Considerando a importância comercial da perdiz (Rhynchotus rufescens), implantou-se algumas biotecnologias reprodutivas. Trinta animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos: controle (sem selênio orgânico) e tratamento (com 0,2 a 0,8mg de selênio em 1000kgs de ração ), provenientes da FCAV-UNESP/Jaboticabal (2007-2008). Coletou-se semên por excitação manual que foram aliquotados em pools com 150&micro;L. Após a avaliação do volume, motilidade, vigor, números de espermatozóides, concentração e morfologia espermática, diluiu-se 20&micro;l de sêmen em 300&micro;l de solução fisiológica para testar a Integridade das membranas acrossomal e plasmática e avaliação da atividade mitocondrial. Uma outra alíquota de 20&micro;l foi utilizada para testar a resistência dos espermatozóides ao estresse oxidativo, induzido (vitamina C + sulfato ferroso), por meio da dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). A amostra restante foi congelada diretamente em nitrogênio líquido para a realização do teste da integridade do DNA espermático e para medir a atividade das enzimas antioxidantes Catalase e Glutationa Peroxidase. Contou-se 200 células, para avaliação da integridade acrossomal e de membrana, atividade mitocondrial e ensaio cometa e classificou-as: 1) Acrossomo Íntegro: cor lilás e Não-Íntegro: róseo; 2)Células Vivas (não coradas) e Mortas (coradas), 3) Classes de I a IV, sendo Classe I (todas as mitocôndrias íntegras) com a peça intermediária totalmente corada e Classe IV (todas as mitocôndrias comprometidas) com a peça intermediária totalmente descorada e 4) Cometa I a IV, sendo Cometa I (DNA íntegro): células com halo ao seu redor e núcleo corado, porém sem cauda de cometa evidente e Cometa IV (DNA altamente fragmentado): célula com núcleo completamente descorado e apenas a cauda do cometa, respevtivamente. Os dados foram analisados pelo SAS, System for Windows. Nenhuma diferença foi encontrada para volume, motilidade, vigor, número de espermatozóides, concentração, integridade acrossomal, integridade da membrana plasmática, Classes I e III da atividade mitocondrial, Cometa I,II e IV, TBARS e atividade da Glutationa. Foram encontradas diferenças nas Classes II (Se=33,39±2,93 e Controle=44,39±2,59, p=0.0125 e IV (Se=3,44±0,09 e Controle=1,50±0,38, p=0.0401) e Cometa III (Se=16,00 ± 0,82 e Controle=34,75 ± 1,44, p=<.0001), respectivamente. A diferença encontrada no DAB II pode ser devido aos danos causados na arquitetura da peça intermediária pela deficiência de selênio, o que compromete a mobilidade e a capacidade de fecundação do espermatozóide. Para o DAB IV, não era esperado esse resultado, que pode ser devido aos pequenos valores encontrados para essa variável (Se=3,44% e Controle=1,50%) em relação ao total das classes e que poderia não ser significante se levássemos em consideração as classes juntas. Em relação a porcentagem mais baixa de espermatozóides do grupo suplementado com selênio para a classe III do Ensaio Cometa, pode sugerir um efeito de proteção desta substância, possivelmente devido a um índice mais elevado da Glutationa Peroxidase. / Considering the commercial value of the partridges (Rhynchotus rufescens), the employment of reproductive biotechnologies has been attempted. Thirty animals were randomly assigned into two groups: control group (no selenium) and treatment group (supplemented with 0,2 a 0,8mg selenium/ 1000kgs ration). Animals were allocated at the FCAV - UNESP/Jaboticabal (2007-2008). Semen collections were performed by digital manipulation and divided in pools of at least 150&micro;L. After the immediate evaluation of volume, motility, vigour, concentration and morphology, an aliquot of 20&micro;L was diluted in 300&micro;L of physiologic solution in order to test acrosome and membrane integrities and mitochondrial activity. Another aliquot of 20 &micro;L was used to test the resistance of sperm against the induced oxidative stress (Vitamin C + ferrous sulphate), followed by the measurement of TBARS. The remaining semen sample was frozen directly in liquid nitrogen in orther to perform the comet assay and to measure the activity of the antioxidant enzymes catalase and glutathione peroxidase. Cells were evaluated respectively for acrosome and membrane integrities, mitochondrial activity and comet assay as follows: 1) Intact acrosome: lilac acrosome; Non-intact acrosome: pink acrosome; 2) Live cells: non stained; Dead: stained; 3) Classes I to IV, being Class I (full mitochondrial potential): midpiece totally stained and class IV (no mitochondrial potential): midpiece not stained; 4) Classes I to IV, being Class I (intact DNA): nucleus with intense fluorescence with no comet tail; Class IV (highly fragmented DNA): no nucleus, only a comet tail. Data was statistically anlysed using the SAS System for Windows. No differences were found on volume, motility, vigour, number of spermatozoa, concentration, acrosomal and membrane integrity, Classes I and III of mitochondrial activity, Comets I, II and IV, TBARS and Glutathione activity. Differences were found on as DAB Classes II (Se=33.39±2.93 and control=44.39±2.59, p=0.0125) and IV (Se=3.44±0.09 and control=1.50±0.38, p=0.0401) and comet class III (Se=16.00 ± 0.82 and control=34.75 ± 1.44, p=<.0001), respectively. The difference found on DAB II may be due to the damages caused by the selenium deficiency to the architecture of the midpiece, which compromises sperm mobility and fertilization capacity. On the other hand, the unexpected difference found on DAB IV may be due to the small values found for this variable in all animals (Se=3.44% and control=1.50%), which would be not significant taking into account all classes. The decreased percentage of sperm showing DNA fragmentation Class II found on the selenium supplemented group may suggest a protective effect of this substance on sperm DNA, possibly due to a higher GPx content.

