n=17). Adicionalmente, foi estudada a correlação entre os parâmetros e o sucesso da terapia adotada, avaliando-se a redução da profundidade de sondagem (∆PS) e o ganho do nível de inserção clínica horizontal (∆NICH). Utilizou-se os softwares OnDemand3D (Cybermed, Seul, Coréia do Sul) e itk-SNAP 3.4.0 (University of North Carolina, Chapel Hill, NC, EUA) para avaliação das imagens de TCFC. Para análise das características demográficas foram realizados Teste T, Mann-Whitney Rank Sum Test e Qui-Quadrado, indicando não haver diferenças estatísticas entre idade, número de dentes analisados e sexo (p>0,05). Os testes ANOVA e Teste T foram aplicados no intuito de estudar os parâmetros clínicos (∆PS e ∆NICH) no baseline e após 06 meses de tratamento nos dois grupos, não sendo observadas diferenças estatisticamente significantes entre os gr... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study is to compare the possible changes on geometric dimensional parameters of furcation lesions in maxillary molars - maximum area of lesion opening (AMO), angulations formed between roots (ANG), volume and density of the lesion (VDL) and the presence and height of lesion-related infra-osseous defects (DIO) - obtained on cone beam computed tomography (CBCT) images of patients with grade C periodontitis after regenerative therapy using enamel matrix derivative proteins (EMD). To this end, 02 groups were analyzed: control (surgery) (n = 17) and test group (surgery + EMD) (n = 17). Additionally, the correlation between the parameters and the success of the adopted therapy was studied, and the reduction of the depth pocket (ΔPD) and the relative horizontal clinical attachment level (ΔHCAL) were evaluated. Both software OnDemand3D (Cybermed, Seoul, South Korea) and the itk-SNAP 3.4.0 (University of North Carolina, Chapel Hill, NC, USA) were used to evaluate the CBCT images. In order to analyze the demographic characteristics, Mann-Whitney Rank Sum Test and Chi-Square were used, indicating that there were no statistical differences between age, number of teeth analyzed and gender (p> 0.05). The ANOVA and T-tests were applied in order to study the clinical parameters (ΔPD and ΔHCAL) at the baseline and after 06 months of treatment in both groups, no statistically significant differences were observed between the groups in both times (p > 0.05). The Pearson’s ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A Subtração Radiográfica Digital (SRD) vem sendo vastamente utilizada para inúmeros fins em Odontologia. Uma de suas aplicações é a avaliação do resultado radiográfico de procedimentos regenerativos. Este estudo avaliou radiograficamente defeitos infra-ósseos de 2 ou 3 paredes tratados com a proteína derivada da matriz do esmalte (PME) e/ou o retalho de espessura total reposto (RET). Foram selecionados 11 pacientes (3 ? / 8 ?) com periodontite crônica apresentando 2 ou mais defeitos. Antes da cirurgia e após 1 ano foram coletados os dados clínicos e radiográficos. Para a padronização radiográfica foi utilizado um posicionador modificado. Revelou-se os filmes numa processadora automática. As películas foram digitalizadas (500dpi/8bits) em um escaner (SprintScan 35 Plus - Polaroid). Através do programa AxioVision v 3.0 (Carl Zeiss) mediu-se as distâncias da JEC à crista óssea (CO), ao fundo do defeito (FD). Para criar uma escala milimétrica e calibrar a mensuração foi utilizada uma tela quadriculada (2 x 2 mm). As porcentagens de mudança óssea (MO) também foram calculadas. Os resultados mostraram perda da CO de 1,8 mm para PME (MO = -20,93%), revelando diferença estatística neste grupo (p<0,02), e de 0,9 mm para RET (MO = -10,71%), sem diferença entre os grupos. Observou-se maior preenchimento do FD em RET (1,1 mm; MO = 8,14%) do que em PME (-0,6 mm; MO = -3,92%), com diferença entre os grupos (p<0,01). Dentro das limitações deste estudo, conclui-se que através da análise por SRD linear o tratamento convencional de defeitos infra-ósseos humanos promoveu melhores resultados quando comparado à aplicação da PME. / Digital Subtraction Radiographic (DSR) has been widely used for several purposes in Dentistry. Among them is the radiographic evaluation of the results of regenerative procedures. This study evaluated radiographically 2 and 3-wall infra-bony defects which were treated with matrix derivative enamel protein (PME) and/or repositioned flap (RET). Eleven patients (3 ? / 8 ?) with chronic periodontitis were selected, presenting 2 or more defects. Clinical and radiographic data were collected before surgery. A modified filmholder was used to take standardized radiographs. X-ray were developed using an automatic machine. The films were digitized (500dpi/8bits) with the scanner SprintScan 35 Plus (Polaroid). The software AxioVision v 3.0 (Carl Zeiss) was used to measure the distances from the JEC to the alveolar crest (CO), to the bottom of the defect (FD). A grid (2 x 2 mm) was used to establish a milimetric scale after calibration. The amount of bone changes (MO) was also calculated. Results have shown loss of bone at the CO of 1,8 mm (PME) (MO = -20,93%), showing statistic significance (p<0,02), and of 0,9 mm to RET group (MO = -10,71%). No significant differences could be observed when groups were compared. A better fill was observed in the RET group (1,1 mm; MO = 8,14%) than in the PME group (-0,6 mm; MO = -3,92%), showing statistical significance between groups (p<0,01). In conclusion, radiographic analysis has shown that conventional treatment of human intra-bony defects promotes better results when compared to the application of PME.

