Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-05-18T12:44:39Z No. of bitstreams: 1 Soraya Farias de Andrade Freitas.pdf: 720574 bytes, checksum: 5bdec2199a6c7a1051ac90567718753f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-18T12:44:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soraya Farias de Andrade Freitas.pdf: 720574 bytes, checksum: 5bdec2199a6c7a1051ac90567718753f (MD5) Previous issue date: 2013-07-17 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Milk is a food of nutritional and functional importance for all phases of life; however, of all constituents, the fat and protein components are considered to be the most economical value within milk quality payment programs. This fact suggests a greater importance given to these constituents by the main actors of the milk production chain within the economic scenario (MADALENA, 2000). Dürr (2004) reports that milk fat and protein concentrations vary mainly depending on the nutritional management and genetic potential of the animals. As a consequence of the genetic differences responsible for the variation of 25% of the total milk production and 50% in the variations of fat, protein and non-greasy solids (GONYON et al., 1987) ). According to Bonfatti et al. (2010), it is estimated that the additive genetic variance for milk composition characteristics is between 14 and 39% of the total variance. In relation to the polymorphisms of the genes coding for the main milk proteins, such as caseins, β-Lg and α-La, these became markers of interest in milk production, composition and processing. They are excellent models for understanding the behavior of the dairy raw material during the industrial process, since they are closely related to the milk casein fraction, the main protein portion involved with the high yield in the production of cheeses and other derivatives. In addition, genetic polymorphisms of milk proteins are frequently used for the characterization of several breeds of animal production (CAROLI et al., 2010). In order to promote improvements in the genetics of milk production, composition and processing characteristics, research in the field of molecular biology has made it possible to map and identify genomic, transcriptomic and proteomic levels of polymorphisms that contribute to variations in milk composition , In this way, the process of selection of animals in breeding programs. In view of the above, the objective of this research was to study the genetic polymorphisms of kappa-casein and alpha-lactalbumin in cattle of the Girolando and Siboney races / O leite é um alimento de importância nutricional e funcional para todas as fases da vida, entretanto, de todos os constituintes, os componentes gordura e proteína são considerados os de maior valor econômico dentro dos programas de pagamento de leite por qualidade. Esse fato sugere uma maior importância dada a esses constituintes pelos principais atores da cadeia produtiva leiteira dentro do cenário econômico (MADALENA, 2000). Dürr (2004) relata que as concentrações de gordura e proteína do leite variam principalmente em função do manejo nutricional e potencial genético dos animais. Desta forma, como principal fator de variação têm-se os efeitos das diferenças genéticas responsáveis pela variação de 25% do total da produção de leite e 50% nas variações dos teores de gordura, proteína e sólidos não gordurosos (GONYON et al., 1987). Segundo Bonfatti et al. (2010), estima-se que a variância genética aditiva para as características de composição do leite encontra-se entre 14 e 39% da variância total. Com relação aos polimorfismos dos genes que codificam as principais proteínas do leite, como as caseínas, β-Lg e α-La, estes se tornaram marcadores de interesse na produção, composição e beneficiamento do leite. São excelentes modelos de compreensão do comportamento da matéria prima láctea durante o processo industrial, já que estão intimamente relacionados à fração caseínica do leite, principal porção proteica envolvida com o alto rendimento na produção de queijos e demais derivados. Além disso, os polimorfismos genéticos das proteínas lácteas são frequentemente utilizados para a caracterização de diversas raças de produção animal (CAROLI et al., 2010). Deste modo, para promover melhorias na genética das características de produção, composição e beneficiamento do leite, pesquisas no ramo da biologia molecular têm possibilitado realizar o mapeamento e identificação em nível genômico, transcriptômico e proteômico dos polimorfismos que contribuem para variações na composição do leite facilitando, desta forma, o processo de seleção dos animais em programas de melhoramento genético. Diante do exposto, o objetivo desta pesquisa foi estudar os polimorfismos genéticos da kappa-caseína e alfa-lactoalbumina em bovinos das racas Girolando e Siboney.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-06T14:55:01Z No. of bitstreams: 1 Vilma Sobral Bezerra.pdf: 3241045 bytes, checksum: 1dbe7e33df34dacca3124c036d6370bd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-06T14:55:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vilma Sobral Bezerra.pdf: 3241045 bytes, checksum: 1dbe7e33df34dacca3124c036d6370bd (MD5) Previous issue date: 2011-12-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Dairy proteins have bioactive peptides production great potential, however, their bioactivity is achieved only after enzymatic hydrolysis, which produces substances beneficial to health when incorporated into food or pharmaceuticals. Among them, casein has been used for this purpose. This study aims to determine peptide profile and amino acid sequence of bioactive peptides derived from Moxotó goat milk casein hydrolysis, using proteolytic enzymes such as trypsin, pepsin, papain and a protease extracted from Penicillium aurantiogriseum URM 4622. Enzymatic hydrolysis was performed