Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 543911 bytes, checksum: ca6b1ec9421af89b1154b235d7101304 (MD5) Previous issue date: 2008-10-03 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / This study was carried out to develop some protocols for cryopreservation of sugarcane germplasm in liquid nitrogen at -196°C. The exposure time of the shoot tips encapsulated in the laminar flow chamber for obtaining the moisture contents of 30, 20 and 10% was determined in an assay. The results were analyzed and interpreted, by using the free R software. The medium points of each time under evaluation were united by straight line segments, as drawing a tendency line for the moisture loss. Then, with the aid of horizontal lines referring to moisture contents of 30, 20 and 10%, the drying times were directly identified in the graph at 5.7; 7.45 and 10.1 hours, respectively. To induce the tolerance of the shoot tips to drying process, the preculture was accomplished in liquid culture medium enriched with 0.3; 0.5 and 0.75M sucrose for one and two days. The entirely randomized experimental design was used under a factorial scheme 3X2X4 (sucrose concentrations, preculture time and drying time) with three replicates. The survival index data were analyzed and interpreted, by using the free R software. The variance analysis was performed and the averages were compared by the Tukey test at 5% significance, when necessary. According to the results, the following conclusions were drawn: independently of the preculture time to be one or two days, the preculture in the culture medium enriched with 0.3M sucrose was ideal to induce the tolerance of the tissues to drying; the shoot tips were sensitive to the concentration of 0.75M sucrose in the preculture solution. The 12h culture of the shoot tips in the basic culture medium resulted into reactivation of their metabolism through accumulation of the starch grain, besides the recovery of the stress generated by its extraction. The intensity of the starch synthesis was increased, when the shoot tips were precultured in the liquid culture medium containing sucrose at concentrations 0.30; 0.50 and 0.75M. In the cryopreservation of the encapsulated shoot tips, the effect of the sucrose concentration, drying time and defrosting method were studied under a factorial 3X4X3 (three sucrose concentrations, four drying times and three defrosting methods). Independently of the combination adopted when the shoot tips were cryopreserved, a null survival index was obtained. The histological analyses revealed that both cells and cellular walls of the cryopreserved explants were severely damaged. / O objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de protocolos para criopreservação, em nitrogênio líquido a -196°C, de germoplasma de cana-de-açúcar. O tempo de exposição dos ápices caulinares encapsulados a câmara de fluxo laminar para a obtenção dos teores de umidade de 30, 20 e 10% foi determinado através de um ensaio e os resultados obtidos foram analisados e interpretados utilizando o software livre R. Os pontos médios de cada tempo avaliado foram unidos por segmentos de reta traçando uma linha de tendência de perda de umidade. Posteriormente, com o auxílio de linhas horizontais referentes aos teores de umidade de 30, 20 e 10%, os tempos de secagem foram identificados diretamente no gráfico em 5,7; 7,45 e 10,1 horas, respectivamente. Para induzir a tolerância dos ápices caulinares à secagem foi realizado o pré-cultivo em meio de cultura líquido enriquecido com 0,3; 0,5 e 0,75 M de sacarose por um e dois dias. O experimento foi organizado em um esquema fatorial 3X2X4 (concentrações de sacarose, tempo de pré-cultivo e tempo de secagem) segundo o delineamento inteiramente casualizado com três repetições. Os dados do índice de sobrevivência obtidos foram analisados e interpretados utilizando o software livre R. Foi realizada a análise de variância e quando necessário as médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de significância. Os resultados indicaram que o pré-cultivo em meio de cultura enriquecido com 0,3 M de sacarose, independentemente se por um ou dois dias, foi ideal para induzir a tolerância dos tecidos à secagem. Os ápices caulinares foram sensíveis à concentração de 0,75 M de sacarose na solução de pré- cultivo. O cultivo por 12 horas dos ápices caulinares em meio básico de cultura resultou além da recuperação do estresse gerado pela sua extração, a reativação do seu metabolismo através do acúmulo de grão de amido. A síntese de amido aumentou em intensidade quando os ápices foram pré- cultivados em meio de cultura líquido contendo sacarose nas concentrações de 0,30; 0,50 e 0,75 M. Na criopreservação dos ápices caulinares encapsulados, estudou-se o efeito de três fatores, concentração de sacarose, tempo de secagem e o método de descongelamento, em um fatorial 3X4X3. Independentemente da combinação adotada quando os ápices caulinares foram criopreservados o índice de sobrevivência obtido foi nulo. As análises histológicas revelaram que as células e a parede celular dos explantes criopreservados foram severamente danificadas.