A ema (Rhea americana), é uma ave nativa da América do Sul, e pertence ao grupo das Ratitas. Considerando a importância comercial desse animal foram implantadas algumas biotecnologias reprodutivas, como coleta e avaliação de sêmen que ajudariam na preservação da espécie, assim como na disseminação de material genético. Nesse estudo utilizou-se 107 animais, dentro e fora da estação reprodutiva, com idade entre 3 e 4 anos, que encontravam-se no Estado de São Paulo, durante os anos de 2001, 2002 e 2003. Observou-se os animais para identificação de dominância. Os machos foram contidos em caixa de madeira adaptada e capuz preto. Após a contenção realizou-se a coleta de sêmen através de massagem digital. Os falos foram analisados quanto ao tamanho e formação de espiral. Alguns parâmetros seminais foram avaliados: volume, motilidade, concentração e número de espermatozóides por ejaculado. Foi coletado sangue da veia metatarsal, de animais dentro e fora da estação reprodutiva para dosagem de nível plasmático de testosterona. Dos 69 animais em estação reprodutiva, 44 apresentaram falos grandes e desses, 26 formaram espiral. A coleta de sêmen através de massagem digital mostrou-se eficiente para esses animais. O sêmen foi analisado quanto ao volume (0,68±0,14), motilidade (61,11±11,54%), concentração (3,29±1,33x109sptz/ml) e número por ejaculado (2,40±1,38x109sptz/ml) e foram descritas algumas patologias espermáticas. Encontrou-se diferença estatística significante (p=0,0161) de níveis plasmáticos de testosterona em animais dentro e fora da estação reprodutiva (53,28±18,41ng/ml e 5,57±3,81ng/ml, respectivamente). Foram relatadas variações de tamanho de falos em animais dentro e fora da estação e animais em estação reprodutiva. Observou-se que animais que apresentavam falos maiores e níveis plasmáticos de testosterona foram os considerados dominantes através de observações comportamentais. Os resultados do presente experimento confirmam a possibilidade de coleta de sêmen de emas e o seu uso em futuras biotecnologias como a inseminação artificial. / The rhea (Rhea americana), a native bird from South America, belongs to the Ratite group. Considering the commercial significance of this animal were standardize some techniques such as semen collection. These techniques aim to optimize the reproductive traits of this animal and to allow the dissemination and preservation of the genetic material of this endangered specie. In this study, 107 male rheas were used. The animals were around 3 and 4 years old and were raised in São Paulo’s State commercial breeding. Semen collections were performed during breeding and non breeding seasons of 2001, 2002 and 2003. Animals were observed in order to detect hierarchic behavior. Contention was performed using a box and a black hood. Semen collection was performed through a digital pressure in the base of the phallus, which were observed in order to detect size and spiral shape. Immediately after collection semen samples were evaluated for volume, motility, sperm concentration and morphology. In a limited number of animals, blood samples were collected by the metatarsal vein in order to measure testosterone levels. Among 69 animals in breeding season, 44 showed larger phallus and among those, 26 showed spiral shape. The method of semen collection showed good results. Semen was then evaluated for volume (0.68±0.14 ml), motility ( 61.11±11.54%), sperm concentration (3,29±1,33x109sptz/ml) and number of spermatozoa per ejaculate (2.40±1.38x109sptz/ml). Morphological abnormalities were analyzed and accounted. Statistical differences (p=0.0161) were found for testosterone levels between animals during breeding and non-breeding season (53.28±18.41ng/ml e 5.57±3.81ng/ml, respectively). It was observed that animals showed variations in phallus size during breeding and non-breeding seasons. A relationship was found between animals with larger phallus and higher testosterone levels and dominant behavior. Results of the present experiment confirmed the possibility of collecting semen from rheas in order to use it in future biotechnologies such as artificial insemination.

