A bacia do rio Tietê, é a maior região hidrográfica do Estado de São Paulo e possui biodiversidade pouco explorada. Actinomicetos são produtores de moléculas bioativas e são descritas em ambientes aquáticos. O objetivo deste estudo foi caracterizar e identificar actinomicetos isolados da água e sedimento da bacia do rio Tietê. Nove actinomicetos foram isoladas: 6 do gênero Streptomyces e 3 do gênero Micromonospora. Três dos isolados pertencem a novas espécies. Os demais isolados foram identificados como S. bingchenggensis, S. lavendulae, S. humi e S. gancidicus; M. sediminicula e M. tulbaghiae. Todos as linhagens foram capazes de hidrolisar ao menos um dos substratos lignocelulósicos testados. Todos os isolados do gênero Streptomyces apresentaram atividade antifúngica. Com exceção de 2 isolados, todos os isolados apresentaram atividade antibacteriana, inclusive contra bactérias multiresistentes a antibióticos. Os genomas dos isolados foram anotados por RAST e antiSMASH, e apresentaram clusters de PKS do tipo I, II e III, sideróforos, terpenos, NRPS, ectoínas, fenazinas, lantipeptídeos, butirolactonas e bacteriocinas. Todos os isolados deste estudo apresentaram grande potencial biotecnológico, comprovado in silico e in vitro. / The Tietê river basin is the largest hydrographic region of São Paulo and its biodiversity is underexplored. Actinomycetes are known to bioactive molecules, and are described in aquatic environments. The aim of this study was to characterize and identify actinomycetes isolated from water and sediment from the Tietê river basin. Nine strains of actinomycetes were isolated: 6 Streptomyces strains and 3 Micromonospora strains. Three isolates are new species of actinomycetes. The remaining isolates were identified as S. bingchenggensis, S. lavendulae, S. humi and S. gancidicus; M. sediminicula and M. tulbaghiae. All strains could hydrolyse at least one of the lignocellulosic substrates tested. All Streptomyces showed antifungal activity. Except for two strains, all isolates showed antibacterial activity, including against multiresistant bacteria. The genomes of all isolates were annotated by RAST and antiSMASH and showed clusters of: type I, II and III PKS, siderophores, terpenes, NRPS, ectoins, phenazines, lantipeptides, butyrolactones and bacteriocins. All isolates in this study showed a high biotechnological potential, proved by in silico and in vitro methods.