GUERRA, Priscila Valera. Efeito protetor de CXCL10 em infecção experimental por Leishmania braziliensis. 2013. 68 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-07-09T11:23:12Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_pvguerra.pdf: 1062693 bytes, checksum: cbcefa56a6fe8c511929d08079c527fe (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-07-10T10:48:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_pvguerra.pdf: 1062693 bytes, checksum: cbcefa56a6fe8c511929d08079c527fe (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-10T10:48:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_pvguerra.pdf: 1062693 bytes, checksum: cbcefa56a6fe8c511929d08079c527fe (MD5) Previous issue date: 2013 / Leishmania braziliensis is the more common etiologic agent of the cutaneous leishmaniasis in Brazil. BALB/c mice are more susceptible to L. braziliensis infection, although develop small and not ulcerated lesions. The lesions in BALB/c mice infected by L. braziliensis are accompanied by expression of a broad chemokines spectrum, including CXCL10, which is able to attract and activate NK and Th1 cells with IFN-γ production. The aim of this study was to evaluate whether the chemokine CXCL10, administered in early stages of infection could influence the course of disease, leading to a faster and more effective time of healing. Groups of BALB/c mice (n=24) were infected by L. braziliensis and divided into two groups: one group (n=12) received CXCL10 (100 ng/5μL) and the other (n=12) received PBS (5μL), at 1, 3, 5 and 7 days postinfection. Some parameters were evaluated: thickness of the lesions every three days; parasite burden in both the footpad and the draining lymph node, NO concentration, cytokines production (IFN-γ, IL-12p40, TNF-α, IL-4, IL-10 and TGF-β), at 15 and 30 days after infection; and histopathological analysis of lesions. Animals receiving CXCL10 showed reduced disease duration, since the lesions started to regress earlier (12 days), whereas the control animals developed the disease for longer (15 days). CXCL10 induced statistically significant differences in parasite load in the draining lymph nodes compared with control in both times evaluated (15 days: p=0.0353; 30 days: p=0.0292). In the animals receiving CXCL10 was not observed change in the number of parasites in the site of inoculation, even with reduced thickness of the lesion, showing no correlation between lesion size and parasite load. There was no difference in NO concentration between groups with 15 days of infection, and this concentration remained the same in the group receiving CXCL10 at day 30, although it was lower than that observed in the control group. CXCL10 also induced higher levels of IFN-γ and IL-12, and reduced IL-4, IL-10, and TGF-β at 30 days postinfection, when compared to control animals. Histopathology analyses of lesions after 15 days postinfection showed a very mild inflammation in both groups, differing only for the presence of neutrophils, which were practically not observed in lesions of animals receiving CXCL10. Taken together, the data from this study showed CXCL10 chemokine presented a protective effect on L. braziliensis infection in BALB/c mice, with a reduction in the progression of the disease, associated with a higher concentration of IFN-γ and lesser of IL-4 and IL-10. / Leishmania braziliensis é o agente etiológico mais comum da leishmaniose cutânea no Brasil. Camundongos BALB/c são os mais susceptíveis à infecção por L. braziliensis, embora desenvolvam lesões pequenas e não ulceradas. As lesões em BALB/c infectados com L. braziliensis são acompanhadas pela expressão de um amplo espectro de quimiocinas, entre elas CXCL10, que é capaz de atrair a ativar células NK e Th1 com produção de IFN-γ. O objetivo deste trabalho foi avaliar se a quimiocina CXCL10, administrada nos estágios iniciais da infecção, poderia alterar o curso da doença, dimunindo o tempo de cura. Para isso, camundongos BALB/c (n=24) foram infectados com L. braziliensis e divididos em dois grupos: um grupo (n=12) recebeu CXCL10 (100 ng/5µL) e o outro (n=12) PBS (5µL), nos dias 1, 3, 5 e 7 dias de infecção. Alguns parâmetros foram avaliados: a espessura das lesões a cada três dias; a carga parasitária na pata e no linfonodo de drenagem, a concentração de NO, IFN-γ, IL-12p40, TNF-α, IL-4, IL-10 e TGF-β, 15 e 30 dias após a infecção; e análise histopatológica das lesões. Os animais que receberam CXCL10 apresentaram uma redução no tempo de duração da doença, uma vez que as lesões começaram a regredir mais precocemente (12 dias), enquanto que nos animais controle (PBS) a doença evoluiu por mais tempo (15 dias). CXCL10 induziu diferenças estatisticamente significativas na carga parasitária do linfonodo de drenagem nos dois pontos avaliados, quando comparado com o controle (15 dias: p=0,0353; 30 dias: p=0,0292). Nos animais que receberam CXCL10, não foi observada mudança no número de parasitos no sítio de inoculação, mesmo com redução da espessura da lesão, mostrando que não houve correlação entre o tamanho da lesão e a carga parasitária. Não houve diferença na concentração de NO entre os grupos, no 15º dia de infecção, e esta concentração manteve-se igual no grupo que recebeu CXCL10 no 30º dia, embora tenha sido menor do que a observada no grupo controle. CXCL10 também induziu concentrações mais elevadas de IFN-γ e IL-12 e mais reduzidas de IL-4, IL-10, TGF-β 30 dias pós-infecção, quando comparados aos animais controle. A análise histopatológica das patas mostrou uma inflamação muito leve em ambos os grupos, com diferença apenas quanto à ausência de neutrófilos nas lesões dos animais que receberam CXCL10. Em conjunto, os dados mostraram que CXCL10 apresentou um efeito protetor na infecção por L. braziliensis em camundongos BALB/c, com redução no tempo de evolução da doença, associada a maior concentração de IFN-γ e menor de IL-4 e IL-10.

