Thèse d'exercice : Chirurgie dentaire : Université de Nantes : 2005. / Bibliogr. f. 74-82 [92 réf.].

Le groupe des agrumes d’acidité intermédiaire (orange, clémentine et mandarine) perd l’acidité au cours de la maturation (stade III), mais cette chute semble plus forte depuis quelques années dans la zone méditerranéenne. Il a été suggéré que cette perte d’acidité serait liée au climat (automnes plus doux) ce qui entraînerait une augmentation de la respiration des fruits avec une photopériode plus courte à cette période et se traduirait par un déséquilibre carboné. Pour tester cette hypothèse, nous avons choisi d’étudier l’effet d’un déséquilibre carboné, induit par une défoliation partielle, soit en début soit en fin de stade II, qui est la phase de grossissement cellulaire où les sucres et les acides organiques s’accumulent dans la vacuole des cellules des sacs à jus. Nous avons établi un bilan sucres-acides des fruits soumis aux différentes réductions d’apport carboné et identifié la ou les périodes où la réduction de l’apport carboné a le plus d’impact sur les teneurs en sucres et en acides organique. Puis, nous avons regardé l’impact de ce déséquilibre sur le métabolisme du fruit en étudiant l’activité spécifique d’enzyme spécifiques (phosphofructokinase, invertase acide, phosphoénolpyruvate carboxylase, isocitrate déshydrogénase cytoplasmique) et l’expression de gènes d’intérêts (CsCit1, succinate semialdéhyde déshydrogénase, Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthétase) et identifié les mécanismes biochimiques impliqués dans la réponse à la limitation des apports carbonés.Les résultats obtenus montrent que les fruits ne sont pas capables de compenser la réduction des apports carbonés (poids et calibre) que la réduction foliaire soit précoce ou plus tardive au cours du stade II. Lorsque la réduction foliaire est précoce et à court terme (48h et une semaine), l’apport carboné n’est pas affecté puisque les teneurs en saccharose sont similaires à celles du témoin. Nous avons observé une augmentation de l’activité enzymatique de la PFK qui est envisageable grâce au déstockage de la vacuole par l’action de l’invertase acide. La PEPC permet la synthèse d’oxaloacétate et maintient la production d’acide citrique, qui sera dégradé dans le cytoplasme par la NADP-IDH en α-cétoglutarate qui va donner du glutamate et du GABA. La voie du GABA « shunt » semble favorisée puisque l’expression du gène codant pour la SSADH est augmentée. A long terme (7 semaines), l’apport carboné a été affecté puisque les teneurs en saccharose ont fortement diminué par rapport au témoin. Il y a un déstockage de l’acide citrique de la vacuole par CsCit1 mais pas d’activation de la voie du GABA shunt ce qui est compatible avec l’hypothèse que cette voie serait activée par un stress. Lorsque la cellule est en phase d’accumulation des acides organiques, elle privilégie la synthèse d’acide citrique. En revanche, lorsque la réduction foliaire est tardive, les teneurs en sucres sont fortement affectées 48h après la réduction, le flux glycolytique est ralenti et il ne semble pas y avoir un déstockage de la vacuole. Les teneurs en acide malique et en acide malique chutent également mais l’activité de la PEPC est augmentée pour favoriser la synthèse d’acide citrique. Nous avons observé une formation importante de proline qui provient du glutamate. Comme nous n’avons pas observé, 48h après la réduction foliaire, une augmentation des niveaux de transcrits de la P5CS, la voie de l’ornithine serait impliquée. Il serait intéressant de confirmer ou non l’hypothèse de la formation de ROS lors des deux réductions foliaires ce qui nous permettrait de savoir si la voie du GABA « shunt » lors de la réduction foliaire précoce ou bien la formation de proline lors de la réduction foliaire tardive sont fortement sollicitées afin de lutter contre le stress oxydatif provenant de la réduction des apports carbonés. / The intermediate acidity group of citrus (orange, clementine and mandarin) loses acidity during maturation (stage III). But this decrease seems to get stronger since several years in the mediterranean basin. It has been suggested that the wider loss of this acidity could be linked to climate (warmer autumns) which would increase fruit respiration at the time when photoperiod is short inducing a carbon imbalance. To check this hypothesis, we chose to study the effect of a carbon imbalance induced by partial defoliation, either at the beginning or at the end of stage II, which is the phase of cell enlargement where sugars and organic acids accumulate in the juice cells bags vacuole. We have established a sugar-acid balance of fruit submitted to different carbon reductions and identified the period or periods for which the reduction of the carbon input had the greatest impact on sugars and organic acids contents. Then, we watched the impact of this imbalance on fruit metabolism studying specific enzyme activity (phosphofructokinase, acid invertase, phosphoenolpyruvate carboxylase, cytoplasmic isocitrate dehydrogenase) and genes of interest expression (CsCit1, succinate semialdehyde dehydrogenase genes Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase). We also identified the biochemical mechanisms involved in the response to the carbon inputs limitation.The obtained the results showed that fruits are not able to offset the limitation of carbon inputs (weight and size) whether the leaf reduction is early or late during stage II. When the leaf reduction is early, for a short-term (48 hours and one week), the carbon contribution is not affected since sucrose contents are similar to those of the control. We observed an increase in PFK enzymatic activity of which is suitable through the destocking of the vacuole due to the action of acid invertase. PEPC allows oxaloacetate synthesis and maintains citric acid production, which will be degraded in the cytoplasm by the NADP-HDI in α-ketoglutarate which will give glutamate and GABA. The GABA "shunt" response seems to be promoted since the expression of the gene encoding the SSADH is increasing. In long-term (7 weeks), the carbon contribution was affected since sucrose contents decreased significantly compared to control fruit. Citric acid is destocked from the vacuole by CsCit1 but no activation of the GABA shunt occurs which is consistent with the hypothesis that this pathway would be activated by stress. Thus, when the cell is in the process of organic acids accumulation, it seems the synthesis of citric acid. In return, when the leaf reduction is late, the sugar contents are strongly affected 48h after reduction, the glycolytic flux is slow and it does not seem to have remobilization of sugars from vacuole. The contents of malic acid and citric acid also fall but PEPC activity is increased to promote the synthesis of citric acid. A significant formation of proline from glutamate is observed. Since we did not observe, 48 hours after foliar reduction, an increase in P5CS transcript levels, ornithine pathway could be involved. It would be interesting to confirm or not the hypothesis of ROS inducing in both foliar reductions in order to see if the GABA "shunt" for early leaf reduction or the proline formation for late leaf reduction are heavily involved in oxidative stress response that might be induce by carbon inputs limitation.

