Resumo: Todas as características de um organismo vivo são controladas pela expressão de genes específicos, e na qualidade da carne não é diferente. O presente estudo teve como objetivo correlacionar a expressão dos genes μ-Calpaína (CALP 1), m-Calpaína (CALP 2), Calpastatina (CAST), Tireoglobulina (TG), Diacilglicerol aciltransferase 1 (DGAT1) e a Leptina (LEP) com a qualidade da carne do Longissimus dorsi em dois grupos genéticos: Nelore (Bos indicus) e Canchim (5/8 de Bos taurus x 3/8 Bos indicus) em dois períodos (carne não maturada e com sete dias de maturação), e utilizá-la como marcador genético. Foram analisados 30 touros jovens, 15 Nelore e 15 Canchim, todos mantidos nas instalações do confinamento experimental da FMVZ-UNESP Botucatu, recebendo a mesma dieta e mesmo manejo. Alcançando peso de 370 kg e espessura de gordura de cobertura de 4 mm, foram abatidos e amostras do músculo Longissimus dorsi foram coletadas para análises de: lipídeos totais (LT), força de cisalhamento (FC), índice de fragmentação miofibrilar (MFI) e análise da expressão gênica por RT-qPCR. Entre as características de qualidade da carne, LT e MFI0 apresentaram diferença entre as raças (P<0,01), sendo MFI0 superior no Canchim e LT no Nelore. Quanto à expressão gênica, as CALPs não mostraram expressão diferencial entre os grupos (P>0,05), assim como DGAT1, TG e LEP. CAST foi mais expresso na raça Nelore (P<0,05). Quanto às correlações, foi observada apenas uma positiva entre DGAT1 e MFI0 (r=0,79, P<0,01) no Canchim. Diante dos resultados, sugere-se que a maior expressão de CAST no Nelore propiciou aos animais uma carne mais dura, quando comparados ao Canchim, e que a expressão gênica não pode ser usada como um marcador genético / Abstract: All the features of a living organism are controlled by the expression of specific genes, and the quality of the meat is no different. The present study was performed to correlate gene expression μ-calpain (CALP 1), m-calpain (CALP 2), calpastatin (CAST), thyroglobulin (TG), Diacylglycerol acyltransferase 1 (DGTA1) and leptin (LEP) with the meat quality of Longissimus dorsi muscle in two genetic groups: Nellore (Bos indicus) and Canchim (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus) in two periods, and use it as a genetic marker. We analyzed 30 young bulls, 15 and 15 Canchim Nellore. The animals were kept on the installation of the experimental confinement FMVZ-UNESP-Botucatu, receiving the same diet and management. When reached a weight of approximately 370 kg and a subcutaneous fat thickness of 4 mm, they were slaughtered and samples of the Longissimus dorsi muscle were collected for analysis of the: total lipids (TL), shear force (SF), myofibrillar fragmentation index (MFI) and analysis of gene expression by RT-qPCR. Among the characteristics of meat quality, LT and MFI0 showed differences between breeds (P<0,01), higher MFI0 in Canchim and LT higher in Nellore. Regarding gene expression, the CALPs showed no differential expression between groups (P>0.05), as well as DGAT1, TG, and LEP. CAST was more expressed in Nellore (P<0.05). Regarding the correlation was only observed a positive relationship between DGAT1 and MFI0 (r = 0.79, P <0.01) in Canchim. Considering the results, it is suggested that the increased expression of CAST in Nellore animals led to a tougher meat compared to Canchim, and that gene expression can not be used as a genetic marker / Orientador: Henrique Nunes de Oliveira / Coorientador: Maeli Dal Pai Silva / Banca: Simone Cristina Méo Niciura / Banca: Luiz Arthur de Loyola Chardulo / Mestre

Orientador: Eleni Gomes / Banca: Luiz Juliano Neto / Banca: João Ruggiero Neto / Resumo: Fungos termofílicos têm despertado grande interesse acadêmico e industrial por produzirem uma variedade de enzimas termoestáveis com potenciais aplicações em processos biotecnológicos como biocatálise nas indústrias de couro, farmacêutica, têxtil e alimentícia, e na preparação de produtos de limpeza e cosméticos. Particularmente, as proteases, além de participarem de inúmeros processos fisiológicos vitais como vias metabólicas, hemostasia e sinalização celular, também representam hoje cerca de 60% do mercado mundial de enzimas. Neste trabalho, descrevemos a produção, purificação e caracterização bioquímica de uma serino-protease produzida por um fungo termofílico do gênero Myceliophthora. As taxas de atividade proteolítica foram avaliadas através de fermentação em meio sólido (FES) e submerso (FSM) e observou-se um rendimento na atividade proteolítica 4,5 vezes maior para o meio sólido. A enzima bruta obtida por ambos os procedimentos (FES e FSM) exibiu a mesma temperatura ótima de 50 ºC, porém em relação ao pH ótimo houve um deslocamento de 7 (FSM) para 9 (FES) sugerindo que o perfil enzimático do fungo difere de acordo com suas condições de fermentação. Baseado nesses resultados prosseguiu-se os estudos com o extrato bruto obtido por FES. A imobilização da enzima bruta em esferas de alginato de cálcio resultou no aumento da temperatura ótima e na estabilidade térmica quando comparado com a enzima livre. O extrato bruto obtido por FES foi, então, fracionado por métodos cromatográficos como exclusão molecular e troca-iônica que resultaram na protease pura com peso molecular de 28,2 kDa determinado por espectrometria de massa. A protease pura demonstrou pH ótimo de 9,0 e temperatura ótima de 45 °C que corroboram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Thermophilic fungi have attracted great academic and industrial interest because they produce a variety of thermostable enzymes with potential applications in biotechnological processes such as biocatalysis in the industries of leather, pharmaceutical, textile and food, and the preparation of detergents and cosmetics. In particular, proteases not only participate in many vital physiological processes such as metabolic pathways, cell signaling and homeostasis, but also currently represent about 60% of the world market of enzymes. In this work, we describe the production, purification and biochemical characterization of a serine protease produced by a thermophilic fungus of the genus Myceliophthora. The levels of proteolytic activity were evaluated either by solid fermentation (SSF) and submerged (SmF). The crude enzyme obtained by both procedures (SSF and SmF) exhibited similar optimum temperature of around 50 ºC, but in relation to the optimum pH was shifted of 7 (SmF) to 9 (SSF), suggesting that the enzymatic profile of the fungus differs from according to its fermentation conditions. Based on these results, the studies were followed with crude extract obtained by SSF. The immobilized enzyme on beads of calcium alginate resulted in increased optimum temperature and thermal stability when compared to the free enzyme. The crude extract obtained by SSF was then fractionated by chromatographic methods including molecular exclusion and ion-exchange that resulted in the pure protease with molecular weight of 28.2 kDa as determined by mass spectrometry. The pure protease showed optimum pH of 9.0 and optimum temperature of 45 °C that corroborate to the preliminary characterization of the crude extract. Inhibition tests resulted in complete inhibition by PMSF, a canonical... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre