Made available in DSpace on 2014-06-12T23:03:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo941_1.pdf: 2032725 bytes, checksum: 59b6e78ff23fbaeaaa874c8320711bc3 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Neste trabalho verificamos o potencial carcinogênico de alguns agrotóxicos utilizados na agricultura. Para a previsão da carcinogenicidade foram realizados cálculos computacionais semi-empíricos RM1 de parâmetros eletrônicos como afinidade eletrônica (EA), energia de interação (∆EH-L), momento dipolo (μ), atração eletrostática (∆q) e calor de formação (Hf). Utilizamos o modelo proposto por Pavão e Leão para descrever a interação carcinógeno-DNA. Seguindo a teoria da ressonância não sincronizada das ligações de valência (RVB) de L. Pauling, a ligação carcinógeno-DNA é descrita como resultado de uma reação de transferência de elétrons entre orbitais de fronteira das espécies envolvidas. Utilizando uma técnica multivariada, a Análise de Componentes Principais (ACP), foi possível correlacionar os parâmetros eletrônicos com o potencial carcinogênico

RESUMO A grande prevalência de câncer bucal está relacionada à ação de agentes e de fatores físicos e químicos. As substâncias químicas têm grande importância na indução de cânceres em humanos. Existe grande preocupação em relação aos agentes clareadores à base de peróxido de carbamida a 10%, usados com freqüência na técnica de clareamento caseiro de dentes vitalizados. A preocupação deve-se ao potencial carcinogênico dessas substâncias. Com o efeito somatório sobre as células, toda e qualquer substância deve ser avaliada quanto ao seu potencial carcinogênico sobre a mucosa bucal. Com a intenção de avaliar a proliferação celular nos carcinomas epidermóides desenvolvidos no modelo DMBA-indução associado ao peróxido de carbamida 10%, utilizou-se um dos marcadores biológicos de proliferação celular, que é o método histoquímico pela técnica AgNOR. Foram avaliados quantitativamente os carcinomas epidermóides desenvolvidos no modelo DMBA-indução + peróxido de carbamida 10%, observando-se que: nos grupos I, II, III e VII, onde não houve proliferação celular compatível com alteração neoplásica, o número de ocorrências de NORs/núcleo foi menor que nos demais grupos; no grupo IV (DMBA), o número de ocorrência de NORs/núcleo foi menor que nos grupos V e VI (peróxido de carbamida 10% + DMBA). O número de ocorrência de NORs/núcleo foi maior nos grupos V (DMBA + Opalescence) e VI (DMBA + White & Brite), em que foram desenvolvidos carcinomas, caracterizando maior proliferação das células e maior grau de malignidade dos carcinomas epidermóides desenvolvidos. Tais conclusões evidenciaram que a proliferação celular nos grupos associados (clareadores + DMBA) foi mais intensa que no grupo do carcinógeno (DMBA), possivelmente pelo efeito promotor dos agentes clareadores. Observou-se uma ação promotora dos clareadores dentais à base de peróxido de carbamida 10% no modelo estudado, com capacidade para potencializar carcinógenos, levando a um possível desenvolvimento neoplásico. / SUMMARY Oral squamous cell carcinoma is the mouth most prevalent malignancy, accouting for more than 90% of all oral malignancies. It also known that the development of oral cancer has a strong relationship with chemical and physical action of some agents that are in daily contact with oral mucosa as drugs, food, alcohol, tobacco and environmental factors. Oral carcinogenesis has a cumulative effect upon cells, every substance with potential risk of evidencing this malignant process showed be evaluated. The concern is about carcinogenic potential this chemical bleaching agents in the proliferation cells. The bleaching agents containing 10% carbamide peroxide are often used for vital teeth home bleaching and there is the risk of tissue damage from ingestion of the substance and contact with the oral mucosa during the bleaching process. The current study involve the evaluation of the cell proliferation and squamous cell carcinomas development in DMBA induction-model + 10% carbamide peroxide using biologic markers in the detection of incipient cellular alterations with histochemical method AgNOR, to investigate the relationship between the number of interphase silver-stained nucleolar organizer regions (AgNORs). The numbers of the NORs can be related to proliferative activity and the degree of the developed malignancy tumours. The quantitative analysis of the number of the NORs in the group I (acetone), II (Opalescence), III (White & Brite) and VII (destiled water) showed no cells proliferation compatible with neoplasic alterations. The occurrence of the number per nucleus was less than in the others groups. The groups IV (carcinogen DMBA), V (DMBA + 10% carbamide peroxide - Opalescence), VI (DMBA + 10% carbamide peroxide - White & Brite) showed the development micro-invasive and invasive carcinomas. The occurrence of the number of the NORs/nucleus was greater in those three groups than in the groups without carcinomas. The groups V (DMBA + Opalescence) and VI (DMBA + White & Brite) developed a greater of the occurrence of the number of the NORs per nucleus than in the group IV (DMBA). In the groups V and VI with developed invasive carcinomas showed growth cells proliferation and increase in the rate of the malignancy in the squamous cells carcinomas developed. This showed an cell proliferation of the groups (DMBA + 10% carbamide peroxide) is more intensive than in the group IV, probably by promoter effect of the bleaching agents. It was concluded that the bleaching agents based on 10% carbamide peroxide used in this study model, has a enhance promoter action, with capacity for carcinogens pottentialy and developed neoplasic alterations.

As membranas amnióticas humana, felina e canina representam uma boa fonte de célulastronco mesenquimais multipotentes. Sua obtenção não causa conflitos éticos, pois o âmnio é comumente descartado após o nascimento do indivíduo. Devido à característica inovadora da utilização de células-tronco na medicina regenerativa, diversos testes estão sendo realizados a fim de sanar dúvidas sobre possíveis complicações de seu emprego, tais como: infecções no ato da aplicação, deterioração da função tecidual e principalmente sobre o potencial tumorigênico das linhagens celulares. O teste tumoral foi negativo nas espécies felina e humana, viabilizando a utilização deste tipo de célula nestas espécies, porém, o mesmo teste foi realizado em cães anteriormente com resultado positivo para formação tumoral. A proposta deste estudo é traçar um perfil comparativo sobre as características de cultivo, marcadores moleculares e ensaio tumoral na membrana amniótica canina e felina. Para a obtenção das células, foram utilizadas placentas oriundas de 9 gestações caninas nas idades entre 35 a 45 dias, 1 gestação canina de 25 dias e 3 gestações felinas nas idades de 35 a 45 dias por procedimento de cesariana seguida de castração em clínicas da região de Pirassununga. O âmnio foi separado manualmente das outras membranas fetais e acondicionado em placas de Petri, submetido à maceração manual, para posterior cultivo em meio adequado para cultura de células mesenquimais. Após o estabelecimento do cultivo, foram realizadas análises de imunocitoquímica para marcadores mesenquimais (CD73, CD90 e CD105) e tumoral (CD30) sendo que as células de origem canina mostraram-se positivas para os marcadores mesenquimais CD73, CD90 e para o marcador tumoral CD30 e as de origem felina mostraram-se positivas para os marcadores mesenquimais CD73, CD90 e CD105. O ensaio in vivo realizado com a inoculação das CT\'s canina e felina em camundongos imunossuprimidos (Balb/c NUDE) pelas vias subcutânea, intramuscular e intraperitoneal não demonstrando formação tumoral após 60 dias da inoculação. Foram realizadas análises de citometria de fluxo onde as maiores quantificações nas células caninas foram os marcadores de pluripotência (OCT-4 e SOX2, com 59,4% e 34,35% respectivamente), e felinas foram os marcadores mesenquimais (CD73 e CD90, com 32,58% e 23,48%). A análise de qPCR das células felinas demonstrou baixa, expressão de todos os genes testados (mesenquimais, pluripotência, hematopoiético e teratogênico). Já as células de origem canina, demonstraram expressão maior do gene mesenquimal (CD90) e do gene de pluripotência (SOX2 e OCT4). Os achados deste estudo demonstraram por ambas as técnicas (citometria e qPCR) que as células da membrana amniótica felina tem um potencial mesenquimal mais evidente do que as caninas e ambas não apresentaram potencial tumorigênico quando submetidas ao ensaio in vivo. / Human, feline and canine amniotic membranes are a good source of multipotent mesenchymal stem cells. The obtaining does