using a statistical experimental design, which independent variables were pH, enzyme substrate (E: S), temperature and reaction time in Moxotó goat milk casein hydrolysis. Hydrolysis products were visualized in SDS-PAGE electrophoresis. Hydrolysates subjected to ultrafiltration (cut off 3000Da) were used to determine biological properties. Antioxidant activity was evaluated by ABTS + [2,2 '-Azin-bis (3-ethylbenzothiazoline) 6-sulfonic acid] method, using the pool of peptides (permeate <3000Da; retentate >3000Da). Antimicrobial activity was determined by the Clinical and Laboratory Standards Institute. Binding through the zinc solubility of zinc in the sample by Mass Spectrometry Inductively Coupled Plasma. Peptide profile and amino acid sequences were determined by mass spectrometry MALDI-TOF-MS/MS. The best hydrolysis degree (38.27%) was obtained with pepsin enzyme pH 3.0, 1:100 E: S, temperature of 40°C and 5 hours time reaction. However, a high hydrolysis degree precluded the use of these hydrolysates for bioactive peptides obtention. Casein tryptic hydrolysates demonstrated antioxidant activity up to 3242.3 μmol.L-1TROLOX/mg peptide in retentate (> 3000Da). By papain use, we obtained an activity up to 2329.6 μmol.L-1TROLOX /mg of peptide in permeate (<3000Da). The peptides produced by P. auratiogriseum protease action showed activity from 843.17 to 2587.30 μmol.L-1of Trolox / mg of 10 and 29% peptides hydrolysates, respectively, which were compatible with natural antioxidants, such as C vitamin and α-tocopherol. Goat casein tryptic hydrolysates demonstrated antimicrobial activity against Enterococcus faecalis ATCC 6057, Escherichia coli ATCC 2508, Klebisiela pneumoniae ATCC 29665, Bacillus subtilis ATCC 6633. Casein hydrolysates showed IC50 of 4.46 mg/g for zinc binding. Mass spectrometry MALDI TOF MS\MS allowed the visualization of caprine casein peptides in permeate (<3000Da), ranging from 568 to 2923 Da. It also showed LLYQEPVLGPV and HPINHQGLSPEVPNENLLR amino acids sequences for αs1 and β-casein, respectively, from casein tryptic hydrolysates; LLYQEPVLGPV sequences of β-casein, the NPWDQVK αs2 NENLL-casein and-casein in the αS1 casein hydrolysates by papain use; LLYQEPVLGPVRGPFPI β-casein sequence from casein hydrolysates obtained by the use of P. aurantiogriseum URM 4622 protease. The casein hydrolysates bioactive properties are referent to the prevalence of hydrophobic amino acids, which possibility of their use as bioactive peptides. / Proteínas lácteas apresentam grande potencial na produção de peptídeos bioativos. A caseína se destaca na produção de bioativos. Entretanto, a sua bioatividade só é conseguida após hidrólise enzimática, ao qual se produz substâncias benéficas à saúde quando incorporados em alimentos ou produtos farmacêuticos. O objetivo deste trabalho foi o de caracterizar e a avaliar atividades biológicas e determinando o perfil peptídico e a sequência de aminoácidos dos peptídeos bioativos obtidos a partir de hidrólise da caseína do leite de cabra Moxotó, usando enzimas proteolíticas tripsina, pepsina, papaína e protease extraída de Penicillium aurantiogriseum URM 4622. A hidrólise enzimática foi realizada através de planejamento experimental estatístico, os quais as variáveis independentes foram pH, relação enzima substrato (E:S), temperatura e tempo de reação na hidrólise da caseína do leite de cabra Moxotó. Os produtos de hidrólise foram visualizados em eletroforese SDS‑PAGE. Os hidrolisados submetidos à ultrafiltração (Cut off 3000Da) foram utilizados para determição das propriedades biológicas. A atividade antioxidante foi avaliada no pool de peptídeos, permeado (<3000Da) e retentado (>3000Da) usando-se o método ABTS+ [2,2’-azino-bis (3-etilbenzotiazolin) 6-ácido sulfônico]. A atividade antimicrobiana foi determinada pelo método do Clinical and Laboratory Standards Institute. O carreamento de zinco através da solubilidade do zinco na amostra através da Espectrometria de Massa em Plasma Indutivamente Acoplado. O perfil peptídico e as sequências de aminoácidos foram determinados por espectrometria de massa MALDI-TOF-MS/MS. O melhor grau de hidrólise (38,27%) foi obtido com a enzima pepsina usando pH 3,0, E:S de 1:100, 40ºC e 5 horas de reação. Entretanto, um alto grau de hidrólise impossibilitou o uso desses hidrolisados para obtenção de peptídeos bioativos. Os hidrolisados trípicos da caseína mostraram atividade antioxidante de até 3.242,3μmol.L-1TROLOX/mg de peptídeo no retentado (>3000Da). Com o uso da papaína, obteve-se uma atividade de até 2.329,6μmol.L-1TROLOX/mg de peptídeo no permeado (<3000Da). Os peptídeos produzidos pela ação da protease produzida por P. auratiogriseum apresentaram atividade de 843,17 a 2.587,30μmol.L-1de TROLOX/mg de peptídeos para os hidrolisados com 10 e 29% respectivamente, os quais foram compatíveis a antioxidantes naturais, como a vitamina C e α-tocoferol. Os hidrolisados trípticos da caseína caprina apresentaram atividade antimicrobiana frente a Enterococcus faecalis ATCC 6057, Escherichia coli ATCC 2508, Klebisiela pneumoniae ATCC 29665, Bacillus subtilis ATCC 6633. Os hidrolisados de caseína mostraram IC50 de 4,46mg/g para carreamento de zinco. A espectrometria de massa MALDI TOF MS permitiu visualizar os peptídeos no permeado (<3000Da) da caseína caprina, na faixa de 568 a 2.923 Da. Mostraram as sequências LLYQEPVLGPV e HPINHQGLSPEVPNENLLR e da β- e αs1-caseina para hidrolisados trípticos da caseína; as sequências LLYQEPVLGPV da β-caseína, NPWDQVK da αs2-caseina e NENLL da αS1-caseína nos hidrolisados da caseína com o uso da papaína e a sequência LLYQEPVLGPVRGPFPI da β-caseina no hidrolisado da caseína com o uso da protease produzida por P. aurantiogriseum URM 4622. As propriedades bioativas dos hidrolisados da caseína referem-se à prevalência de aminoácidos hidrofóbicos, o que possibilita o uso destes como peptídeos bioativos.