Thesis (doctoral)--Karolinska Institutet, Stockholm, 1988. / Extra t.p. with thesis statement inserted. Includes bibliographical references.

Thesis (doctoral)--Karolinska Institutet, Stockholm, 1988. / Extra t.p. with thesis statement inserted. Includes bibliographical references.

La pulpe dentaire contient des cellules souches dormantes qui sont mobilisées suite àune lésion et participent aux processus de réparation dentinaire. L’utilisation de cellulessouches pulpaire en clinique dentaire n’est encore qu’un projet. La mise en place de nouvellesthérapies implique de caractériser ces cellules souches: (i) de définir leurs propriétésintrinsèques in vitro et (ii) leur capacité à améliorer la réparation dentaire in vivo. Un autreenjeu est d’identifier des marqueurs de ces cellules souches afin de pouvoir les localiser et lestrier au sein de la pulpe dentaire.Des lignées ayant les propriétés de cellules souches «pulpaires» ont été établies aulaboratoire à partir de la pulpe de molaires d’embryons de souris (ED18). Ces cellules portentla signature du lignage odontogénique, elles expriment Lhx 6 et Lhx 7, deux gèneshoméotiques qui spécifient la région du premier arc branchial à l’origine des odontoblastes.La caractérisation de ces lignées a permis d’apporter la première démonstration que descellules souches multipotentes sont présentes dans la pulpe. La lignée A4 a la capacité de sedifférencier de façon mutuellement exclusive, selon la nature des inducteurs et la géométriedes contacts intercellulaires (3D vs 2D), vers les programmes ostéogénique, chondrogénique,adipocytaire ou odontogénique. Les lignées C5 et H8 sont des cellules souches avec unpotentiel de différenciation restreint au lignage ostéo-odontogénique. Les cellules souchespulpaires expriment des marqueurs de surface communs avec les MSCs (cellules souches dela moelle). Un marqueur, CD90 (Thy 1), est absent dans les cellules multipotentes mais estexprimé par les clones qui ont des potentialités plus restreintes.Un axe in vivo a aussi permis de montrer pour la première fois que l’implantation decellules souches pulpaires dans la molaire de rat n’affecte pas la vitalité pulpaire et peutréparer une lésion dentinaire.La recherche sur les cellules souches dentaires est toujours confrontée à l’absence deconnaissances concernant la localisation, l’identité et les propriétés intrinsèques des cellulesqui participent à la formation de dentine réparatrice. En exploitant ces cellules pulpaires, nousavons récemment mis en évidence que l’inactivation de la voie Wnt canonique est une étapenécessaire à la transition entre l’état «cellule souche» et la «détermination» vers le lignageodontogénique. Cette observation a été validée in vivo: l’implantation d’un activateurpharmacologique de la voie Wnt, (le BIO) inhibe la formation «naturelle» de dentineréparatrice au niveau du site de la lésion.De façon surprenante, des approches biochimiques et pharmacologiques, nous ont aussipermis de découvrir que les cellules souches pulpaires possèdent l’ensemble des fonctions desneurones sérotoninergiques et des neurones dopaminergiques, incluant l’expression d’unrépertoire bien défini de récepteurs sérotoninergiques et dopaminergiques. Une étudephénotypique de souris KO pour le récepteur sérotoninergique 5-HT2B par microCT/ imageriemontre que ce récepteur contribue à l’amélogenèse et participe au développement de la sphèrecranio-faciale.Ces travaux avec une synergie des approches in vitro-in vivo ont pour but d’apporter desbases fondamentales pour développer des approches de thérapie cellulaire en biodentisterie. / Pas de résumé en anglais

