Made available in DSpace on 2016-08-10T10:38:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Caroline Oliveira Araujo Melo.pdf: 9819543 bytes, checksum: 9c73c3b07e3a86d2b7a6f185fa67e197 (MD5) Previous issue date: 2010-01-11 / The androgen is a generic term usually applied to describe a group of sex steroid hormones. Androgens are produced primarily by a male's testes. However, some small amounts are also produced by the ovaries in females and by the adrenal gland, in both sexes. Androgens are responsible for the male sex differentiation during embryogenesis at the 6th or 7th week of gestation , triggering the development of the testes and penis in male fetuses and is directed by the testicular determining factor, the gene SRY (sex determining region on Y chromosome), located on the short arm of chromosome Y. The differentiation of male external genitalia in penis, scrotum and penile urethra occurs between the 9th and 13th weeks of pregnancy and requires adequate concentration of testosterone and converting this to another more potent androgen dihydrotestosterone (DHT), through the action of 5α reductase in target tissues. The actions of testosterone and DHT require the presence of functional androgen receptors, which, after the connection with these hormones, activate the transcription of specific genes in target tissues. The AR gene is a protein coding gene located at Xq11.2-q12. It spans over 90 kb and codes for a protein that functions as a steroid-hormone activated transcription factor. The AR, like other members of the nuclear receptor superfamily, has three major functional domains: the AR is characterized by a modular structure consisting of four functional domains: an N-terminal domain (NTD), a DNA-binding domain (DBD), a hinge region, and a ligand (androgen-) binding domain (LBD). Mutations in the AR gene cause the X-linked Androgen Insensitivity Syndrome (AIS) characterized by androgen unresponsiveness, which affects the proper male sexual development both at embryogenesis and puberty. As a genetic disorder, AIS presents a problem and a burden to the affected people and their families and a major medical challenge for the health providers. This impaired response to androgen results from the incapacity or reduced capacity of the androgen receptor (AR) to transactivate androgen-responsive genes in target cells, and leads to abnormal differentiation and development of male internal and external genitalia, and thus leading to male pseudohermaphroditism. / Andrógeno é um termo genérico geralmente utilizado para descrever um grupo de hormônios esteroides sexuais. Os andrógenos são produzidos no homem primariamente pelos testículos. No entanto, algumas pequenas quantidades são também produzidas pelos ovários nas mulheres e pelas glândulas adrenais, em ambos os sexos. Os andrógenos são responsáveis pela diferenciação sexual masculina durante a embriogênese na 6ª ou 7ª semana de gestação, desencadeando o desenvolvimento dos testículos e pênis em fetos masculinos e é dirigido pelo fator determinante testicular, o gene SRY (região determinante do sexo no cromossomo Y), localizado no braço curto do cromossomo Y. A diferenciação da genitália externa masculina em pênis, escroto e uretra peniana ocorre entre a 9ª e 13ª semana de gravidez e requer concentração adequada de testosterona e a conversão para um outro andrógeno mais potente, a dihidrotestosterona (DHT), através da ação da 5 α- redutase em tecidos alvos. As ações da testosterona e DHT requerem a presença dos receptores androgênicos funcionais. O gene AR é uma proteína codificada para o gene localizado no Xq11.2-q12. Ele abrange mais de 90 kb e codifica pra a proteína que funciona como um hormônio esteroide que ativa o fator de transcrição. O AR, como outros membros da superfamília de receptores nucleares, tem três domínios principais: o AR é caracterizado por uma estrutura modular consistindo de quatro domínios funcionais: o domínio N-terminal (NTD), um domínio de ligação ao DNA (DBD), a região de dobradiça, e um domínio de ligação ao ligante (LBD). Mutações no gene AR causam a Síndrome de Insensibilidade aos Andrógens ligada ao cromossomo X (AIS) caracterizada pela insensibilidade androgênica, que afeta o desenvolvimento sexual adequado tanto na embriogênese quanto na puberdade. Como uma desordem genética, o AIS apresenta um problema e um fardo para as pessoas afetadas e suas famílias e um grande desafio médico para os provedores de saúde. Essa resposta prejudicada aos andrógenos resulta na incapacidade ou redução da capacidade do receptor de andrógeno (AR) de transativar os genes responsivos aos andrógenos em células alvo, e leva à diferenciação e desenvolvimento anormais da genitália masculina interna e externa, e assim, levando ao pseudohermafroditismo masculino.

