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Positionelle Klonierung von Tbc1d1 als Kandidatengen für Adipositas / Positional cloning of Tbc1d1 as candidate gene for obesityLeicht, Katja January 2008 (has links)
Nob1 (New Zealand obese 1) bezeichnet einen Adipositas-QTL auf Chr. 5 der Maus (LODBMI >3,3), der in einem Rückkreuzungsexperiment der Mausstämme NZO (adipös) und SJL (schlank) identifiziert wurde. Um Kandidatengene für Adipositas zu finden, wurden mehr als 300 Nob1-Transkripte mit Hilfe von Genexpressionsanalysen auf Unterschiede in stoffwechselrelevanten Geweben zwischen beiden Mausstämmen untersucht. Sieben Gene zeigten eine differentielle Expression: 2310045A20Rik, Tbc1d1, Ppp1cb, Mll5, Insig1, Abhd1 und Alox5ap. Die codierenden Bereiche dieser Gene wurden anschließend auf Sequenzunterschiede zwischen NZO und SJL untersucht. Nur im Gen Tbc1d1, das im Peak-Bereich des Nob1 lokalisiert ist, wurde eine SJL-spezifische Deletion von sieben Basen detektiert, die zu einer Leserasterverschiebung und einem vorzeitigen Abbruch des Proteins in der funktionellen Rab-GAP-Domäne führt (Loss-of-Function-Mutation). Interessanterweise wurde eine Variante von TBC1D1 (R125W) in Kopplungsanalysen mit Adipositas beim Menschen assoziiert (Stone et al., 2006). TBC1D1 zeigt eine hohe Homologie zu TBC1D4 (AS160), das im Insulinsignalweg eine wichtige Rolle spielt. In 17 weiteren Genen im Peak-Bereich des Nob1 wurde keine weitere SJL-spezifischen Mutation detektiert. Bei NZO-Tieren erfolgte die Tbc1d1-mRNA-Expression vorwiegend in glycolytischen Fasern des Skelettmuskels. Zudem wurden zwei gewebsspezifisch exprimierte Tbc1d1-Isoformen identifiziert, die sich durch alternatives Splicen der Exone 12 und 13 unterscheiden.
Die im Rahmen dieser Arbeit gefundenen Ergebnisse machen Tbc1d1 zu einem plausiblen Kandidatengen für den Nob1-QTL. Welche Funktion Tbc1d1 im Glucose- und Fettstoffwechsel des Skelettmuskels hat, muss in weiteren Analysen untersucht werden. / Nob1 (New Zealand obese 1) has been identified as an obesity QTL on chromosome 5 (LODBMI >3,3) in a backcross experiment of obese NZO and lean SJL mice. To identify candidate genes for obesity expression profiling experiments with RNA from metabolic tissues were performed with more than 300 Nob1-genes. Seven genes showed differences in mRNA expression levels between both strains: 2310045A20Rik, Tbc1d1, Ppp1cb, Mll5, Insig1, Abhd1, and Alox5ap. Sequencing of the coding regions of these genes revealed a SJL-specific deletion of seven basepairs in the Tbc1d1 gene that is located in the peak region of Nob1. This mutation leads to a frameshift resulting in a truncated protein that lacks the important Rab-GAP-domain (Loss-of-Function-mutation). Interestingly, linkage analysis of the R125W-variant of TBC1D1 has been recently associated with human obesity. TBC1D1 shows high homology to TBC1D4 (AS160) that plays an important role in the insulin signaling pathway. No other SJL-specific mutations were detected in 17 further genes in the Nob1 peak region. In NZO mice Tbc1d1 mRNA is predominantly expressed in glycolytic fibres of skeletal muscle. Two isoformes were identified differing in alternative spliced exons 12 and 13 and showing a tissue specific mRNA expression.
The results presented in this work make Tbc1d1 a very feasible candidate gene to be causal for Nob1. The function of Tbc1d1 in the metabolism of carbohydrates and fat has yet to be analyzed.