La thérapie canalaire occasionne à la dent traitée une perte de sensibilité et de vitalité. La dent n’est plus en mesure de combattre une infection éventuelle et reste fragile. Pour une dent permanente immature nécrosée, la perte de vitalité peut mener à l’arrêt de la croissance radiculaire. La mise au point d’une technique de régénération est nécessaire pour guider le processus de différenciation des cellules souches vers le type cellulaire désiré et permettre de regagner la vitalité du tissu pulpaire. L’étude a pour but d’examiner si une matrice poreuse à base de collagène permet la différenciation des cellules souches humaines de la pulpe dentaire (CSPD) en cellules odontoblastiques. Des CSPD ont été mises en culture avec ou sans facteurs de différenciation odontoblastique, en monocouche ou en présence de la matrice collagénique. L’adhésion a été observée à 6 et à 24 h. La prolifération a été étudiée par la technique d’incorporation du bromure 3-(4,5- diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltétrazolium (MTT) à 3 et 5 jours. La morphologie cellulaire a été visualisée par microscopie optique à 3 et 7 jours. La formation de tissu calcifié et l’activité de la phosphatase alcaline (ALP) ont été évaluées à 2, 3 et 4 semaines. La sialophosphoprotéine de la dentine (SPPD) et l’ostéocalcine (OC) ont aussi été examinées par transfert de protéines. Les résultats montrent que les CSPD adhèrent et prolifèrent en présence du milieu de différenciation et de la matrice de collagène. Il y a production d’ALP et de tissu calcifié en présence du milieu de différenciation et de la matrice de collagène. L’analyse protéique indique la production de SPPD et d’OC, confirmant la différenciation de CSPD en cellules odontoblastiques au contact de la matrice de collagène. La matrice de collagène pourrait offrir un microenvironnement favorisant la différenciation des CSPD en odontoblastes dans le système canalaire in vivo. / Root canal therapy results in loss of tooth sensitivity and vitality. The tooth cannot respond to subsequent infections and become brittle. When permanent teeth become necrotic at early patient age, the treatment options are limited and the long-term survival of these teeth is questionable due to the thin, incompletely formed dentin walls and the minimal crown-root ratio. The regenerative endodontic procedures offer a new treatment option to promote healing as well as replace the pulp-dentin complex with a possible recovery of the pulp vitality. The objective of this study was to investigate if a biological porous collagen scaffold promotes differentiation of human dental pulpal stem cells (DPSC) into odontoblast-like cells. DPSCs were cultured in standard or differentiation medium either in monolayer or in contact with a collagen scaffold. The adhesion of DPSCs was observed at 6 and 24 h. The cell proliferation was studied by using 3-(4,5- dimethylthiazolyl-2)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay, at 3 and 5 days. Cellular morphology was visualized by optic microscopy at 3 and 7 days. Tissue mineralization and alkaline phosphatase activity (ALP) were appreciated after 2, 3 and 4 weeks. Dentin sialophosphoprotein (DSPP) and osteocalcin (OC) were examined by Western blot. The results showed that DPSCs adhere and proliferate in contact with the collagen scaffold. Production of calcified tissue and ALP were observed when DPSCs were cultured on the collagen scaffold. Protein analysis demonstrated production of DSPP and OC, which confirms the presence of odontoblast-like cells when in contact with the collagen scaffold. Overall, our study demonstrated the potential use of the porous collagen scaffold to promote DPSC differentiation in odontoblast-like cells in root canal system in vivo.