FIGUEIREDO, Webertty Mayk Eufrásio de. Efeito da quimiocina CXCL10 na infecção por Leishmania infantum chagasi em camundongos BALB/c. 2012. 65 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-05-10T14:16:18Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_wmefigueiredo.pdf: 442833 bytes, checksum: 07c3a09e8e63fe5a99d0e9bcbcbb337f (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-05-16T13:41:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_wmefigueiredo.pdf: 442833 bytes, checksum: 07c3a09e8e63fe5a99d0e9bcbcbb337f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-16T13:41:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_wmefigueiredo.pdf: 442833 bytes, checksum: 07c3a09e8e63fe5a99d0e9bcbcbb337f (MD5) Previous issue date: 2012 / Visceral leishmaniasis caused by Leishmania infantum chagasi is characterized by the loss of the ability of host to generate an effective immune response. In this study it was investigated the role of CXCL10 chemokine in controlling L. infantum chagasi infection in vivo. Groups of BALB/c mice were treated or not with recombinant CXCL10 chemokine (5 μg/kg) with 1, 3 and 7 days of infection and after 1, 7 and 23 days of treatment, some parameters were evaluated: parasite load, levels of IFN-g, IL-4, TGF-β and IL-10, and the histopathological alterations in the liver. After 23 days of treatment, CXCL10 induced in the spleen a significant reduction on the number of parasites as compared to control group. In the liver, parasite load decreased in treated group between the 7th and 23th day post treatment. However, the antileishmanial effect of CXCL10, in this work, does not seem to be mediated by NO, since there was no difference in the NO production among the groups. IFN-γ was induced most significantly in treated group than in controls, and reached its maximum production (100 pg/mL) on day 23 after treatment, correlating with the reduction in parasite burden in target organs. IL-4 was produced in low doses, in both groups, although treated animals had shown higher levels than control group. Regarding to anti-inflammatory cytokines, after the 23th day of treatment, IL-10 levels in treated animals were smaller than in control group. Production of TGF-β after 7 days of treatment was 2 times lower in treated group when compared to control, and after the 23th day of treatment, this cytokine remained with lower levels than those observed in control. In the histopathological analysis of the liver after the 1st day of treatment, were found in both groups more immature granulomas (GI) than non-granulomatous infiltrate (NG), and some few mature granulomas (GM) were only observed in treated group. After 7 days of treatment, the amount of NG infiltrates was lower, and GI were still the most frequent in both groups, besides a slight increase of GM was observed in treated group. In summary, at the light of the found results, it is possible to suggest an important leishmanicidal role to CXCL10 in BALB/c mice infected by L. infantum chagasi, which seems to be mediated by a significant IFN-g production, and suppression of immunoregulatory cytokines, IL-10 and TGF-β, opening the hypothesis that this would be associated to a decrease in the frequency of regulatory T cells induced by CXCL10 in these animals. / A leishmaniose visceral causada por Leishmania infantum chagasi é caracterizada pela perda da habilidade do hospedeiro gerar uma resposta imunológica eficaz. Neste estudo, foi investigado o papel da quimiocina CXCL10 no controle da infecção por L. infantum chagasi in vivo. Grupos de camundongos BALB/c foram tratados ou não com CXCL10 (5 μg/kg) com 1, 3 e 7 dias de infecção e após 1, 7 e 23 dias do tratamento, alguns parâmetros foram avaliados: a carga parasitária, os níveis de IFN-, IL-4, TGF-β e IL-10, e as alterações histopatológicas no fígado. Após 23 dias de tratamento, CXCL10 induziu, no baço, uma redução expressiva no número de parasitos, quando comparado ao grupo controle. No fígado, a carga parasitária mostrou uma queda no grupo tratado, entre o 7º e 23º dia após o tratamento. Entretanto, o efeito leishmanicida de CXCL10, neste trabalho, não parece ser mediado por NO, uma vez que não houve diferença na produção de NO entre os grupos. IFN-γ foi induzida de maneira mais significativa no grupo