abstract / Biological Sciences / Doctoral / Doctor of Philosophy

Thèses (Ph.D.)--Université de Sherbrooke (Canada), 1997. / Titre de l'écran-titre (visionné le 20 juin 2006). Publié aussi en version papier.

Thèses (M.Sc.)--Université de Sherbrooke (Canada), 1999. / Titre de l'écran-titre (visionné le 20 juin 2006). Publié aussi en version papier.

Thèses (M.Sc.)--Université de Sherbrooke (Canada), 2002. / Titre de l'écran-titre (visionné le 20 juin 2006). Publié aussi en version papier.

Thesis (Ph. D.)--University of Wisconsin--Madison, 1935. / Typescript. Includes abstract and vita. eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

abstract / Biological Sciences / Doctoral / Doctor of Philosophy

Les phosphatases CDC25 jouent un rôle important dans la progression du cycle cellulaire. En outre, une surexpression des CDC25 a été rapportée dans de nombreux cancers, notamment dans le cancer du sein, et est souvent corrélée à un pronostic défavorable. Les CDC25 sont constituées de trois isoformes : A, B et C codées par des gènes distincts, tous trois soumis à un mécanisme d’épissage alternatif. Quelques études ont suggéré que certains variants d’épissage de CDC25 pourraient être plus impliqués dans les cancers que d’autres, mais aucune étude de ce type n’a jusqu’à présent été menée dans le cancer du sein. Le premier aspect de cette étude, à visée clinique, consiste donc en l’évaluation de la proportion de différents variants d’épissage de CDC25 dans le cancer du sein, dans l’optique de développer un nouvel outil pronostique. Cette étude a été réalisée sur deux modèles. D’une part, différentes lignées cellulaires cancéreuses mammaires ont été caractérisées concernant l’expression des variants de CDC25 grâce à la mise au point d’une méthode de RT-PCR quantitative inédite. De manière intéressante, nous avons observé une surexpression des transcrits A2 et B2 et une augmentation du rapport C5/C1 dans les cellules résistantes aux traitements anticancéreux, laissant supposer un lien entre l’expression de ces variants et le phénotype de résistance. D’autre part, cette étude a été étendue à la détermination de l’expression des variants de CDC25 dans des tissus mammaires tumoraux par comparaison à celle des tissus péritumoraux appariés. Les résultats de PCR quantitative obtenus pour les 75 paires de tissus testées ont mis en évidence une surexpression de CDC25A dans 64% des tumeurs, principalement due au variant A1 (69%) ; de CDC25B dans 55% des tumeurs, en partie liée à l’expression des variants B1 et B2 (47% et 21% respectivement) ; et de CDC25C dans 75% des tumeurs, le variant C5 étant clairement plus impliqué que C1 (surexpression dans 86% et 43% des tumeurs respectivement). Nous avons finalement pu établir des corrélations entre l’expression des transcrits CDC25 et certaines caractéristiques anatomopathologiques des tumeurs, telles que le grade de la tumeur et un faible statut des récepteurs aux œstrogènes pour CDC25A et CDC25B et la taille de la tumeur pour CDC25C.Le second volet de ce projet consiste en une étude plus mécanistique portant sur la régulation de l’épissage des CDC25 en conditions de dommages à l’ADN. Le traitement de plusieurs lignées cellulaires de cancer du sein par différents agents génotoxiques (doxorubicine, camptothécine, étoposide, cisplatine et tert-butyl hydroperoxyde) induit une modification du profil d’épissage de CDC25C, consistant en une forte augmentation de la proportion du variant C5 par rapport à celle de C1 (au niveau de l’ARNm et des protéines). Cette régulation a lieu au cours de la réponse précoce aux dommages à l’ADN, avant la mise en place de l’apoptose et est associée à un arrêt du cycle cellulaire. Nous avons par ailleurs montré que cette modulation de l’épissage de CDC25C est dépendante des kinases ATM/ATR et indépendante de p53. Ces résultats ont permis de mettre en lumière un mécanisme additionnel de réponse cellulaire à un stress génotoxique dans les cellules de cancer du sein. / CDC25 phosphatases play an important role in cell cycle progression. Moreover, an overexpression of CDC25 was reported in numerous cancers, particularly in breast cancer, and is often correlated with a poor prognosis. CDC25 are represented by three isoforms: A, B and C encoded by distinct genes, all three submitted to an alternative splicing mechanism. Few studies suggested that some CDC25 splicing variants could be more involved in cancers than others, but no such study has so far been conducted in breast cancer.The first aspect of this study, referred to clinic, consists in the evaluation of different CDC25 splicing variants proportion in breast cancer, from the perspective of developing a new prognostic tool. This study was performed on two models. On the one hand, several mammary cancerous cell lines were characterized concerning CDC25 variants expression thanks to the development of a novel quantitative RT-PCR method. Interestingly, we observed an overexpression of A2 and B2 transcripts and an increase of C5/C1 ratio in multidrug resistant cell lines, suggesting a link between the expression of these variants and the resistance phenotype. On the other hand, this study was extended to the determination of CDC25 variants expression in mammary tumoral tissues in comparison to that of matched peritumoral tissues. Quantitative PCR results obtained for the 75 pairs of tissues tested showed an overexpression of CDC25A in 64% of tumors, mainly due to A1 variant (69%); of CDC25B in 55% of tumors, partially linked to B1 and B2 variants expression (47% and 21% respectively); and of CDC25C in 75% of tumors, the C5 variant being clearly more involved than C1 (overexpression in 86% and 43% respectively). We have finally established correlations between CDC25 transcripts expression and some tumor characteristics, as the tumor grade and a lack of estrogens receptors for CDC25A and CDC25B and the tumor size for CDC25C.The second part of this project consists in a mechanistic study regarding the regulation of CDC25 splicing in DNA damage conditions. The treatment of several breast cancer cell lines with different genotoxic agents (doxorubicin, camptothecin, etoposide, cisplatin and tert-butyl hydroperoxide) induces a modification of CDC25C splicing profile, consisting in a large increase in C5 variant proportion compared to that of C1 (both at mRNA and protein levels). This regulation occurs during the early response to DNA damage, before the onset of apoptosis and is associated with a cell cycle arrest. We have also shown that this modulation of CDC25C splicing is dependent of ATM/ATR kinases and independent of p53. Finally, these results allowed to highlight an additional regulation pathway in the cellular response to genotoxic stress in breast cancer cells.