not cause ethical conflict because the amnion is usually discarded after the birth. Due to the innovative feature of the use of stem cells in regenerative medicine, several tests are being conducted to answer some questions about possible complications of its use, such as infections during application, deterioration of tissue function and particularly on the carcinogenic potential of amniotic stem cells. Teratoma formation assays were proved negative in feline and human species, enabling the use of this type of cell in these species, however, the same test was performed in dogs previously and was positive for teratomas, condemning its application. The purpose of this study is to trace a molecular profile and detailed teratogenic test, comparing the canine and feline amniotic membrane model, since the experiments were favorable to the feline model, in order to find out where they differ to justify the new data to counteract the results of previous studies using canine amnion. To obtain cells, it were used placentas from 9 pregnant canines between 35 to 45 days of gestation, one placenta at 25 days from canine and 3 placentas from feline at 35 to 45 days. It was realized caesarean and followed ovarian salpingo hysterectomy at veterinarian clinics on Pirassununga region. The amnion was manually separated from the other fetal membranes and placed on Petri dishes. Then was made a manual maceration, later to be cultivated. After culture establishment were performed immunocytochemical analyzes for mesenchymal (CD73, CD90 and CD105) and teratogenic (CD30) markers. The canine cells were positive to the following markers: CD73, CD90 and CD30 and the feline cells were positive for CD73, CD90 and CD105. Teratogenic test was conducted by subcutaneous, intramuscular and intraperitoneal inoculation of the canine and feline stem cells, in immunosuppressed mice (Balb/c NUDE)and was not observed tumor formation after 60 days of inoculation. Flow cytometry analyzes were performed where the largest quantifications in canine cells were the genes of pluripotency (Oct-4 and Sox2, 59.4% and 34.35% respectively), and the feline were performed at the mesenchymal genes (CD73 and CD90, with 32.58% and 23.48%). PCR analysis of feline cells demonstrated low expression of all markers tested (mesenchymal, pluripotency, hematopoietic and teratogenic). The cells of canine origin, showed higher expression of mesenchymal gene (CD90) and pluripotencys genes (SOX2 and OCT4). The findings of this study demonstrated for both techniques (flow cytometry and qPCR) that feline amniotic membrane cells has a more potential than the canine amniotic membrane cells. Both showed no tumorigenic potential when submitted to in vivo test.

RESUMO A grande prevalência de câncer bucal está relacionada à ação de agentes e de fatores físicos e químicos. As substâncias químicas têm grande importância na indução de cânceres em humanos. Existe grande preocupação em relação aos agentes clareadores à base de peróxido de carbamida a 10%, usados com freqüência na técnica de clareamento caseiro de dentes vitalizados. A preocupação deve-se ao potencial carcinogênico dessas substâncias. Com o efeito somatório sobre as células, toda e qualquer substância deve ser avaliada quanto ao seu potencial carcinogênico sobre a mucosa bucal. Com a intenção de avaliar a proliferação celular nos carcinomas epidermóides desenvolvidos no modelo DMBA-indução associado ao peróxido de carbamida 10%, utilizou-se um dos marcadores biológicos de proliferação celular, que é o método histoquímico pela técnica AgNOR. Foram avaliados quantitativamente os carcinomas epidermóides desenvolvidos no modelo DMBA-indução + peróxido de carbamida 10%, observando-se que: nos grupos I, II, III e VII, onde não houve proliferação celular compatível com alteração neoplásica, o número de ocorrências de NORs/núcleo foi menor que nos demais grupos; no grupo IV (DMBA), o número de ocorrência de NORs/núcleo foi menor que nos grupos V e VI (peróxido de carbamida 10% + DMBA). O número de ocorrência de NORs/núcleo foi maior nos grupos V (DMBA + Opalescence) e VI (DMBA + White & Brite), em que foram desenvolvidos carcinomas, caracterizando maior proliferação das células e maior grau de malignidade dos carcinomas epidermóides desenvolvidos. Tais conclusões evidenciaram que a proliferação celular nos grupos associados (clareadores + DMBA) foi mais intensa que no grupo do carcinógeno (DMBA), possivelmente pelo efeito promotor dos agentes clareadores. Observou-se uma ação promotora dos clareadores dentais à base de peróxido de carbamida 10% no modelo estudado, com capacidade para potencializar carcinógenos, levando a um possível desenvolvimento neoplásico. / SUMMARY Oral squamous cell carcinoma is the mouth most prevalent malignancy, accouting for more than 90% of all oral malignancies. It also known that the development of oral cancer has a strong relationship with chemical and physical action of some agents that are in daily contact with oral mucosa as drugs, food, alcohol, tobacco and environmental factors. Oral carcinogenesis has a cumulative effect upon cells, every substance with potential risk of evidencing this malignant process showed be evaluated. The concern is about carcinogenic potential this chemical bleaching agents in the proliferation cells. The bleaching agents containing 10% carbamide peroxide are often used for vital teeth home bleaching and there is the risk of tissue damage from ingestion of the substance and contact with the oral mucosa during the bleaching process. The current study involve the evaluation of the cell proliferation and squamous cell carcinomas development in DMBA induction-model + 10% carbamide peroxide using biologic markers in the detection of incipient cellular alterations with histochemical method AgNOR, to investigate the relationship between the number of interphase silver-stained nucleolar organizer regions (AgNORs). The numbers of the NORs can be related to proliferative activity and the degree of the developed malignancy tumours. The quantitative analysis of the number of the NORs in the group I (acetone), II (Opalescence), III (White & Brite) and VII (destiled water) showed no cells proliferation compatible with neoplasic alterations. The occurrence of the number per nucleus was less than in the others groups. The groups IV (carcinogen DMBA), V (DMBA + 10% carbamide peroxide - Opalescence), VI (DMBA + 10% carbamide peroxide - White & Brite) showed the development micro-invasive and invasive carcinomas. The occurrence of the number of the NORs/nucleus was greater in those three groups than in the groups without carcinomas. The groups V (DMBA + Opalescence) and VI (DMBA + White & Brite) developed a greater of the occurrence of the number of the NORs per nucleus than in the group IV (DMBA). In the groups V and VI with developed invasive carcinomas showed growth cells proliferation and increase in the rate of the malignancy in the squamous cells carcinomas developed. This showed an cell proliferation of the groups (DMBA + 10% carbamide peroxide) is more intensive than in the group IV, probably by promoter effect of the bleaching agents. It was concluded that the bleaching agents based on 10% carbamide peroxide used in this study model, has a enhance promoter action, with capacity for carcinogens pottentialy and developed neoplasic alterations.

As membranas amnióticas humana, felina e canina representam uma boa fonte de célulastronco mesenquimais multipotentes. Sua obtenção não causa conflitos éticos, pois o âmnio é comumente descartado após o nascimento do indivíduo. Devido à característica inovadora da utilização de células-tronco na medicina regenerativa, diversos testes estão sendo realizados a fim de sanar dúvidas sobre possíveis complicações de seu emprego, tais como: infecções no ato da aplicação, deterioração da função tecidual e principalmente sobre o potencial tumorigênico das linhagens celulares. O teste tumoral foi negativo nas espécies felina e humana, viabilizando a utilização deste tipo de célula nestas espécies, porém, o mesmo teste foi realizado em cães anteriormente com resultado positivo para formação tumoral. A proposta deste estudo é traçar um perfil comparativo sobre as características de cultivo, marcadores moleculares e ensaio tumoral na membrana amniótica canina e felina. Para a obtenção das células, foram utilizadas placentas oriundas de 9 gestações caninas nas idades entre 35 a 45 dias, 1 gestação canina de 25 dias e 3 gestações felinas nas idades de 35 a 45 dias por procedimento de cesariana seguida de castração em clínicas da região de Pirassununga. O âmnio foi separado manualmente das outras membranas fetais e acondicionado em placas de Petri, submetido