A Subtração Radiográfica Digital (SRD) vem sendo vastamente utilizada para inúmeros fins em Odontologia. Uma de suas aplicações é a avaliação do resultado radiográfico de procedimentos regenerativos. Este estudo avaliou radiograficamente defeitos infra-ósseos de 2 ou 3 paredes tratados com a proteína derivada da matriz do esmalte (PME) e/ou o retalho de espessura total reposto (RET). Foram selecionados 11 pacientes (3 ? / 8 ?) com periodontite crônica apresentando 2 ou mais defeitos. Antes da cirurgia e após 1 ano foram coletados os dados clínicos e radiográficos. Para a padronização radiográfica foi utilizado um posicionador modificado. Revelou-se os filmes numa processadora automática. As películas foram digitalizadas (500dpi/8bits) em um escaner (SprintScan 35 Plus - Polaroid). Através do programa AxioVision v 3.0 (Carl Zeiss) mediu-se as distâncias da JEC à crista óssea (CO), ao fundo do defeito (FD). Para criar uma escala milimétrica e calibrar a mensuração foi utilizada uma tela quadriculada (2 x 2 mm). As porcentagens de mudança óssea (MO) também foram calculadas. Os resultados mostraram perda da CO de 1,8 mm para PME (MO = -20,93%), revelando diferença estatística neste grupo (p<0,02), e de 0,9 mm para RET (MO = -10,71%), sem diferença entre os grupos. Observou-se maior preenchimento do FD em RET (1,1 mm; MO = 8,14%) do que em PME (-0,6 mm; MO = -3,92%), com diferença entre os grupos (p<0,01). Dentro das limitações deste estudo, conclui-se que através da análise por SRD linear o tratamento convencional de defeitos infra-ósseos humanos promoveu melhores resultados quando comparado à aplicação da PME. / Digital Subtraction Radiographic (DSR) has been widely used for several purposes in Dentistry. Among them is the radiographic evaluation of the results of regenerative procedures. This study evaluated radiographically 2 and 3-wall infra-bony defects which were treated with matrix derivative enamel protein (PME) and/or repositioned flap (RET). Eleven patients (3 ? / 8 ?) with chronic periodontitis were selected, presenting 2 or more defects. Clinical and radiographic data were collected before surgery. A modified filmholder was used to take standardized radiographs. X-ray were developed using an automatic machine. The films were digitized (500dpi/8bits) with the scanner SprintScan 35 Plus (Polaroid). The software AxioVision v 3.0 (Carl Zeiss) was used to measure the distances from the JEC to the alveolar crest (CO), to the bottom of the defect (FD). A grid (2 x 2 mm) was used to establish a milimetric scale after calibration. The amount of bone changes (MO) was also calculated. Results have shown loss of bone at the CO of 1,8 mm (PME) (MO = -20,93%), showing statistic significance (p<0,02), and of 0,9 mm to RET group (MO = -10,71%). No significant differences could be observed when groups were compared. A better fill was observed in the RET group (1,1 mm; MO = 8,14%) than in the PME group (-0,6 mm; MO = -3,92%), showing statistical significance between groups (p<0,01). In conclusion, radiographic analysis has shown that conventional treatment of human intra-bony defects promotes better results when compared to the application of PME.