Orientador: Maricilda Palandi de Mello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T10:04:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Calais_FlaviaLeme_M.pdf: 2545885 bytes, checksum: 01651078ede5d0d74599fe9cf524b8bd (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Para um correto desenvolvimento sexual masculino em humanos, é necessária a presença, entre outros, de dois hormônios esteróides: a testosterona (T) e a diidrotestosterona (DHT). A T é o hormônio responsável pelo desenvolvimento da genitália interna masculina, já a DHT é o hormônio chave da virilização da genitália externa masculina e responsável pelo estabelecimento dos caracteres sexuais secundários durante a puberdade. Duas enzimas são responsáveis pela produção destes hormônios: a enzima 17?-hidroxiesteróide desidrogenase tipo 3 (gene HSD17B3), a qual é responsável pela conversão do hormônio androstenediona em T, reação realizada na última etapa da biossíntese da T e a enzima 5?-redutase tipo 2 (gene SRD5A2), que é responsável por catalisar a conversão da T em DHT. Mutações nos genes HSD17B3 ou SRD5A2 causam alterações que levam à não produção ou à síntese defeituosa das enzimas 17?-hidroxiesteróide desidrogenase tipo 3 e 5?-redutase tipo 2, promovendo deficiência na virilização de indivíduos 46,XY. Indivíduos estes cujas gônadas são representadas por testículos, apresentam pseudo-hermafroditismo masculino (PHM), agora denominado distúrbio da diferenciação do sexo em indivíduos 46,XY (DDS-XY). Estes podem apresentar genitália ambígua, sendo o sexo de criação predominantemente feminino, com virilização na puberdade. O diagnóstico pode ser confirmado com a identificação de mutações nos genes específicos HSD17B3 e SRD5A2. Assim, o objetivo desse estudo foi investigar alterações moleculares nos genes HSD17B3 e SRD5A2, em pacientes com ambiguidade genital com cariótipo 46,XY, e contribuir para a confirmação do diagnóstico clínico e laboratorial de DDS em indivíduos 46,XY por deficiências nas enzimas 17?-hidroxiesteróide desidrogenase tipo 3 e 5?-redutase tipo 2. A metodologia empregada neste estudo teve por base a amplificação dos 11 exons do gene HSD17B3 e dos 5 exons do gene SRD5A2 pela reação em cadeia da polimerase (PCR), seguida por rastreamento das mutações através do sequenciamento direto dos produtos de amplificação. Das 2 famílias estudadas para diagnóstico de alterações no gene HSD17B, foi encontrada uma alteração, p.R80Q, em homozigose em um paciente. E para o para o gene SRD5A2, foram estudadas 45 famílias, e foi verificada a presença de três mutações: a c.418delT em homozigose em um paciente, a c.278delG em heterozigose em um paciente e a p.Q126R em homozigose em duas irmãs. Vários polimorfismos freqüentes foram observados e, também, algumas riações nucleotídicas novas ou raras foram identificadas. Fez parte do estudo a avaliação in vitro da mutação g.49529G>A, já descrita previamente como uma mutação missense (p.G183S), quanto ao efeito deletério no processo de splicing, uma vez que esta alteração encontra-se no último nucleotídeo do exon 3 do gene SRD5A2. Foi verificado que esta alteração promove a excisão do exon 3, mostrando que o efeito primário desta mutação não é a troca de aminoácidos e sim uma alteração no processo de splicing deste gene. / Abstract: The male sexual development requires the production of normal amounts of two steroid hormones: testosterone (T) and dihydrotestosterone (DHT). The T is responsible for development of male internal genitalia, whereas DHT is the key for the virilization of the male external genitalia and responsible for the establishment of secondary sexual characteristics during puberty. Two enzymes are responsible for the production of these hormones: 17?-hydroxysteroid dehydrogenase type 3 enzyme (HSD17B3 gene), which is responsible for converting androstenedione to T, the last step of the biosynthesis of T; and 5?-reductase type 2 enzyme (SRD5A2 gene), which is responsible for catalyzing the conversion of T into DHT. Individuals with 46,XY karyotype and mutations in either HSD17B3 gene or SRD5A2 gene, present a deficiency of enzyme activity that leads to phenotypes ranging from male with ambiguous genitalia to normal female. Such individuals may be assigned at birth and raised as females. The gonads of those individuals are represented by testes. This condition defines the male-pseudohermaphroditism (MPH), recently renamed as disorder of sexual development in 46,XY karyotype (DSD-XY). The diagnosis of these deficiencies can be confirmed with the identification of mutations in either HSD17B3 or SRD5A2 genes. The aim of this investigation was to identify nucleotide alterations in the HSD17B3 gene or in the SRD5A2 gene in patients with clinical and hormonal characteristics suggestive of 17?-hydroxysteroid dehydrogenase type 3 deficiency, or 5?-redutase type 2 deficiency. Molecular analysis was performed by amplification of the eleven exons of HSD17B3 gene, and the five exons of SRD5A2 gene followed by sequencing. In two families studied for the HSD17B3 gene, one alteration was detect, p.R80Q, in a homozygous patient. Forty-five families were studied for SRD5A2 gene and the presence of three mutations was verified: the c.418delT in one homozygous patient, the heterozygosis for c.278delG in one patient and the homozygosis for p.Q126R in two sisters. Several frequent polymorphisms in the SRD5A2 gene were observed and some novel or rare variations were identified as well. The study in vitro with the g.49529G>A mutation was also performed due to the possibility of deleterious effect on the splicing process, although his mutation had been previously described as a missense mutation (p.G183S). It was verified exon 3 skipping in the mRNA as a result of the mutation, showing that the primary effect is not the change of amino acids but the anomalous splicing process of the SRD5A2 gene. / Mestrado / Genetica Animal e Evolução / Mestre em Genética e Biologia Molecular

