Submitted by Luciana Sebin (lusebin@ufscar.br) on 2016-10-05T13:14:46Z No. of bitstreams: 1 DissNBD.pdf: 2471615 bytes, checksum: a8204662dfb8062a11f60b9f5723d468 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-13T20:17:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissNBD.pdf: 2471615 bytes, checksum: a8204662dfb8062a11f60b9f5723d468 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-13T20:18:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissNBD.pdf: 2471615 bytes, checksum: a8204662dfb8062a11f60b9f5723d468 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-13T20:18:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissNBD.pdf: 2471615 bytes, checksum: a8204662dfb8062a11f60b9f5723d468 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Paspalum is the most important genus of Poaceae family in the Americas, with about 330 species and occurs throughout Brazil, Bolivia, Paraguay, Argentina and Uruguay. In Brazil, except for the Pampa Biome, the use of species of this genus as a cultivated forage is still very small. Species of the informal group Plicatula are among the most promising Paspalum genotypes for forage quality. The majority of Paspalum accessions is tetraploid and apomitic. The sexual cytotypes are rare in the Plicatula group. To add features located in different accessions, it is necessary to cross sexual species in tetraploid level with apomictic genotypes that are interesting to breeding programs and select those that have better agronomic characteristics. For the occurence of hybridization, the flowering synchronization betwemn parents is essencial. An interesting tool for this is the cryopreservation of pollen. P. notatum, popularly known as bahiagrass, is a species from Notata group and is widely used in the United States as forage. Diploid and tetraploid accessions are observed in this species and, it is easy to obtain large amounts of pollen. The purpose of this study was to evaluate the cryopreservation of pollen of P. notatum, as a model for future conservation and synchronization of flowering of other species that are interesting for breeding program. The P. notatum pollen grains were collected in the field at Embrapa Southeast Livestock. Four dehydrating agents were tested (LiCl, MgCl2, NaOH and Silica gel) with three distinct periods of exposion (30, 60 and 120 minutes). After slow thawing, pollen grains were evaluated for viability by staining with tetrazolium solution 0.25% and in vivo germination by fluorescence. The viability of fresh pollen grains was also evaluated as a control. For comparison, pollen grains were stored in freezer and refrigerator conditions for a period of 10, 60, 120 and 180 days. The data showed that the dehydration of Paspalum notatum pollen with lithium chloride during 30 minutes and silica gel during 120 minutes was adequated for the conservation in liquid nitrogen and freezer as the viability of pollen after this treatment remained equal to the control. The pollen preservation in the refrigerator without dehydration since 10 days may be an alternative for short-term storage situations. Dehydration results with dehydrated magnesium chloride for 30 and 60 minutes and dehydrated sodium hydroxide for 60 and 120 9 minutes were also statistically similar to the control. The use of the tetrazolium sollution and in vivo germination were an effective technique to evaluate the viability of pollen grains after liquid nitrogen conservation. The use of tetrazolium was also efficient for the evaluation of pollen grains after storage in freezer and refrigerator. / Paspalum é o mais importante gênero da família Poaceae nas Américas, com cerca de 330 espécies e ocorre em todo Brasil, Bolívia, Paraguai, Argentina e Uruguai. No Brasil, a exceção do Bioma Pampa, o uso deste gênero como forrageira plantada ainda é muito pequeno. As espécies pertencentes ao grupo informal Plicatula são consideradas entre as mais promissoras pela qualidade forrageira. A grande maioria dos acessos de Paspalum é tetraplóide e apomítico. São raros os citotipos de espécies do grupo Plicatula sexuais. Para agregar características localizadas em acessos distintos, é necessário cruzar espécies sexuais já em nível tetraplóide com genótipos apomíticos promissores e selecionar os que tem melhores características agronômicas. Para isso, há a necessidade de sincronização de florescimento entre os genitores. Uma ferramenta interessante para isso é a criopreservação de pólen. A espécie P. notatum, conhecida popularmente como grama-batatais, do grupo informal Notata, é muito usada nos Estados Unidos para produção de forragem. Já foram observados acessos diplóides e tetraplóides dessa espécie, sendo fácil a obtenção de grande quantidade de pólen. A proposta desse trabalho foi estudar a criopreservação de pólen de P. notatum, como um modelo, para futuramente conservar e sincronizar o florescimento de outras espécies com características de interesse para o melhoramento. Os grãos de pólen de P. notatum foram coletados em campo na Embrapa Pecuária Sudeste. Foram testados quatro agentes de desidratação (LiCl, MgCl2, NaOH e sílica gel) e um tratamento sem desidratação, todos por três tempos distintos (30, 60 e 120 minutos). Após descongelamento lento, os grãos de pólen foram avaliados quanto à viabilidade por coloração com solução de tetrazólio 0,25% e por germinação in vivo via fluorescência. A viabilidade de grãos de pólen recém-colhidos também foi avaliada como controle. Para efeitos de comparação, foram armazenados grãos de pólen em condições de freezer e geladeira, por um período de 10, 60, 120 e 180 dias. Os dados demonstraram que a desidratação de pólen de Paspalum notatum com cloreto de lítio por 30 minutos e sílica gel por 120 minutos foi adequado no armazenamento em nitrogênio liquido e em freezer, pois a viabilidade permaneceu igual aos grãos de pólen recém-colhidos 7 (testemunha). A conservação de pólen em geladeira sem desidratação por até 10 dias pode ser uma alternativa em situações de armazenamento a curto prazo. A conservação de pólen em freezer por até 60 dias também pode ser uma alternativa, já que além dos tratamentos citados acima, resultados de desidratação com cloreto de magnésio desidratado por 30 e 60 minutos e hidróxido de sódio desidratado por 60 e 120 minutos também foram estatisticamente iguais a testemunha. O uso do corante de tetrazólio e da técnica de germinação in vivo foram eficientes para a avaliação da viabilidade de grãos de pólen após o armazenamento de nitrogênio líquido. O uso do corante de tetrazólio também foi eficiente para a avaliação dos grãos de pólen após o armazenamento em freezer e em geladeira.