En endodontie, les peptides antimicrobiens (AMP) pourraient résoudre les limitations potentielles liées à l'utilisation d'antibiotiques. L’objectif de cette étude était d’évaluer l’effet du KSL-W sur l’adhésion, la prolifération et la migration des cellules souches de la pulpe dentaire (DPSC). Méthodes : Les DPSC ont été cultivées en présence et en l'absence de KSL-W à différentes concentrations ou d’une combinaison de deux (ciprofloxacine et métronidazole ; DAP) ou trois (ciprofloxacine, métronidazole et minocycline ; TAP) antibiotiques. L'adhésion cellulaire a été évaluée à l’aide de coloration au cristal violet et d’observations microscopiques. La viabilité/l’activité métabolique (V/AM) des DPSC a été étudiée par un test MTT. L'effet de KSL-W sur la migration cellulaire / la guérison des blessures a été évaluée à l'aide du test de blessure de la culture dite ″scratch test″. Les données collectées ont été analysées par ANOVA. Une différence significative a été considérée à P ≤ 0.05. Résultats : Le KSL-W n’a pas d’effet inhibiteur sur l’adhésion des DPSC, comparativement au DAP et au TAP. Ces observations sont confirmées par nos analyses de viabilité/activité métaboliques (V/AM) des cellules. En effet, les résultats du MTT ont montré une V/AM plus adéquate en présence de KSL-W. À titre d’exemple, les cellules en présence de KSL-W à 10 et 50 µg/ml, montrent une V/AM comparable au contrôle (cellules non traitées). Il est important de noter que le KSL- W a favorisé la migration cellulaire après une blessure. Les DPSC ont pu migrer et recouvrir la blessure plus rapidement avec KSL- W qu’avec les antibiotiques. Conclusion : Comparativement aux antibiotiques, le KSL-W n’a pas d’effets négatifs sur l'adhésion et la V/AM. Ce peptide semble favoriser la migration cellulaire. Ces travaux suggèrent l’utilisation du KSL-W comme un agent antimicrobien pouvant être utilisé en endodontie.

Thesis (doctoral)--Karolinska Institutet, Stockholm, 1987. / Extra t.p. with thesis statement inserted. Includes bibliographical references.

Thesis (doctoral)--Karolinska Institutet, Stockholm, 1987. / Extra t.p. with thesis statement inserted. Includes bibliographical references.

University, Diss., 2004--Bonn.