Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-18Bitstream added on 2014-06-13T20:17:12Z : No. of bitstreams: 1 tagliani_mm_me_arafo.pdf: 1416082 bytes, checksum: 174957378ca932650c1583b4139e4afe (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Na biofotônica, lasers e LEDs (light-emitting diodes) têm sido empregados na bioestimulação de células e tecidos. LED é um diodo semicondutor que, quando energizado, produz luz de espectro estreito, em forma de eletroluminescência. Experimentos in vitro utilizando LEDs com diferentes comprimentos de onda demonstraram a ocorrência de significativo estímulo no crescimento celular, efeito antiinflamatório e antimicrobiano, além do metabolismo celular aumentado. Na odontologia, a aplicação clínica de lasers e LEDs em terapias objetivando a redução da hipersensibilidade dentinária tem se mostrado efetiva, através de aparente síntese e deposição de dentina reacional. Entretanto, não há trabalhos na literatura que demonstrem o efeito do LED sobre a cultura de odontoblastos, tampouco dados científicos caracterizando a relação entre LED e redução da hipersensibilidade dentinária. Assim, o objetivo desta pesquisa foi investigar a ação do LED em 630 nm sobre o metabolismo de células de linhagem odontoblástica MDPC-23. Para isto, as células foram descongeladas, cultivadas e plaqueadas. Então, o LED foi aplicado diretamente sobre estas células, em diferentes tempos (20, 40, 80 e 240”) e condições de estresse (2 ou 10% de SFB), de acordo com cada grupo experimental, por três dias consecutivos, através de um dispositivo de irradiação denominado “LEDTable”. Posteriormente, foram avaliados a viabilidade celular, através do teste MTT, e a morfologia celular, por microscopia eletrônica de varredura. Os dados obtidos nos testes de MTT foram submetidos ao teste de Mann-Whitney para a comparação das concentrações de soro fetal bovino em cada dose de energia individualmente. Foi utilizado também o teste de Kruskal-Wallis para comparar as diferentes doses de energia em cada concentração de soro fetal bovino. Os dados foram analisados estatisticamente... / Lasers and LEDs (light-emitting diodes) have been used for biostimulation of cells and tissues. LED is a semiconductor diode which produces limited spectrum visible light. In vitro experiments using LEDs at different wavelengths have shown an enhancement of cell growth, anti-inflammatory and antibacterial effects and increased cell metabolism. In dentistry, the use of lasers and LEDs in therapies to reduce dental hypersensitivity has been proved to be clinically effective, through the synthesis and deposition of reactionary dentin. However, there are no studies that demonstrate the effect of LED therapy on odontoblast-like cells and there is no scientific data linking LED irradiation to dental hypersensitivity reduction. For this reason, the aim of this study was to investigate the effect of LED 630 nm irradiation on MDPC-23 (odontoblast-like) cells metabolism. Cells were seeded on 24-wells plates and cultured. Then the LED light was directly applied to these cells under different experimental conditions (time and % of BFS), according to each experimental group, for three following days. A device named LEDTable provided red LED irradiation. Then, cell viability (MTT Assay) and cell morphology (SEM) were evaluated. The cell viability results were first submitted to Mann-Whitney tests in order to compare the fetal bovine serum concentrations and energy dose, and then Kruskal-Wallis test was performed to compare different energy doses in every serum concentration. Data were statistically analyzed (p=0,05). Results show a biostimulation of cells kept under normal culture conditions and submitted to low LED irradiation dose (1 J/cm2). However, under nutritional stress, cells required higher energy dose to be stimulated, such as 4 J/cm2. On the other hand, a 8 J/cm2 dose did not affect the metabolism of this immortalized cell line. The SEM analysis showed a higher number of cells attached... (Complete abstract click electronic acess below)

Freqüentemente as condutas terapêuticas utilizadas no tratamento de patologias bucais são cirúrgicas, resultando em falhas de continuidade da mucosa bucal. A possibilidade de obtenção de epitélios transplantáveis, a partir do cultivo in vitro de células da mucosa bucal, abre novas perspectivas de utilização, não se restringindo somente ao seu local de origem, ou seja, a boca, mas também como material de reconstrução para outras regiões, tais como: uretra, córnea, superfície ocular e epitélio córneo-limbal. Os métodos utilizados para a obtenção dessas células ainda são controversos na literatura. Neste sentido, avaliamos e comparamos a eficiência de dois métodos, enzimático e explante, para a obtenção de queratinócitos de mucosa bucal humana. Os fragmentos utilizados para a obtenção dessas células foram obtidos durante procedimentos cirúrgicos de pacientes voluntários