Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-16T19:51:19Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Andrea Tavares Dantas.pdf: 4721440 bytes, checksum: c08e80fa7b74bfe7b86f6fae8f4db2bd (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-21T21:26:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Andrea Tavares Dantas.pdf: 4721440 bytes, checksum: c08e80fa7b74bfe7b86f6fae8f4db2bd (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-21T21:26:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Andrea Tavares Dantas.pdf: 4721440 bytes, checksum: c08e80fa7b74bfe7b86f6fae8f4db2bd (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / A esclerose sistêmica (ES) é uma doença multissistêmica do tecido conjuntivo, de etiologia desconhecida, caracterizada essencialmente por fibrose progressiva da pele e órgãos internos. Os mecanismos fisiopatogênicos envolvem alterações vasculares e desregulação autoimune, com participação de múltiplas citocinas. Atualmente, as poucas opções de tratamento para a doença, sobretudo para as manifestações inflamatórias e fibróticas, apresentam eficácia limitada. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar o perfil de citocinas e quimiocinas produzidas por pacientes com ES e avaliar, in vitro, a resposta ao tratamento com metilprednisolona (MP) e com um novo derivado tiazolidínico LPSF/CR-35. Foram avaliados 67 pacientes com diagnóstico de ES e 64 voluntários saudáveis, pareados por sexo e por idade. Para avaliação da resposta in vitro, foi realizada cultura de células mononucleares do sangue periférico (PBMC). A quantificação de citocinas e quimiocinas no soro e no sobrenadante de culturas foi realizada através de cytometric bead array (CBA) e enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Em comparação com controles saudáveis, pacientes com ES apresentaram níveis séricos aumentados de IFN-γ, TGF-β, CCL2/MCP-1, CCL5/RANTES, CXCL9/MIG, CXCL10/IP-10, os quais foram associados à presença de manifestações clínicas específicas. Descrevemos também, aumento dos níveis séricos de IL-35 e sua associação com a presença de fibrose pulmonar, assim como elevação dos níveis de IL-29/IFN-λ1 e sua correlação com níveis de IFN-λ em pacientes com ES. No intuito de melhor caracterizar a associação entre citocinas e manifestações clínicas, foram mensurados os níveis de citocinas e quimiocinas no sobrenadante das culturas de PBMC não estimuladas e/ou submetidas ao estímulo com anti-CD3/CD28. Observou-se associação entre produção de IL-10 e a extensão do envolvimento cutâneo, IL-2 e dismotilidade esofageana, IL-2 e IL-4 e fibrose pulmonar e IL-4 e IL-10 e a presença de úlceras digitais. Com relação às quimiocinas, foi detectado aumento do nível sérico de CCL5/RANTES em pacientes com fibrose pulmonar. No sobrenadante de cultura de PBMC, verificou-se maior concentração de CCL5/RANTES e de CXCL8/IL-8 em pacientes com úlceras digitais e maior produção de CXCL9/MIG e CXCL10/IP-10 em pacientes com doença precoce. Com o objetivo de verificar a resposta in vitro ao tratamento com corticosteroides, as condições de cultura estimuladas com anti-CD3/CD28 foram tratadas com MP 100μM e, após 48 horas, foi observada significativa redução dos níveis de CCL2/MCP-1, CCL5/RANTES e CXCL8/IL-8 em pacientes com ES. Nesses mesmos pacientes, as citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, TNF e IFN- não sofreram modulação após o tratamento com MP. Por fim, foi avaliada a resposta in vitro ao tratamento com o LPSF/CR-35. O composto inibiu significativamente a produção de IL-4, IL-10, IL-17A, CCL2/MCP-1 e CXCL8/IL-8 e aumentou a de TNF em pacientes com ES. Dessa forma, o presente estudo demonstrou que pacientes com ES apresentam um perfil diferente de produção de citocinas e quimiocinas em comparação com indivíduos saudáveis e esse achado pode ajudar na melhor caracterização dos diversos fenótipos de pacientes. O tratamento da doença permanece um desafio e a avaliação dos efeitos in vitro de novas ou de estabelecidas moléculas fornecem subsídios para o futuro desenvolvimento de ensaios clínicos. / Systemic sclerosis (SSc) is a multisystem connective tissue disease of unknown etiology, characterized primarily by progressive fibrosis of the skin and internal organs. The pathophysiological mechanisms involve vascular abnormalities and autoimmune deregulation, with participation of multiple cytokines. Currently, there are few treatment options for the condition, especially for inflammatory and fibrotic manifestations, and they have limited effectiveness. Thus, the aim of this study was to evaluate the profile of cytokines and chemokines produced by SSc patients and assess the response to in vitro treatment with methylprednisolone (MP) and a novel thiazolidine LPSF/CR-35. We evaluated 67 patients with SSc and 64 healthy volunteers, matched for sex and age. To evaluate the in vitro response to the treatments proposed, culture of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) was obtained. Cytokines and chemokines quantification in serum and culture supernatant was performed by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and cytometric bead array (CBA). Compared to healthy controls, SSc patients showed increased serum levels of IFN-γ, TGF-β, CCL2/MCP-1, CCL5/RANTES, CXCL9/MIG, CXCL10/IP-10, which were associated with the presence of specific clinical manifestations. We describe also an increase in serum levels of IL-35 and its association with pulmonary fibrosis, as well as elevation of IL-29/IFN-λ1 levels and its correlation with IFN-λ levels in SSc patients. In order to further characterize the association between cytokines and clinical manifestations, levels of cytokines and chemokines were measured in supernatant of PBMC cultures unstimulated and/or stimulated with anti-CD3/CD28. There were associations between IL-10 production and cutaneous involvement, IL-2 and esophageal dysmotility, IL-2 and IL-4 and lung fibrosis, and IL-4 and IL-10 and digital ulcers. Regarding chemokines, it was detected increased serum CCL5/RANTES level in patients with pulmonary fibrosis. In PBMC culture supernatant, there was a higher concentration of CCL5/RANTES and CXCL8/IL-8 in patients with digital ulcers and an increased production of CXCL9/MIG and CXCL10/IP-10 in patients with early disease. In order to verify the in vitro response to corticosteroid treatment, the culture conditions stimulated with anti-CD3/CD28 were treated with MP 100μM, and after 48 hours, there was significant reduction in the levels of CCL2/MCP-1, CCL5/RANTES and CXCL8/IL-8 in patients with SSc. In the same patients, the cytokines IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, TNF and IFN-λ not undergone modulation after treatment with MP. Finally, in vitro response to treatment with LPSF/CR-35 was evaluated. The compound significantly inhibited IL-4, IL-10, IL-17A, CCL2/MCP-1 and CXCL8/IL-8 and increased TNF in SSc patients. Thus, the present study demonstrated that patients with SSc present a different profile of cytokines and chemokines compared to healthy subjects and this finding may help in better characterization of the different phenotypes of patients. The treatment of the disease remains a challenge and assess in vitro effects of new or established molecules provide information for the future development of clinical trials.