à maceração manual, para posterior cultivo em meio adequado para cultura de células mesenquimais. Após o estabelecimento do cultivo, foram realizadas análises de imunocitoquímica para marcadores mesenquimais (CD73, CD90 e CD105) e tumoral (CD30) sendo que as células de origem canina mostraram-se positivas para os marcadores mesenquimais CD73, CD90 e para o marcador tumoral CD30 e as de origem felina mostraram-se positivas para os marcadores mesenquimais CD73, CD90 e CD105. O ensaio in vivo realizado com a inoculação das CT\'s canina e felina em camundongos imunossuprimidos (Balb/c NUDE) pelas vias subcutânea, intramuscular e intraperitoneal não demonstrando formação tumoral após 60 dias da inoculação. Foram realizadas análises de citometria de fluxo onde as maiores quantificações nas células caninas foram os marcadores de pluripotência (OCT-4 e SOX2, com 59,4% e 34,35% respectivamente), e felinas foram os marcadores mesenquimais (CD73 e CD90, com 32,58% e 23,48%). A análise de qPCR das células felinas demonstrou baixa, expressão de todos os genes testados (mesenquimais, pluripotência, hematopoiético e teratogênico). Já as células de origem canina, demonstraram expressão maior do gene mesenquimal (CD90) e do gene de pluripotência (SOX2 e OCT4). Os achados deste estudo demonstraram por ambas as técnicas (citometria e qPCR) que as células da membrana amniótica felina tem um potencial mesenquimal mais evidente do que as caninas e ambas não apresentaram potencial tumorigênico quando submetidas ao ensaio in vivo. / Human, feline and canine amniotic membranes are a good source of multipotent mesenchymal stem cells. The obtaining does not cause ethical conflict because the amnion is usually discarded after the birth. Due to the innovative feature of the use of stem cells in regenerative medicine, several tests are being conducted to answer some questions about possible complications of its use, such as infections during application, deterioration of tissue function and particularly on the carcinogenic potential of amniotic stem cells. Teratoma formation assays were proved negative in feline and human species, enabling the use of this type of cell in these species, however, the same test was performed in dogs previously and was positive for teratomas, condemning its application. The purpose of this study is to trace a molecular profile and detailed teratogenic test, comparing the canine and feline amniotic membrane model, since the experiments were favorable to the feline model, in order to find out where they differ to justify the new data to counteract the results of previous studies using canine amnion. To obtain cells, it were used placentas from 9 pregnant canines between 35 to 45 days of gestation, one placenta at 25 days from canine and 3 placentas from feline at 35 to 45 days. It was realized caesarean and followed ovarian salpingo hysterectomy at veterinarian clinics on Pirassununga region. The amnion was manually separated from the other fetal membranes and placed on Petri dishes. Then was made a manual maceration, later to be cultivated. After culture establishment were performed immunocytochemical analyzes for mesenchymal (CD73, CD90 and CD105) and teratogenic (CD30) markers. The canine cells were positive to the following markers: CD73, CD90 and CD30 and the feline cells were positive for CD73, CD90 and CD105. Teratogenic test was conducted by subcutaneous, intramuscular and intraperitoneal inoculation of the canine and feline stem cells, in immunosuppressed mice (Balb/c NUDE)and was not observed tumor formation after 60 days of inoculation. Flow cytometry analyzes were performed where the largest quantifications in canine cells were the genes of pluripotency (Oct-4 and Sox2, 59.4% and 34.35% respectively), and the feline were performed at the mesenchymal genes (CD73 and CD90, with 32.58% and 23.48%). PCR analysis of feline cells demonstrated low expression of all markers tested (mesenchymal, pluripotency, hematopoietic and teratogenic). The cells of canine origin, showed higher expression of mesenchymal gene (CD90) and pluripotencys genes (SOX2 and OCT4). The findings of this study demonstrated for both techniques (flow cytometry and qPCR) that feline amniotic membrane cells has a more potential than the canine amniotic membrane cells. Both showed no tumorigenic potential when submitted to in vivo test.