O receptor ativado por protease do tipo 1 (PAR1) foi o primeiro membro clonado da família de receptores acoplados à proteína G. Sua ativação tem sido associada ao reparo tecidual e cicatrização óssea. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da ativação do PAR1 nas atividades osteogênica e cementogênica de células mesenquimais do ligamento periodontal (CMLP). CMLP obtidas de 3 indivíduos foram cultivadas e tratadas com meio clonogênico (MC) ou meio osteogênico (MO) por 2, 7 e 14 dias. Depósitos de cálcio, concentração de cálcio (sobrenadante), atividade de fosfatase alcalina (ALP), proliferação celular, expressão gênica (qPCR) e níveis proteicos (ELISA) de fatores osteogênicos e cementogênicos foram avaliados na presença de trombina, agonista do PAR1 ou antagonista do PAR1. A ativação do PAR1 levou ao aumento da formação de depósitos de cálcio (p<0,05), o que foi associado ao aumento da concentração de cálcio (p<0,05), atividade da ALP (p<0,05) e proliferação celular (p<0,05). Além disso, os ensaios qPCR e ELISA mostraram que a ativação do PAR1 pode aumentar a expressão gênica de Runx2, OPG e CEMP1 (p<0,05) e níveis proteicos de Runx2 e OPG (p<0,05). Em conclusão, nossos resultados demonstram que a ativação de PAR1 aumenta as atividades osteogênica e cementogênica de CMLP. / Protease activated receptor 1 (PAR1) was the first cloned member of the G protein-coupled receptor family. Its activation has been associated to tissue repair and bone healing. The aim of the present study was to evaluate the effect of PAR1 activation on the osteogenic and cementogenic activities of human periodontal ligament stem cells (HPLSC). HPLSC obtained from 3 subjects and treated with a control medium or with an osteogenic medium for 2, 7 and 14 days. Calcium deposits, calcium concentration (supernatant), alkaline phosphatase activity (ALP), cell proliferation and gene (qPCR) and protein expression (ELISA assay) of osteogenic and cementogenic factors were assessed in the presence of thrombin, PAR1 specific agonist peptide or PAR1 antagonist peptide. The activation of PAR1 led to increased formation of calcium deposits (p<0.05), which was associated to increased calcium concentration (p<0.05), ALP activity (p<0.05) and cell proliferation (p<0.05). Further, qPCR and ELISA assay showed that activation of PAR1 may increase gene expression of Runx2, OPG and CEMP1 (p<0.05) and protein levels of Runx2 and OPG (p<0.05). In conclusion, our results demonstrate that PAR1 activation increases osteogenic and cementogenic activities of HPLSC.

Epithelial rest cells of Malassez (ERM) are small groups of epithelial cells within the periodontal ligament closely approximated to the radicular cementum surface. The cells have a high nuclear/cytoplasm ratio. In oblique sections of the periodontal ligament, the cell rests can be seen, not as isolated groups of cells but as a network, similar to a fish-net, surrounding the root. The function of the ERM is unknown and their participation in some dental pathological conditions is still controversial. Some new publications have described the isolation of ERM from human periodontal ligaments. To date no publications have described the expression of bone-related proteins by ERM. ERM were cultured and isolated from porcine periodontal ligaments (chapter 2). An immunohistochemical study was carried out in rat porcine and human periodontal sections using AE1/AE3 antibody. The expression of cytokeratins by ERM was demonstrated in all species (chapter 3). Characterization and identification of ERM was achieved by Transmission Electron Microscopy (TEM), immunohistochemistry and Western blot. The results demonstrated the epithelial nature of these cells obtained from the mid radicular third of porcine first deciduous molars (chapter 4). An in vitro study using a semi quantitated RT-PCR technique was carried out in four different types of porcine periodontal cells (GF, PDLF, ERM and alveolar bone cells). These cell types were compared for the expression of the bone related proteins osteopontin and bone sialoprotein. The strongest expression of osteopontin was for the ERM compared to alveolar bone cells, PDLF and GF. These results demonstrated for the first time the expression of osteopontin from cultured porcine ERM suggesting a possible role of these cells in cementogenesis (chapter 5). Finally, emdogain (EMD), an enamel matrix derivative protein, was utilized at different concentrations to stimulate periodontal ligament cells and determine its role in proliferation, attachment and by RT-PCR expression of osteopontin or bone sialoprotein in vitro (chapter6). EMD demonstrated proliferative and attachment responses in a dose dependent manner. EMD stimulated the expression of OPN m RNA by porcine ERM and alveolar bone cells. The results contribute to explaining the different regenerative events associated with EMD in periodontal regenerative therapy. The findings of this study contribute to a broader understanding of possible functions of the ERM and suggests a role for these cells in cementogenesis by their strong OPN expression.