saudáveis. Os queratinócitos foram cultivados sobre uma camada de sustentação, feeder-layer, confeccionada com fibroblastos murinos irradiados (3T3 - Swiss albino). Neste estudo foram comparados: o tempo para a obtenção dos queratinócitos, o rendimento obtido entre os dois métodos, a duração da vida útil em cultura, a capacidade que estas células tiveram em formar um epitélio in vitro e a morfologia dos mesmos. Os resultados obtidos, na avaliação dos dois métodos, comprovaram a possibilidade de obtenção dos queratinócitos, a partir de um pequeno fragmento bucal, porém pode-se verificar que existem vantagens e restrições peculiares a cada um dos métodos estudados. / The therapeutic procedures frequently used in oral treatments for the pathological diseases are surgical, resulting in failures of the mucosal continuity.The possibility to obtain transplantable oral epithelia from an in vitro cell culture opens new utilization perspectives not only to where it comes from, but also as a reconstructive matherial for other parts of the human body, such as: urethra, epithelia corneo-limbal, cornea, ocular surface. Many researchers still use controversial methods for obtaining cells. It was therefore evaluated and compared the efficiency in both methods: enzimatic and direct explant to obtain oral keratinocytes from human oral mucosa. Fragments of intra oral epithelial tissues from healthy human subjects, undergoing dental surgeries, were donated to the research project. The keratinocytes were cultivated over a feeder-layer from a previously irradiated 3T3 Swiss albino fibroblasts. In this study it was compared the time needed in the cell obtaintion, the best cell amount between both methods, the life-span, the cell capacity to form an in vitro epithelia and its morphologic structure. The results in the accessment of both methods have shown the possibility to obtain keratinocytes from a small oral fragment, but at the same time we may verify the advantages and peculiar restrictions for each one of both analyzed methods.

Freqüentemente as condutas terapêuticas utilizadas no tratamento de patologias bucais são cirúrgicas, resultando em falhas de continuidade da mucosa bucal. A possibilidade de obtenção de epitélios transplantáveis, a partir do cultivo in vitro de células da mucosa bucal, abre novas perspectivas de utilização, não se restringindo somente ao seu local de origem, ou seja, a boca, mas também como material de reconstrução para outras regiões, tais como: uretra, córnea, superfície ocular e epitélio córneo-limbal. Os métodos utilizados para a obtenção dessas células ainda são controversos na literatura. Neste sentido, avaliamos e comparamos a eficiência de dois métodos, enzimático e explante, para a obtenção de queratinócitos de mucosa bucal humana. Os fragmentos utilizados para a obtenção dessas células foram obtidos durante procedimentos cirúrgicos de pacientes voluntários saudáveis. Os queratinócitos foram cultivados sobre uma camada de sustentação, feeder-layer, confeccionada com fibroblastos murinos irradiados (3T3 - Swiss albino). Neste estudo foram comparados: o tempo para a obtenção dos queratinócitos, o rendimento obtido entre os dois métodos, a duração da vida útil em cultura, a capacidade que estas células tiveram em formar um epitélio in vitro e a morfologia dos mesmos. Os resultados obtidos, na avaliação dos dois métodos, comprovaram a possibilidade de obtenção dos queratinócitos, a partir de um pequeno fragmento bucal, porém pode-se verificar que existem vantagens e restrições peculiares a cada um dos métodos estudados. / The therapeutic procedures frequently used in oral treatments for the pathological diseases are surgical, resulting in failures of the mucosal continuity.The possibility to obtain transplantable oral epithelia from an in vitro cell culture opens new utilization perspectives not only to where it comes from, but also as a reconstructive matherial for other parts of the human body, such as: urethra, epithelia corneo-limbal, cornea, ocular surface. Many researchers still use controversial methods for obtaining cells. It was therefore evaluated and compared the efficiency in both methods: enzimatic and direct explant to obtain oral keratinocytes from human oral mucosa. Fragments of intra oral epithelial tissues from healthy human subjects, undergoing dental surgeries, were donated to the research project. The keratinocytes were cultivated over a feeder-layer from a previously irradiated 3T3 Swiss albino fibroblasts. In this study it was compared the time needed in the cell obtaintion, the best cell amount between both methods, the life-span, the cell capacity to form an in vitro epithelia and its morphologic structure. The results in the accessment of both methods have shown the possibility to obtain keratinocytes from a small oral fragment, but at the same time we may verify the advantages and peculiar restrictions for each one of both analyzed methods.