Orientadores: Maria Helena Andrade Santana, Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-27T04:52:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cabral_ElaineChristinedeMagalhaes_M.pdf: 3268697 bytes, checksum: 8b95028e2d3a4b7e0485f9f5f6958725 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A pesquisa no campo de doenças auto-imunes vem despertando grande interesse, pelas dificuldades de diagnóstico preciso e necessidade de melhor conhecimento das suas causas e mecanismos. O ensaio ELlSA (Enzyme-linked immunosorbent assay) é o mais utilizado para a detecção de auto-anticorpos. Nesse método, os problemas apresentados estão baseados na variabilidade dos kits disponíveis e na natureza multi-etapas envolvida na detecção dos auto-anticorpos. Visando contornar esses problemas, neste trabalho, foi desenvolvido um método de detecção de auto-anticorpos, quantitativo e qualitativo, em única etapa, baseado no reconhecimento molecular e desenvolvimento do sinal colorimétrico, usando lipossomas polimerizados. Na preparação dos lipossomas monoméricos foi usada cardiolipina como ligante específico e ácido 10,12-tricosadiinóico como lipídio estrutural. Os lipossomas polimerizados sob irradiação UV, absorveram a luz no comprimento de onda referente ao azul635nm, púrpura540nm e rosa480nm. A adsorção de auto-anticorpos na superfície dos lipossomas e o desenvolvimento do sinal colorimétrico foram estudados com soros de referência, de indivíduo sadio e auto-imunes. Os resultados experimentais mostraram que a preparação dos lipossomas polimerizados foi reprodutível. A adsorção de auto-anticorpos na superfície. desses lipossomas produziu resposta colori métrica, com alta sensibilidade de mudança de cor do "azul" ou "púrpura" para "rosa", detectável em única etapa. A especificidade do sistema foi 7 vezes maior com soro de referência que com IgG. A utilização de soros auto­imune e sadio reduziu a especificidade do sistema, devido às interferências dos outros componentes do soro. Esses resultados mostraram a potencial idade dos lipossomas polimerizados para a detecção de auto-anticorpos, pela reprodutibilidade do sistema e desenvolvimento de sinal em única etapa / Abstract: The research in the field of autoimmune diseases has been increased in the last years, due to the difficulties on the precise diagnostic, and the knowledgement of its causes and mechanisms. ELlSA (Enzyme -linked immunosorbent assay), commercially available, is the most used method for detection of autoantibodies. The problems presented in its procedure are based on the variability of the commercial kits and on the multi-steps included on the autoantibodies detection. Aiming to circumvent these problems, a alternative method for detection of autoantibodies using polymerized liposomes was developed in this work. The main advantage of this approach is the reprodutibility of the liposomes and the molecular recognition and development of colorimetric signal in only one step. Monomeric liposomes were prepared using cardiolipin a na affinity ligand and 10,12­tricosadiynoic acid as structural lipid. The polymerization was performed by UV irradiation in the blue, purple and pink phase. The adsorption of antibodies and the development of the colorimetric signal was studied using reference, normal and autoimmune sera. The experimental results showed that the polymerized were reprodutibles and stable during 5 months. The adsorption of autoantibodies on the surface of polymerized liposomes produced a colorimetric response trom the blue or purple to pink phase. The sensibility of the system was high, and the specificity was 60% compared the responses with reference serum and non specific immunoglobulin G. When real sera was used, the specificity of decreased due to interferences of the other components of the serum. The results show the potentiality of polymerized liposomes for detection of antibodies, due to reprodutibility of liposomes preparation and development of a colorimetric signal in only one ste / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Nailton Monteiro do Nascimento Júnior / Banca: Claudio Viegas Júnior / Banca: Adriano Defini Andricopulo / Resumo: Visando a obtenção de compostos inéditos com atividade agonista em receptores nicotínicos de acetilcolina do subtipo α7 (nAChRs α7) para o tratamento da doença de Alzheimer, este trabalho foi iniciado a partir da estrutura cristalográfica do receptor α7 co-cristalizado com a lobelina, seguido de posterior validação do modelo in silico por redocagem e com ligantes da literatura com atividades in vitro conhecidas. Os ligantes foram construídos considerando o estado de protonação em pH fisiológico utilizando o programa Discovery Studio Visualizer e otimizados através do método semiempírico PM7 com o programa MOPAC 2016. A validação por redocagem do modelo do nAChR α7 foi baseada na análise de diferentes funções de pontuação (ChemPLP, ChemScore, GoldScore e ASP) para avaliar a orientação espacial dos ligantes (RMSD) e as interações ligante-receptor relevantes. Discovery Studio foi utilizado para analisar as interações previstas, as quais foram obtidas no programa GOLD e visualizadas no programa PyMol. De todas as funções de pontuação analisadas, a ASP forneceu os melhores resultados, apresentando pequenas variações de pontuação entre a pose com menor RMSD e a pose com melhor pontuação. Além disso, o modelo in silico foi capaz de prever corretamente as interações-chave entre os resíduos de aminoácidos com os quais a lobelina interage e das moléculas da literatura. Dessa forma, essa metodologia foi utilizada na triagem virtual dos 28 compostos planejados como ligantes do nAChR α7, ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Aiming to achieve novel compounds with agonist activity at 7 nicotinic acetylcholine receptors (7 nAChRs) for the treatment of Alzheimer's disease, this work has started by using the crystallographic structure of 7 receptor co-crystallized with lobeline followed by validation of the in silico model with ligands from the literature with known in vitro activities. The ligands were constructed considering the protonation state at physiological pH using the Discovery Studio software and using the PM7 semiempiric method with MOPAC 2016. The validation for the nAChRα7 model was based on the analysis of several scoring functions (ChemPLP, ChemScore,GoldScore and ASP) for a spatial orientation of ligands (RMSD) and as relevant ligand-receptor interactions. Discovery Studio was used to analyze the expected interactions, performed in the GOLD software and viewed in the PyMol software. Of all the analyzed scoring functions, the ASP provided the best results, presenting small variations between the pose with lower RMSD and the pose with the best score. In addition, the in silico model was able to correctly predict the interactions between the amino acid residues with which lobelin interacts and the molecules of the literature. Thus, this methodology was applied in the virtual screening of the 28 nAChRα7 ligands, in combination with the molecular docking results of the bioactive compounds in the literature. In parallel, molecular dynamics studies were applied in order to optimize the ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Pablo Alejandro Fiorito. / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2010.