tratado do que nos controles, e atingiu sua produção máxima (100 pg/mL) no 23º dia após o tratamento, correlacionando-se com a queda da carga parasitária nos órgãos-alvo. IL-4 foi produzida em baixas concentrações, em ambos os grupos, embora os animais tratados com CXCL10 tenham mostrado níveis mais elevados do que os controles. Em relação às citocinas antiinflamatórias, após 23 dias do tratamento, os níveis de IL-10 nos animais tratados foram menores do que os do controle. A produção de TGF-β após 7 dias do tratamento foi 2 vezes menor no grupo tratado quando comparado ao controle, e após 23 dias do tratamento, essa citocina continuou com níveis mais baixos do que aqueles observados no controle. Na análise histopatológica do fígado após o 1º dia do tratamento, foram encontrados, em ambos os grupos, mais granulomas imaturos (GI), do que infiltrados não granulomatosos (NG) e alguns poucos granulomas maduros (GM) apenas no grupo tratado. Após 7 dias do tratamento, a quantidade de infiltrados NG estava menor e os GI ainda foram os mais encontrados, em ambos os grupos, além disso, foi observado um pequeno aumento de GM no grupo tratado. Em resumo, diante dos resultados encontrados, é possível sugerir um importante papel leishmanicida de CXCL10 em camundongos BALB/c infectados por L. infantum chagasi, que parece ser mediado por uma expressiva produção de IFN-g e supressão das citocinas imunorreguladoras, IL-10 e TGF-β, abrindo a hipótese se isto não estaria associado a uma diminuição na frequência de células T regulatórias, induzida por CXCL10, nesses animais.

DUTRA, Brunheld Maia. Efeito imunomodulador de CXCL10 em camundongos BALB/C infectados com cepa de Leishmania braziliensis refratária ao tratamento com antimônio. 2015. 78 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-12-01T11:34:02Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_bmdutra.pdf: 917921 bytes, checksum: 088bf681abe483ebcbf34475f6929795 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-12-01T11:36:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_bmdutra.pdf: 917921 bytes, checksum: 088bf681abe483ebcbf34475f6929795 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-01T11:36:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_bmdutra.pdf: 917921 bytes, checksum: 088bf681abe483ebcbf34475f6929795 (MD5) / Leishmania braziliensis from antimony-resistant patient is able to induce high levels of IL-4 and Arginase in mice, contributing to the increased virulence of the strain and the severity of the disease. CXCL10 is a chemokine that recruits and activates Th1 cells, NK, macrophages, dendritic cells and lymphocytes B. The objective of this study was to evaluate in vivo the effect of CXCL10 in the infection by strain of L. braziliensis refractory to treatment with antimony. BALB/c mice (n=64) were infected intradermally in the right ear 107 promastigotes (20 µl), and after appearance of lesions (5ª week), the animals were divided into four groups (16/group): 1. Control untreated; 2.Glucantime (100mg/kg/day, I.M.); 3.CXCL10 (100 ng/10μL, I.M.); 4.Glucantime+CXCL10 (100ng/10µL+100mg/kg/day, I.M.). The animals were treated for 7 days, followed by weekly measurements of lesions, and were euthanized in the first and fourth week post-treatment (w.p.t) for the evaluation of some parameters: parasite burden (lesions, and draining lymph node-LN), production of the cytokines IFN-γ, IL-4, IL-10 and TGF-β (LN) and histological changes (lesions). The results showed CXCL10 and Glucantime induced, early as the first s.p.t., non-ulcerated lesions that regressed significantly (0.35 ± 0.07, 0.047 ± 0.27, p <0.05) compared to controls (0.63 ± 0.12) and Glucantime (0.56 ± 0.12). This was associated with a significant decrease in parasite load observed in CXCL10 and CXCL10 + Glucantime groups, in the lymph node (1.17x103 ± 0.85x103, 2.05x103 ± 1.50x103, respectively) compared to control (3.2x104 ± 1.97x104) and Glucantime (1.18x105 ± 1.12x105). Regarding to cytokines, CXCL10 treated animals showed high levels of IFN-γ, IL-10 and TGF-β, and low IL-4 production. In contrast, was observed in the control and Glucantime groups increased production of IL-4. These data also corroborate the histopathological findings showing that animals treated with CXCL10, with or without Glucantime, showed