La pirazinamida (PZA) es una droga antituberculosa de primera línea, presenta gran actividad in vivo, sin embargo in vitro no es evidente a menos que el pH del medio sea ácido, lo que hace que la susceptibilidad sea difícil de determinar por métodos convencionales. Por lo tanto, el objetivo del presente estudio fue evaluar la prueba molecular Polimorfismo Conformacional de la Hebra simple de ADN (SSCP) en cepas clínicas de Mycobacterium tuberculosis, así como comparar su desempeño con otras pruebas como son el BACTECÔ-460TB, el test de Wayne y el secuenciamiento. Se utilizó la prueba molecular del SSCP para la determinación de la susceptibilidad a PZA trabajando con 157 aislamientos clínicos de M. tuberculosis provenientes del Área de Tuberculosis del Laboratorio de Enfermedades Infecciosas de la Universidad Peruana Cayetano Heredia.

La pirazinamida (PZA) es una droga antituberculosa de primera línea, presenta gran actividad in vivo, sin embargo in vitro no es evidente a menos que el pH del medio sea ácido, lo que hace que la susceptibilidad sea difícil de determinar por métodos convencionales. Por lo tanto, el objetivo del presente estudio fue evaluar la prueba molecular Polimorfismo Conformacional de la Hebra simple de ADN (SSCP) en cepas clínicas de Mycobacterium tuberculosis, así como comparar su desempeño con otras pruebas como son el BACTECÔ-460TB, el test de Wayne y el secuenciamiento. Se utilizó la prueba molecular del SSCP para la determinación de la susceptibilidad a PZA trabajando con 157 aislamientos clínicos de M. tuberculosis provenientes del Área de Tuberculosis del Laboratorio de Enfermedades Infecciosas de la Universidad Peruana Cayetano Heredia. / Tesis

Diseña un sistema que detecte al ácido pirazinoico (POA), el cual es producto del metabolismo de la bacteria y principio activo de la droga. Cuando una bacteria es sensible al tratamiento con pirazinamida, produce POA en los cultivos a determinado ratio, sin embargo, aquellas resistentes no producen o producen muy poco. Se logró ensamblar dos sistemas de detección, el Sistema I consistió en acoplar la proteína RpsA y su tmRNA a una nanopartícula magnética de estreptavidina a través del tmRNA biotinilado, mientras que el Sistema II, consistió en acoplar las mismas moléculas a una nanopartícula magnética de cobalto, pero a través de la cola de histidinas de la proteína RpsA. Estos sistemas fueron enfrentados de forma preliminar, a POA comercial. Como resultado se obtuvo que el primer sistema logró detectar hasta cinco picomoles del ácido, sin embargo, estos resultados no lograron ser reproducibles. El segundo sistema logró detectar hasta 750 picomoles del ácido, y se logró reproducir en dos ocasiones. Los sistemas fueron estables y demostraron estar ensamblados correctamente, sin embargo, la variabilidad en los resultados de detección de POA, aquí presentados, estarían indicando que la interacción entre el RpsA y el POA no es tan fuerte como se mencionó en estudios anteriores. El resultado de este trabajo estaría confirmando lo reportado en un último estudio publicado en Nature, el cual refuta la hipótesis de que el ácido pirazinoico se une a RpsA con gran afinidad. / Innóvate Perú / Tesis