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Indução da neurite autoimune experimental (NAE) em camundongos SJL/J através de injeção de proteína P2 da mielina do nervo periférico (MNP) / Induction of experimental autoimmune neuritis in SJL/J mice by injecting protein P2 from myelin of the nerve Peripheral (NMP)Mendes, Vania Alice de Aguiar 28 May 2012 (has links)
A neurite auto-imune experimental (NAE) é uma polineuropatia desmielinizante monofásica do sistema nervoso periférico (SNP). A NAE é considerada modelo experimental da síndrome de Guillain-Barré (SGB). Por se tratar de uma doença autoimune, pode ser induzida experimentalmente em camundongos geneticamente susceptíveis, através da imunização com componentes da mielina de nervos periféricos. Para a indução da NAE podem ser utilizados P0 e P2, proteínas da mielina do nervo periférico, ou sequências conhecidas de peptídeos dessas proteínas 180-199 e 58-81 respectivamente, consideradas neuritogênicas, ou ainda transferência adotiva de lifócitos T CD4+, oriundas de camundongos previamente imunizados. Para o presente estudo foram utilizados camundongos fêmeas SJL/J nãográvidas, com idade entre 8 e 12 semanas, pesando de 17 a 20 g. Os animais foram divididos em dois grupos: um controle e outro com NAE. 200 µg da sequência de peptídeos 58-81 de P2 emulsificada em 100 µl de adjuvante de Freund completo (AFC) foram injetados por via subcutânea, em quatro locais na região lombar. Para os controles, foi utilizado solução tamponada de fosfato (PBS), emulsionada em AFC desprovida da sequência 58-81 de peptídeos P2, injetada no mesmo local, na mesma quantidade e forma. Cada camundongo tratado com P2 recebeu 200 ng de toxina pertussis em 100 ?L de PBS intraperitonealmente (i.p.) nos dias 0 e 2 pós-imunização (p.i.). No grupo controle, volumes iguais de PBS e toxina pertussis foram administrados pela mesma via sem o peptídeo. Avaliações da motricidade foram realizadas diariamente até o 60º dia, além de análises funcionais e eletroneuromiográficas. Foram encontradas alterações exclusivamente eletrofisiológicas, desmielinizantes e axonais, em cerca de dois terços dos camundongos. Sendo o camundongo SJL/J considerado o camundongo mais susceptível para a provocação de NAE, os achados do presente estudo indicam a limitação do modelo: ausência de alterações motoras detectáveis clinicamente, ocorrendo distúrbios eletrofisiológicos em apenas parte dos animais. O melhor modelo de NAE continua sendo o provocado no rato Lewis por proteína da mielina periférica bovina. É desejável que se continue buscando modelo experimental de NAE em camundongos, tendo em vista que essa espécie animal é a mais bem estudada na Biologia animal e, por essa razão, dela haver extensa variedade de imunobiológicos disponíveis para estudo da patogenia e fisiopatologia de doenças auto-imunes. / Experimental autoimmune neurits (EAN) is a monophasic demyelinating disease of the peripheral nervous system (PNS). EAN is considered to be the experimental model for Guillain-Barré syndrome (GBS). EAN can be induced in genetically susceptible mice using peripheral myelin components as immunogens: peripheral nerve myelin proteins P0 or P2; peptides sequences of those proteins considered neuritogenic, or the adoptive transfer of TCD4+ lymphocytes from previously immunized mice. In the present study non-pregnant female SJL/J mice aged 8-12 weeks weighint 17-20 g where used. The experimental group was treated as follows. Peptides sequence of P2 (200 µg) emulsified in complete Freund adjuvant (CFA) (100 µl) injected in four sites at the lumbar paravertebral region s.c. Controls were injected in the same sites with equal quantities of phosphate buffer solution emulsified in CFA without the peptides sequence. Each mouse treated with P2 was also treated with 200 ng pertussis toxin in 100 ?L PBS i.p. at the days 0 and 2 post-immunisation. Controls were injected i.p. with equal volumes of PBS and pertussis toxin free of the peptides sequence. Motor strength, posture and coordination were evaluated daily until the 60th day postinoculation besides eletroneuromyographic (EMG) evaluation on the 10th and 30thy days of some mice. No clinical disturbances were observed and in two thirds of the animals demyelinating and axonal features were detected at the EMG. SJL/J mice are considered the most susceptible mouse strain for NAE induction but the findings of the present study indicates the limitations of the model and its reproducibility. The best NAE model is yet the obtained in Lewis rat. It is important to look for a mouse model of EAN because this animal species is the most studied in the animal Biology. The extensive variety of immunobiologic products from mice allows performing studies on the pathogeny or physiopathology of autoimmune diseases more easily.