a non-exacerbated inflammation, with absence of necrosis, lower parasitism, granulomas and cellular infiltrate with more activated macrophages, many lymphocytes and few plasma cells, compared to control and Glucantime. In conclusion, CXCL10 and the association CXCL10+Glucantime induced minor injuries, lesions non-ulcerated, with decreased earlier parasite load, leading to the resolution of the disease through an immune response with high IFN-γ and low IL-4 production, and with the control of inflammation mediated by IL-10 and TGF-β. / Leishmania braziliensis proveniente de paciente resistente ao antimônio é capaz de induzir altos níveis de IL-4 e de Arginase em camundongos, contribuindo para a maior virulência da cepa e gravidade da doença. CXCL10 é uma quimiocina que recruta e ativa células Th1, NK, macrófagos, células dendríticas e linfócitos B. O objetivo deste trabalho foi avaliar in vivo o efeito de CXCL10 na infecção por cepa de L. braziliensis refratária ao tratamento com antimônio. Camundongos BALB/c (n=64) foram infectados por via intradérmica na orelha direita, 107 promastigotas (20µL) e após o aparecimento das lesões (5a sem), os animais foram divididos em quatro grupos (16 animais/grupo): 1. Controle não tratado; 2. Glucantime (100mg/kg/dia, I.M); 3. CXCL10 (100ng/10µL, I.M.); 4. Glucantime+CXCL10 (100ng/10µL + 100mg/kg/dia, I.M.). Os animais foram tratados por 7 dias, acompanhados com medidas semanais das lesões e eutanasiados na 1ª e 3ª semanas pós-tratamento (s.p.t.) para a avaliação de alguns parâmetros: carga parasitária (lesões e linfonodo de drenagem-LN), produção das citocinas IFN-γ, IL-4, IL-10 e TGF-β (linfonodo) e alterações histológicas (lesões). Os resultados mostraram que CXCL10 e CXCL10+Glucantime induziram, já a partir da 1a s.p.t, lesões não ulceradas e que regrediram significativamente (0,35±0,07; 0,047±0,27; p<0,05), quando comparado ao Controle (0,63±0,12) e ao Glucantime (0,56±0,12). Isso foi relacionado com a importante diminuição da carga parasitária observada nos grupos CXCL10 e CXCL10+Glucantime, no LN (1,17x103 ± 0,85 x 103; 2,05x103 ± 1,50x103, respectivamente) quando comparado ao Controle (3,2x104 ± 1,97x104) e ao Glucantime (1,18x105 ± 1,12x105). Em relação às citocinas, o tratamento com CXCL10 mostrou altas concentrações de IFN-γ, IL-10 e TGF-β, e baixa produção de IL-4. Em contrapartida, nos grupos Controle e Glucantime, foi observada maior produção de IL-4. Esses dados corroboram também com os achados histopatológicos que mostraram que os animais tratados com CXCL10, associado ou não ao Glucantime, apresentaram uma inflamação não exacerbada, com ausência de necrose, menor parasitismo, presença de granulomas e infiltrado celular com mais macrófagos ativados, muitos linfócitos e poucos plasmócitos, em relação ao Controle e ao Glucantime. Em suma, CXCL10 e a associação CXCL10+Glucantime induziram lesões menores, não ulceradas, com diminuição da carga parasitária mais precocemente, conduzindo à resolução da doença através de uma resposta imunológica com alta produção de IFN-γ e baixa produção de IL-4, e controle da inflamação modulado por IL-10 e TGF-

O líquen plano oral (LPO) é uma doença inflamatória crônica que afeta em torno de 1 a 2% da população mundial adulta, entre 30 e 60 anos, principalmente mulheres. As lesões podem estar presentes em diversos sítios, porém tem predileção pela mucosa jugal, gengiva e bordas laterais da língua, todas bilateralmente. As manifestações de LPO são frequentes, e podem se caracterizar clinicamente em seis tipos: reticular, em placas, papular, atrófico, erosivo-ulcerativo e bolhoso, porém o mais comum é o reticular. O presente estudo teve como objetivo avaliar a expressão de genes relacionados à resposta inflamatória e autoimunidade no líquen plano oral (LPO) em pacientes com a variante exclusivamente reticular comparado a controle saudável. Foram incluídos consecutivamente 10 pacientes com LPO que preencheram os critérios de inclusão adotados, sendo 9 mulheres e um homem, e 6 indivíduos controle, sendo 4 mulheres e 2 homens pareados por sexo, idade e uso de medicações sistêmicas. Amostras de mucosa bucal foram coletadas por meio de biópsia incisional em ambos os grupos de pacientes e submetidas à extração de RNA para posterior análise da expressão