Thesis (M.S.)--Ohio State University, 1980. / Includes bibliographical references (leaves 36-39). Available online via OhioLINK's ETD Center.

Thesis (Ph. D.)--Florida State University, 2006. / Advisor: Thomas A. Houpt, Florida State University, College of Arts and Sciences, Dept. of Biological Science. Title and description from dissertation home page (viewed Sept. 22, 2006). Document formatted into pages; contains xi, 102 pages. Includes bibliographical references.

La phosphatase PPEF1 (protein phosphatase with EF-hand domain 1) est impliquée dans plusieurs processus cellulaires chez les mammifères comme la réponse aux stress, la survie cellulaire et la prolifération. Cette protéine est présente de manière universelle chez les eucaryotes et elle est majoritairement exprimée dans le cerveau des tissus fœtaux et dans les testicules. Une expérience ayant pour but d’étudier le rôle de la calmoduline dans les mécanismes entourant l’activité des spermatozoïdes nous a permis de découvrir cette phosphatase. PPEF1 n’a jamais été caractérisée dans un contexte reproductif, et a été très peu étudiée de manière plus générale comparativement aux autres phosphatases. Cette étude vise à élucider le rôle de cette phosphatase dans les spermatozoïdes et à vérifier notre hypothèse selon laquelle elle pourrait être impliquée dans la motilité et la capacitation des spermatozoïdes. Les résultats obtenus démontrent la présence de cette protéine et de ses transcrits dans les testicules et les spermatozoïdes. PPEF1 est localisée aux membranes et palmitoylée ; la protéine est relocalisée dans les spermatozoïdes au cours de leur capacitation. L’immunoprécipitation de PPEF1 a permis d’identifier des interacteurs possibles, impliqués dans les processus biologiques de capacitation et de motilité des spermatozoïdes, de même que dans l’interaction avec l’ovocyte. L’immunoprécipitation de PPEF1, de même qu’une protéine recombinante, nous ont permis de déterminer que PPEF1 possède une activité phosphatase. Les résultats obtenus corroborent l’hypothèse de départ. Davantage d’études seront toutefois nécessaires pour déterminer les cibles de déphosphorylation et les interacteurs de PPEF1 dans les spermatozoïdes. Il s’agit d’une première étude sur la phosphatase PPEF1 dans un contexte reproductif. / PPEF1 phosphatase (protein phosphatase with EF-hand domain 1) is involved in several cellprocesses such as stress response, cell survival and proliferation. This protein is ubiquitously expressed in eukaryotes, mostly in brain fetal tissues and in testis. A study to unravel the role ofcalmodulin in sperm function led us to the discovery of this phosphatase in spermatozoa. PPEF1 hasnever been studied in a reproductive context and has been poorly described compared to other phosphatases. The purpose of this study is to understand the role of this phosphatase in spermatozoa .Our hypothesis is that PPEF1 is involved in sperm motility and capacitation. Results show the presence of this protein and its transcript variants in testis and sperm cells. PPEF1 localizes to sperm membranes and is palmitoylated; the protein is relocated in spermatozoa during capacitation. Immunoprecipitation of PPEF1 led to the identification of putative interactors that are involved inbiological processes of capacitation and motility of spermatozoa, as well as in sperm-oocyte interaction. This protein shows a phosphatase activity when immunoprecipitated; it is also the case of a PPEF1 recombinant protein. Our results corroborate the initial hypothesis. Other studies will benecessary to identify the proteins de phosphorylated by PPEF1 and to confirm its interactions withother proteins in spermatozoa. It is the first study on the phosphatase PPEF1 in a reproductive context.