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Indução da neurite autoimune experimental (NAE) em camundongos SJL/J através de injeção de proteína P2 da mielina do nervo periférico (MNP) / Induction of experimental autoimmune neuritis in SJL/J mice by injecting protein P2 from myelin of the nerve Peripheral (NMP)Vania Alice de Aguiar Mendes 28 May 2012 (has links)
A neurite auto-imune experimental (NAE) é uma polineuropatia desmielinizante monofásica do sistema nervoso periférico (SNP). A NAE é considerada modelo experimental da síndrome de Guillain-Barré (SGB). Por se tratar de uma doença autoimune, pode ser induzida experimentalmente em camundongos geneticamente susceptíveis, através da imunização com componentes da mielina de nervos periféricos. Para a indução da NAE podem ser utilizados P0 e P2, proteínas da mielina do nervo periférico, ou sequências conhecidas de peptídeos dessas proteínas 180-199 e 58-81 respectivamente, consideradas neuritogênicas, ou ainda transferência adotiva de lifócitos T CD4+, oriundas de camundongos previamente imunizados. Para o presente estudo foram utilizados camundongos fêmeas SJL/J nãográvidas, com idade entre 8 e 12 semanas, pesando de 17 a 20 g. Os animais foram divididos em dois grupos: um controle e outro com NAE. 200 µg da sequência de peptídeos 58-81 de P2 emulsificada em 100 µl de adjuvante de Freund completo (AFC) foram injetados por via subcutânea, em quatro locais na região lombar. Para os controles, foi utilizado solução tamponada de fosfato (PBS), emulsionada em AFC desprovida da sequência 58-81 de peptídeos P2, injetada no mesmo local, na mesma quantidade e forma. Cada camundongo tratado com P2 recebeu 200 ng de toxina pertussis em 100 ?L de PBS intraperitonealmente (i.p.) nos dias 0 e 2 pós-imunização (p.i.). No grupo controle, volumes iguais de PBS e toxina pertussis foram administrados pela mesma via sem o peptídeo. Avaliações da motricidade foram realizadas diariamente até o 60º dia, além de análises funcionais e eletroneuromiográficas. Foram encontradas alterações exclusivamente eletrofisiológicas, desmielinizantes e axonais, em cerca de dois terços dos camundongos. Sendo o camundongo SJL/J considerado o camundongo mais susceptível para a provocação de NAE, os achados do presente estudo indicam a limitação do modelo: ausência de alterações motoras detectáveis clinicamente, ocorrendo distúrbios eletrofisiológicos em apenas parte dos animais. O melhor modelo de NAE continua sendo o provocado no rato Lewis por proteína da mielina periférica bovina. É desejável que se continue buscando modelo experimental de NAE em camundongos, tendo em vista que essa espécie animal é a mais bem estudada na Biologia animal e, por essa razão, dela haver extensa variedade de imunobiológicos disponíveis para estudo da patogenia e fisiopatologia de doenças auto-imunes. / Experimental autoimmune neurits (EAN) is a monophasic demyelinating disease of the peripheral nervous system (PNS). EAN is considered to be the experimental model for Guillain-Barré syndrome (GBS). EAN can be induced in genetically susceptible mice using peripheral myelin components as immunogens: peripheral nerve myelin proteins P0 or P2; peptides sequences of those proteins considered neuritogenic, or the adoptive transfer of TCD4+ lymphocytes from previously immunized mice. In the present study non-pregnant female SJL/J mice aged 8-12 weeks weighint 17-20 g where used. The experimental group was treated as follows. Peptides sequence of P2 (200 µg) emulsified in complete Freund adjuvant (CFA) (100 µl) injected in four sites at the lumbar paravertebral region s.c. Controls were injected in the same sites with equal quantities of phosphate buffer solution emulsified in CFA without the peptides sequence. Each mouse treated with P2 was also treated with 200 ng pertussis toxin in 100 ?L PBS i.p. at the days 0 and 2 post-immunisation. Controls were injected i.p. with equal volumes of PBS and pertussis toxin free of the peptides sequence. Motor strength, posture and coordination were evaluated daily until the 60th day postinoculation besides eletroneuromyographic (EMG) evaluation on the 10th and 30thy days of some mice. No clinical disturbances were observed and in two thirds of the animals demyelinating and axonal features were detected at the EMG. SJL/J mice are considered the most susceptible mouse strain for NAE induction but the findings of the present study indicates the limitations of the model and its reproducibility. The best NAE model is yet the obtained in Lewis rat. It is important to look for a mouse model of EAN because this animal species is the most studied in the animal Biology. The extensive variety of immunobiologic products from mice allows performing studies on the pathogeny or physiopathology of autoimmune diseases more easily.
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