A ema (Rhea americana), é uma ave nativa da América do Sul, e pertence ao grupo das Ratitas. Considerando a importância comercial desse animal foram implantadas algumas biotecnologias reprodutivas, como coleta e avaliação de sêmen que ajudariam na preservação da espécie, assim como na disseminação de material genético. Nesse estudo utilizou-se 107 animais, dentro e fora da estação reprodutiva, com idade entre 3 e 4 anos, que encontravam-se no Estado de São Paulo, durante os anos de 2001, 2002 e 2003. Observou-se os animais para identificação de dominância. Os machos foram contidos em caixa de madeira adaptada e capuz preto. Após a contenção realizou-se a coleta de sêmen através de massagem digital. Os falos foram analisados quanto ao tamanho e formação de espiral. Alguns parâmetros seminais foram avaliados: volume, motilidade, concentração e número de espermatozóides por ejaculado. Foi coletado sangue da veia metatarsal, de animais dentro e fora da estação reprodutiva para dosagem de nível plasmático de testosterona. Dos 69 animais em estação reprodutiva, 44 apresentaram falos grandes e desses, 26 formaram espiral. A coleta de sêmen através de massagem digital mostrou-se eficiente para esses animais. O sêmen foi analisado quanto ao volume (0,68±0,14), motilidade (61,11±11,54%), concentração (3,29±1,33x109sptz/ml) e número por ejaculado (2,40±1,38x109sptz/ml) e foram descritas algumas patologias espermáticas. Encontrou-se diferença estatística significante (p=0,0161) de níveis plasmáticos de testosterona em animais dentro e fora da estação reprodutiva (53,28±18,41ng/ml e 5,57±3,81ng/ml, respectivamente). Foram relatadas variações de tamanho de falos em animais dentro e fora da estação e animais em estação reprodutiva. Observou-se que animais que apresentavam falos maiores e níveis plasmáticos de testosterona foram os considerados dominantes através de observações comportamentais. Os resultados do presente experimento confirmam a possibilidade de coleta de sêmen de emas e o seu uso em futuras biotecnologias como a inseminação artificial. / The rhea (Rhea americana), a native bird from South America, belongs to the Ratite group. Considering the commercial significance of this animal were standardize some techniques such as semen collection. These techniques aim to optimize the reproductive traits of this animal and to allow the dissemination and preservation of the genetic material of this endangered specie. In this study, 107 male rheas were used. The animals were around 3 and 4 years old and were raised in São Paulo’s State commercial breeding. Semen collections were performed during breeding and non breeding seasons of 2001, 2002 and 2003. Animals were observed in order to detect hierarchic behavior. Contention was performed using a box and a black hood. Semen collection was performed through a digital pressure in the base of the phallus, which were observed in order to detect size and spiral shape. Immediately after collection semen samples were evaluated for volume, motility, sperm concentration and morphology. In a limited number of animals, blood samples were collected by the metatarsal vein in order to measure testosterone levels. Among 69 animals in breeding season, 44 showed larger phallus and among those, 26 showed spiral shape. The method of semen collection showed good results. Semen was then evaluated for volume (0.68±0.14 ml), motility ( 61.11±11.54%), sperm concentration (3,29±1,33x109sptz/ml) and number of spermatozoa per ejaculate (2.40±1.38x109sptz/ml). Morphological abnormalities were analyzed and accounted. Statistical differences (p=0.0161) were found for testosterone levels between animals during breeding and non-breeding season (53.28±18.41ng/ml e 5.57±3.81ng/ml, respectively). It was observed that animals showed variations in phallus size during breeding and non-breeding seasons. A relationship was found between animals with larger phallus and higher testosterone levels and dominant behavior. Results of the present experiment confirmed the possibility of collecting semen from rheas in order to use it in future biotechnologies such as artificial insemination.