O Pseudohermafroditismo masculino disgenético (Anomalia da diferenciação sexual 46,XY ADS 46,XY) é definido como ambigüidade genital num paciente com testículos e/ou cariótipo 46,XY com uma das seguintes características: alteração histológica testicular, ausência ou hipoplasia das células de Leydig em tecido previamente estimulado com gonadotrofina coriônica humana(hCG), falta de resposta de testosterona ao estímulo com hCG sem acúmulo de precursores, ausência de células germinativas, presença de derivados müllerianos indicando inadequada produção do hormônio antiMülleriano (HAM) ou resistência de seus receptores. Esse estudo apresenta uma avaliação clínica, laboratorial, anátomopatológica, morfométrica e molecular de 10 pacientes com ADS 46,XY; dois pacientes apresentaram mutação no SF1 (fator esteroidogênico 1), duas mutações no domínio hingee uma terceira produziu um stop códon na posição 404; três pacientes com deleção da cópia do DAZ2. A morfometria testicular mostrou todos os diâmetros tubulares médios (DTM) moderado a gravemente diminuídos e os índices de fertilidade tubular leve a moderadamente diminuídos. Devido à dificuldade do diagnóstico diferencial e etiológico, o estudo morfométrico e molecular deve sempre acompanhar esses casos de ADS 46,XY. / The dysgenetic male pseudohermaphroditism 46,XY ; disorders of sex development (DSD 46,XY) is defined as sexual ambiguity in patients with testis and/or 46,XY karyotype and one of the characteristics: hystologic alteration of the testis; absence or hypoplasia of Leydig cells; a decreased testosterone response to human chorionic gonadotropin stimulation without accumulation of testosterone precursors; absent germ cells; presence of müllerian duct derivatives showing inappropriate production of antimüllerian hormone (AMH) or resistance to its receptors. This study shows the clinic, laboratory, histologic, morphometric and molecular evaluation of 10 patients with DSD 46,XY; two patients showed mutations in the SF1 gene (steroidogenic factor-1); two in the hinge domain and one stop codon at the position 404 of the protein; three patients exhibited deletion of DAZ2. The testis morphometry showed reduction: marked to severe of all mean tubular diameter (MTD) while the reduction of the tubular fertility index (TFI) were slight to marked. Due to difficulties establishing the differential diagnosis and the etiology, the morphometric and molecular evaluation must be always done in the patients with DSD 46,XY.

O Pseudohermafroditismo masculino disgenético (Anomalia da diferenciação sexual 46,XY ADS 46,XY) é definido como ambigüidade genital num paciente com testículos e/ou cariótipo 46,XY com uma das seguintes características: alteração histológica testicular, ausência ou hipoplasia das células de Leydig em tecido previamente estimulado com gonadotrofina coriônica humana(hCG), falta de resposta de testosterona ao estímulo com hCG sem acúmulo de precursores, ausência de células germinativas, presença de derivados müllerianos indicando inadequada produção do hormônio antiMülleriano (HAM) ou resistência de seus receptores. Esse estudo apresenta uma avaliação clínica, laboratorial, anátomopatológica, morfométrica e molecular de 10 pacientes com ADS 46,XY; dois pacientes apresentaram mutação no SF1 (fator esteroidogênico 1), duas mutações no domínio hingee uma terceira produziu um stop códon na posição 404; três pacientes com deleção da cópia do DAZ2. A morfometria testicular mostrou todos os diâmetros tubulares médios (DTM) moderado a gravemente diminuídos e os índices de fertilidade tubular leve a moderadamente diminuídos. Devido à dificuldade do diagnóstico diferencial e etiológico, o estudo morfométrico e molecular deve sempre acompanhar esses casos de ADS 46,XY. / The dysgenetic male pseudohermaphroditism 46,XY ; disorders of sex development (DSD 46,XY) is defined as sexual ambiguity in patients with testis and/or 46,XY karyotype and one of the characteristics: hystologic alteration of the testis; absence or hypoplasia of Leydig cells; a decreased testosterone response to human chorionic gonadotropin stimulation without accumulation of testosterone precursors; absent germ cells; presence of müllerian duct derivatives showing inappropriate production of antimüllerian hormone (AMH) or resistance to its receptors. This study shows the clinic, laboratory, histologic, morphometric and molecular evaluation of 10 patients with DSD 46,XY; two patients showed mutations in the SF1 gene (steroidogenic factor-1); two in the hinge domain and one stop codon at the position 404 of the protein; three patients exhibited deletion of DAZ2. The testis morphometry showed reduction: marked to severe of all mean tubular diameter (MTD) while the reduction of the tubular fertility index (TFI) were slight to marked. Due to difficulties establishing the differential diagnosis and the etiology, the morphometric and molecular evaluation must be always done in the patients with DSD 46,XY.