A doença granulomatosa crônica é uma imunodeficiência primária dos fagócitos causada por mutações no sistema NADPH oxidase resultando em burst oxidativo ausente ou reduzido. Nosso objetivo foi realizar uma análise genética molecular do complexo NADPH oxidase em pacientes com diagnóstico clínico de DGC. Cinqüenta e quatro pacientes com diagnóstico clínico sugestivo da DGC foram incluídos em nosso estudo. As populações de neutrófilos e monócitos foram avaliadas pela capacidade de produzir peróxido de hidrogênio por meio do teste de DHR. Dezoito pacientes apresentaram defeito no burst oxidativo, enquanto trinta e oito apresentaram produção de peróxido normal. O DNA genômico dos dezoito pacientes com burst oxidativo diminuído foi extraído, os genes da cadeia beta polipeptídica do complexo citocromo b e o factor citoplasmático de neutrófilos, foram sequenciados. Sete pacientes apresentaram diferentes mutações, tanto no gene CYBB como no NCF1. Concluímos que a combinação do teste de DHR e o sequenciamento direto são métodos eficazes para o diagnóstico genético da DGC. / Chronic granulomatous disease is a primary immunodeficiency caused by mutations in the phagocyte NADPH oxidase system resulting in absent or reduced oxidative burst. Our goal was to perform a molecular genetic analysis of complex NADPH oxidase in patients with clinical diagnosis of CGD. Fifty-four patients with a clinical diagnosis of CGD were included in our study. The populations of neutrophils and monocytes were evaluated for the ability to produce hydrogen peroxide through the DHR test. Eighteen patients had a defect in the oxidative burst, while thirty-eight had normal peroxide production. Genomic DNA of the eighteen patients with decreased oxidative burst was extracted, the genes the chain complex cytochrome beta polypeptide and the neutrophil cytoplasmic factor, were sequenced. Seven patients had different mutations, both in the CYBB gene as in NCF1. We conclude that the combination of direct sequencing and DHR test methods are effective for the genetic diagnosis of CGD.

A doença granulomatosa crônica é uma imunodeficiência primária dos fagócitos causada por mutações no sistema NADPH oxidase resultando em burst oxidativo ausente ou reduzido. Nosso objetivo foi realizar uma análise genética molecular do complexo NADPH oxidase em pacientes com diagnóstico clínico de DGC. Cinqüenta e quatro pacientes com diagnóstico clínico sugestivo da DGC foram incluídos em nosso estudo. As populações de neutrófilos e monócitos foram avaliadas pela capacidade de produzir peróxido de hidrogênio por meio do teste de DHR. Dezoito pacientes apresentaram defeito no burst oxidativo, enquanto trinta e oito apresentaram produção de peróxido normal. O DNA genômico dos dezoito pacientes com burst oxidativo diminuído foi extraído, os genes da cadeia beta polipeptídica do complexo citocromo b e o factor citoplasmático de neutrófilos, foram sequenciados. Sete pacientes apresentaram diferentes mutações, tanto no gene CYBB como no NCF1. Concluímos que a combinação do teste de DHR e o sequenciamento direto são métodos eficazes para o diagnóstico genético da DGC. / Chronic granulomatous disease is a primary immunodeficiency caused by mutations in the phagocyte NADPH oxidase system resulting in absent or reduced oxidative burst. Our goal was to perform a molecular genetic analysis of complex NADPH oxidase in patients with clinical diagnosis of CGD. Fifty-four patients with a clinical diagnosis of CGD were included in our study. The populations of neutrophils and monocytes were evaluated for the ability to produce hydrogen peroxide through the DHR test. Eighteen patients had a defect in the oxidative burst, while thirty-eight had normal peroxide production. Genomic DNA of the eighteen patients with decreased oxidative burst was extracted, the genes the chain complex cytochrome beta polypeptide and the neutrophil cytoplasmic factor, were sequenced. Seven patients had different mutations, both in the CYBB gene as in NCF1. We conclude that the combination of direct sequencing and DHR test methods are effective for the genetic diagnosis of CGD.

Dentre pacientes com imunodeficiências primárias, existem aqueles com defeitos de fagócitos e outros componentes da imunidade inata. A doença granulomatosa crônica (DGC) é uma imunodeficiência primária (IDP) causada por mutações em um dos componentes protéicos, gp91-phox, p22-phox, p47-phox, p67-phox e p40-phox, da nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato (NADPH) dos fagócitos. Pacientes com DGC apresentam maior susceptibilidade a infecções, assim como hiperinflamação e reação adversa à vacinas como à do Bacilo Calmette-Guérin (BCG), como consequência da atividade microbicida defeituosa dos fagócitos. Por outro lado, a susceptibilidade mendeliana a micobactérias (MSMD) é uma condição que predispõe os pacientes a infecções pelo gênero Mycobacterium sp, levando a infecções graves e por vezes à morte. O objetivo deste trabalho foi realizar o diagnóstico clínico e a análise genético-molecular de pacientes brasileiros com DGC e MSMD. A explosão respiratória de granulócitos foi avaliada pelo ensaio de dihidrorodamina (DHR). A dosagem de citocinas do eixo IL-12/IFN-&#947 foi realizada mediante o ensaio de ELISA após estimulo com lisado de micobactérias (LM), proteína purifica (PPD) e BCG. O DNA genômico dos pacientes foi extraído, amplificado e sequenciado pelo método de Sanger e seqüenciamento completo de exoma. Durante o período de 2014-2018, 181 pacientes com histórico clínico sugestivo de DGC e 75 pacientes com diagnóstico sugestivo de MSMD foram encaminhados ao nosso laboratório. Após avaliação clínica e bioquímica dos pacientes, 23 deles foram diagnosticadas com DGC e 16 com MSMD. A análise genético-molecular permitiu identificar mutações em 14 pacientes com DGC, nove deles com DGC ligada ao cromossomo X (DGC-X) e 5 com DGC autossômica recessiva (DGC-AR). Identificamos mutações em 5 pacientes com MSMD, sendo três delas no receptor de IL-12 e duas no receptor da IL-17. / Among patients with primary immunodeficiencies, there are those with defects in phagocytes and other components of the innate immunity. Chronic granulomatous disease (CGD) is a primary immunodeficiency (PID) caused by mutations in one of the protein components, gp91-phox, p22-phox, p47-phox, p67-phox and p40-phox of the Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate (NADPH) oxidase of phagocytes. Patients with CDG are susceptible to infections, as well as hyperinflammation and adverse reactions to vaccines such as Bacilo Calmette-Guérin (BCG) as a consequence of defective phagocytes microbicidal activity. On the other hand, Mendelian susceptibility to mycobacterial diseases (MSMD) is a condition that predisposes patients to infections by the genus Mycobacterium sp , leading to serious infections and sometimes death. The main goal of this study was to perform the clinical diagnosis and genetic-molecular analysis of Brazilian patients with CDG and MSMD. The respiratory burst of granulocytes was evaluated by the dihydrorhodamine (DHR) assay. Cytokine dosing of IL-12 / IFN-&#947 axis was performed by the ELISA assay after stimulation with mycobacterium lysate (LM), purified protein (PPD) and BCG. Patients genomic DNA was extracted, amplified and sequenced by the Sanger method and whole exome sequencing. During the period of 2014 to 2018, 181 patients with a clinical history suggestive of CDG and 75 patients with a diagnosis suggestive of MSMD were referred to our laboratory. After clinical and biochemical evaluation, 23 of them were diagnosed with CDG and 16 with MSMD. Genetic-molecular analysis allowed the identification of mutations in 14 patients with CDG, of those 9 had X-linked DGC (X-CGD) and 5 had autosomal recessive CGD (AR-CGD). Mutations were identified in 5 MSMD patients, three in the IL-12 receptor and two in the IL-17 receptor.