Considerando a importância comercial da perdiz (Rhynchotus rufescens), implantou-se algumas biotecnologias reprodutivas. Trinta animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos: controle (sem selênio orgânico) e tratamento (com 0,2 a 0,8mg de selênio em 1000kgs de ração ), provenientes da FCAV-UNESP/Jaboticabal (2007-2008). Coletou-se semên por excitação manual que foram aliquotados em pools com 150&micro;L. Após a avaliação do volume, motilidade, vigor, números de espermatozóides, concentração e morfologia espermática, diluiu-se 20&micro;l de sêmen em 300&micro;l de solução fisiológica para testar a Integridade das membranas acrossomal e plasmática e avaliação da atividade mitocondrial. Uma outra alíquota de 20&micro;l foi utilizada para testar a resistência dos espermatozóides ao estresse oxidativo, induzido (vitamina C + sulfato ferroso), por meio da dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). A amostra restante foi congelada diretamente em nitrogênio líquido para a realização do teste da integridade do DNA espermático e para medir a atividade das enzimas antioxidantes Catalase e Glutationa Peroxidase. Contou-se 200 células, para avaliação da integridade acrossomal e de membrana, atividade mitocondrial e ensaio cometa e classificou-as: 1) Acrossomo Íntegro: cor lilás e Não-Íntegro: róseo; 2)Células Vivas (não coradas) e Mortas (coradas), 3) Classes de I a IV, sendo Classe I (todas as mitocôndrias íntegras) com a peça intermediária totalmente corada e Classe IV (todas as mitocôndrias comprometidas) com a peça intermediária totalmente descorada e 4) Cometa I a IV, sendo Cometa I (DNA íntegro): células com halo ao seu redor e núcleo corado, porém sem cauda de cometa evidente e Cometa IV (DNA altamente fragmentado): célula com núcleo completamente descorado e apenas a cauda do cometa, respevtivamente. Os dados foram analisados pelo SAS, System for Windows. Nenhuma diferença foi encontrada para volume, motilidade, vigor, número de espermatozóides, concentração, integridade acrossomal, integridade da membrana plasmática, Classes I e III da atividade mitocondrial, Cometa I,II e IV, TBARS e atividade da Glutationa. Foram encontradas diferenças nas Classes II (Se=33,39±2,93 e Controle=44,39±2,59, p=0.0125 e IV (Se=3,44±0,09 e Controle=1,50±0,38, p=0.0401) e Cometa III (Se=16,00 ± 0,82 e Controle=34,75 ± 1,44, p=<.0001), respectivamente. A diferença encontrada no DAB II pode ser devido aos danos causados na arquitetura da peça intermediária pela deficiência de selênio, o que compromete a mobilidade e a capacidade de fecundação do espermatozóide. Para o DAB IV, não era esperado esse resultado, que pode ser devido aos pequenos valores encontrados para essa variável (Se=3,44% e Controle=1,50%) em relação ao total das classes e que poderia não ser significante se levássemos em consideração as classes juntas. Em relação a porcentagem mais baixa de espermatozóides do grupo suplementado com selênio para a classe III do Ensaio Cometa, pode sugerir um efeito de proteção desta substância, possivelmente devido a um índice mais elevado da Glutationa Peroxidase. / Considering the commercial value of the partridges (Rhynchotus rufescens), the employment of reproductive biotechnologies has been attempted. Thirty animals were randomly assigned into two groups: control group (no selenium) and treatment group (supplemented with 0,2 a 0,8mg selenium/ 1000kgs ration). Animals were allocated at the FCAV - UNESP/Jaboticabal (2007-2008). Semen collections were performed by digital manipulation and divided in pools of at least 150&micro;L. After the immediate evaluation of volume, motility, vigour, concentration and morphology, an aliquot of 20&micro;L was diluted in 300&micro;L of physiologic solution in order to test acrosome and membrane integrities and mitochondrial activity. Another aliquot of 20 &micro;L was used to test the resistance of sperm against the induced oxidative stress (Vitamin C + ferrous sulphate), followed by the measurement of TBARS. The remaining semen sample was frozen directly in liquid nitrogen in orther to perform the comet assay and to measure the activity of the antioxidant enzymes catalase and glutathione peroxidase. Cells were evaluated respectively for acrosome and membrane integrities, mitochondrial activity and comet assay as follows: 1) Intact acrosome: lilac acrosome; Non-intact acrosome: pink acrosome; 2) Live cells: non stained; Dead: stained; 3) Classes I to IV, being Class I (full mitochondrial potential): midpiece totally stained and class IV (no mitochondrial potential): midpiece not stained; 4) Classes I to IV, being Class I (intact DNA): nucleus with intense fluorescence with no comet tail; Class IV (highly fragmented DNA): no nucleus, only a comet tail. Data was statistically anlysed using the SAS System for Windows. No differences were found on volume, motility, vigour, number of spermatozoa, concentration, acrosomal and membrane integrity, Classes I and III of mitochondrial activity, Comets I, II and IV, TBARS and Glutathione activity. Differences were found on as DAB Classes II (Se=33.39±2.93 and control=44.39±2.59, p=0.0125) and IV (Se=3.44±0.09 and control=1.50±0.38, p=0.0401) and comet class III (Se=16.00 ± 0.82 and control=34.75 ± 1.44, p=<.0001), respectively. The difference found on DAB II may be due to the damages caused by the selenium deficiency to the architecture of the midpiece, which compromises sperm mobility and fertilization capacity. On the other hand, the unexpected difference found on DAB IV may be due to the small values found for this variable in all animals (Se=3.44% and control=1.50%), which would be not significant taking into account all classes. The decreased percentage of sperm showing DNA fragmentation Class II found on the selenium supplemented group may suggest a protective effect of this substance on sperm DNA, possibly due to a higher GPx content.