gênica por PCR-array selecionada para este estudo. Os resultados obtidos foram o aumento da expressão de 8 genes, CXCL 9 e CXCL 10 vão de acordo com a literatura, corroborando com nosso estudo e de certa forma reafirmar mais necessidade de estudos bem desenhados . / The oral lichen planus (OLP) is a chronic inflammatory disease that affects around 1-2% of the adult population between 30 and 60 years, mainly women. The lesions may be present in several sites, but has a predilection for the buccal mucosa, gums and lateral borders of the tongue, all bilaterally. The manifestations of OLP are frequent, and may be characterized clinically in six types: reticular, plaque-like, papular, atrophic, erosive-ulcerative and bullous, but the most common is the reticular . The present study aimed to evaluate the expression of genes related to inflammatory response and autoimmunity in oral lichen planus (OLP) in patients with exclusively reticular variant compared to healthy control. 10 consecutive patients with OLP who met the inclusion criteria, 9 women and one man, and six control subjects were included were 4 women and 2 being proportionally matched by sex, age and use of systemic medications men. Samples of oral mucosa were collected by incisional biopsy in both groups of patients and subjected to RNA extraction for analysis of gene expression by selected for this study-PCR array. The results were the overexpression of genes 8, where only two of them go according to the literature, corroborating our study and somehow reaffirm need for more well-designed studies.

O líquen plano oral (LPO) é uma doença inflamatória crônica que afeta em torno de 1 a 2% da população mundial adulta, entre 30 e 60 anos, principalmente mulheres. As lesões podem estar presentes em diversos sítios, porém tem predileção pela mucosa jugal, gengiva e bordas laterais da língua, todas bilateralmente. As manifestações de LPO são frequentes, e podem se caracterizar clinicamente em seis tipos: reticular, em placas, papular, atrófico, erosivo-ulcerativo e bolhoso, porém o mais comum é o reticular. O presente estudo teve como objetivo avaliar a expressão de genes relacionados à resposta inflamatória e autoimunidade no líquen plano oral (LPO) em pacientes com a variante exclusivamente reticular comparado a controle saudável. Foram incluídos consecutivamente 10 pacientes com LPO que preencheram os critérios de inclusão adotados, sendo 9 mulheres e um homem, e 6 indivíduos controle, sendo 4 mulheres e 2 homens pareados por sexo, idade e uso de medicações sistêmicas. Amostras de mucosa bucal foram coletadas por meio de biópsia incisional em ambos os grupos de pacientes e submetidas à extração de RNA para posterior análise da expressão gênica por PCR-array selecionada para este estudo. Os resultados obtidos foram o aumento da expressão de 8 genes, CXCL 9 e CXCL 10 vão de acordo com a literatura, corroborando com nosso estudo e de certa forma reafirmar mais necessidade de estudos bem desenhados . / The oral lichen planus (OLP) is a chronic inflammatory disease that affects around 1-2% of the adult population between 30 and 60 years, mainly women. The lesions may be present in several sites, but has a predilection for the buccal mucosa, gums and lateral borders of the tongue, all bilaterally. The manifestations of OLP are frequent, and may be characterized clinically in six types: reticular, plaque-like, papular, atrophic, erosive-ulcerative and bullous, but the most common is the reticular . The present study aimed to evaluate the expression of genes related to inflammatory response and autoimmunity in oral lichen planus (OLP) in patients with exclusively reticular variant compared to healthy control. 10 consecutive patients with OLP who met the inclusion criteria, 9 women and one man, and six control subjects were included were 4 women and 2 being proportionally matched by sex, age and use of systemic medications men. Samples of oral mucosa were collected by incisional biopsy in both groups of patients and subjected to RNA extraction for analysis of gene expression by selected for this study-PCR array. The results were the overexpression of genes 8, where only two of them go according to the literature, corroborating our study and somehow reaffirm need for more well-designed studies.