CORREIA, Jorge Luis Almeida. Purificação, caracterização parcial e potencialidade biotecnológica de três lectinas de sementes de espécies de Leguminosae da subtribo Diocleinae. 2015. 101 f. Tese (Doutorado em biotecnologia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2015. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-20T15:30:18Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_jlacorreia.pdf: 12368047 bytes, checksum: 7bb605fd3353cb78f27981c1dea5ae71 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T19:07:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_jlacorreia.pdf: 12368047 bytes, checksum: 7bb605fd3353cb78f27981c1dea5ae71 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T19:07:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_jlacorreia.pdf: 12368047 bytes, checksum: 7bb605fd3353cb78f27981c1dea5ae71 (MD5) Previous issue date: 2015 / Leguminosae is recognized by the large amount of isolated and characterized lectins, especially seeds. In this group stand out proteins extracted from species belonging to subtribe Diocleinae, the number of studies in different areas of knowledge. Lectins can be defined as proteins or glycoproteins which are not originated from a body's immune response and have the ability to recognize and bind reversibly to mono or oligosaccharides particular without, however, altering their chemical structures. Different works in our group are structurally haracterizing these proteins as well as elucidating some possible biotechnological applications for these molecules. In this sense, the objective of this study was to isolate and characterize lectins of different species of Leguminosae of Diocleinae subtribe and test them for toxicity to Artemia sp. naupilos, The effect on the smooth muscle of blood vessels and the detention lectin matrix agarose previously activated with cyanogenic bromide (CNBr). Were isolated and characterized the lectin Dioclea sclerocarpa, Dioclea lasiocarpa and Dioclea lasiophylla. Were also made circular dichroism studies on lectin Dioclea sclerocarpa and Dioclea lasiocarpa. The lectin Dioclea lasiophylla was tested against Artemia sp. order to assess their toxicity and was also immobilized on agarose matrix. We evaluated the effect of lectin Dioclea lasiocarpa in the smooth muscle of blood vessels. The knowledge gained from the three scientific articles published in this thesis is a major breakthrough in this promising field of study that has been continuously growing for biotechnological applications. / A família Leguminosae é reconhecida pela grande quantidade de lectinas isoladas e caracterizadas, especialmente de sementes. Neste grupo se destacam as proteínas extraídas de espécies pertencentes a subtribo Diocleinae, pela quantidade de estudos em diferentes áreas do conhecimento. Lectinas podem ser definidas como proteínas ou glicoproteínas que não são originadas a partir de uma resposta imunológica do organismo e possuem a capacidade de reconhecer e se ligar reversivelmente a mono ou oligossacarídeos específicos sem, no entanto, alterar suas estruturas químicas. Diferentes trabalhos no nosso grupo vêm caracterizando estruturalmente essas proteínas, bem como elucidando algumas possíveis aplicações biotecnológicas para essas moléculas. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi isolar e caracterizar lectinas de diferentes espécies de Leguminosae da subtribo Diocleinae e testa-las com relação à toxicidade para naupilos de Artemia sp., o efeito na musculatura lisa de vasos sanguíneos e a imobilização de lectina em matriz de agarose previamente ativada com brometo cianogênico (CNBr). Foram isoladas e caracterizadas as lectinas de Dioclea sclerocarpa, Dioclea lasiocarpa e Dioclea lasiophylla. Também foram feitos estudos de dicroísmo circular na lectina de Dioclea sclerocarpa e Dioclea lasiocarpa. A lectina de Dioclea lasiophylla foi testada contra Artemia sp.de forma a avaliar sua toxicidade e também foi imobilizada em matriz de agarose. Foi avaliado o efeito da lectina de Dioclea lasiocarpa na musculatura lisa de vasos sanguineos. O conhecimento acumulado a partir dos três artigos científicos publicados nesta tese constitui um grande avanço no neste campo promissor de estudo que vem em contínuo crescimento para aplicação biotecnológica.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:50:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1542_1.pdf: 2141227 bytes, checksum: 88cfe6fc5518f1ac8f94e30f84348dd6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não imune cuja ligação reversível e específica a carboidratos resulta em aglutinação celular. Estas proteínas, presentes em bactérias, invertebrados, vertebrados e plantas são detectadas por ensaio de hemaglutinação. Crataeva tapia L. pertence à família das Capparaceae. Uma lectina de entrecasca de C. tapia, CrataBL, foi purificada à homogeneidade através de fracionamento com sulfato de amônio (Fração 30-60%), seguida por cromatografia de troca iônica (CMCelulose). CrataBL aglutinou eritrócitos de humanos, galinha e coelho (atividade hemaglutinante específica, AHE, 102) e principalmente inibida por glicoproteínas. CrataBL foi termoestável e tratamento com EDTA não afetou a atividade hemaglutinante (AH); atividade não foi alterada após adição de Ca2+, Mn2+, Mg2+ e após tratamento com as enzimas proteolíticas tripsina e quimiotripsina sua AH manteve-se estável. CrataBL migrou como uma única banda após eletroforese para proteínas nativas básicas e duas bandas polipeptídicas de massas moleculares 21.000 e 40.000 Da após SDS-PAGE com ou sem agente redutor; os polipeptídeos foram também detectados usando reagente para glicoproteína e sua porção carboidrato foi estimada em 12,8%. A natureza glicoprotéica de CrataBL foi também revelada por sua interação com lectina glicose/manose em gel de agarose. A massa molecular da lectina por cromatografia de filtração em gel foi de 40.000 Da. CrataBL imobilizada em Sepharose CL-4B adsorveu bioseletivamente caseína, fetuína, ovoalbumina e isolou glicoproteínas de plasma sanguíneo humano. O efeito da lectina na coagulação sanguínea foi avaliado através do tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA), tempo de protrombina (TP) e tempo de trombina (TT). CrataBL apresentou atividade anticoagulante somente na via intrínseca, onde o TTPA apresentou-se prolongado (dose-dependente) a partir de uma concentração de 1,25 μg da lectina. CrataBL apresentou toxicidade para Artemia salina com LC50 de 71,7 μg/mL. A atividade antitumoral de CrataBL (20 mg/kg) foi avaliada utilizando Sarcoma 180 implantado em camundongos albinos Swiss (Mus muscullus) e foi detectada por redução do peso do tumor de 50,7%. A atividade antiinflamatória de CrataBL foi avaliada pelo modelo de edema de pata induzido por carragenina e a lectina apresentou efeito antiinflamatório significativo evidenciado pela redução (35,4%) do número de neutrófilos no exsudato inflamatório. CrataBL também apresentou atividade analgésica reduzindo em 34,8% o número de contorções induzidas por ácido acético