Yes / Aspirin and eicosapentaenoic acid (EPA) reduce colorectal adenomatous polyp risk and affect synthesis of oxylipins including prostaglandin E2. We investigated whether 35 single nucleotide polymorphisms (SNPs) in oxylipin metabolism genes such as cyclooxygenase [PTGS] and lipoxygenase [ALOX], as well as 7 SNPs already associated with colorectal cancer (CRC) risk reduction by aspirin (eg. TP53; rs104522), modified the effects of aspirin and EPA on colorectal polyp recurrence in the randomised 2x2 factorial seAFOod trial. Treatment effects were reported as the incidence rate ratio (IRR) and 95% confidence interval (CI) by stratifying negative binomial and Poisson regression analyses of colorectal polyp risk on SNP genotype. Statistical significance was reported with adjustment for the false discovery rate as the P and q value. Five hundred and forty-two (of 707) trial participants had both genotype and colonoscopy outcome data. Reduction in colorectal polyp risk in aspirin users compared with non-aspirin users was restricted to rs4837960 (PTGS1) common homozygotes (IRR 0.69 [95%CI 0.53,0.90]; q=0.06), rs2745557 (PTGS2) compound heterozygote-rare homozygotes (IRR 0.60 [0.41,0.88]; q=0.06), rs7090328 (ALOX5) rare homozygotes (IRR 0.27 [0.11,0.64]; q=0.05), rs2073438 (ALOX12) common homozygotes (IRR 0.57 [0.41,0.80]; q=0.05), and rs104522 (TP53) rare homozygotes (IRR 0.37 [0.17,0.79]; q=0.06). No modification of colorectal polyp risk in EPA users was observed. In conclusion, genetic variants relevant to the proposed mechanism of action on oxylipins are associated with differential colorectal polyp risk reduction by aspirin in individuals who develop multiple colorectal polyps. SNP genotypes should be considered during development of personalised, predictive models of CRC chemoprevention by aspirin. / Funder(s): Efficacy and Mechanism Evaluation Programme (EME) Award Id(s): NIHR128210. Funder(s): NIHR Senior Investigator grant. Funder(s): Cancer Research UK (CRUK) Award Id(s): C23434/A24939. Funder(s): European Union-BBSRC (UK) Award Id(s): BB/P028233/1.

Introdução: Em crianças das regiões Sul e Sudeste do Brasil há uma incidência elevada de tumores adrenocorticais (TAC). Anormalidades da ?-catenina tem sido encontradas em TAC em adultos e sugerem a ativação da via Wnt/ -catenina nestes tumores. No entanto, não há estudos avaliando o papel desta via em casuísticas de TAC pediátricos. Objetivos: Avaliar o papel da via Wnt/catenina e mutações do gene CTNNB1 na tumorigênese adrenocortical pediátrica. Indivíduos, Material e Métodos: Foram avaliados 62 pacientes pediátricos com TAC oriundos de dois centros de referência. Controles: córtex adrenal de indivíduos jovens com morte acidental. Avaliou-se a presença de mutação nos genes TP53 e CTNNB1. A expressão de genes da via Wnt (CTNNB1, o ligante WNT4, os inibidores SFRP1, DKK3 e AXIN1, o fator de transcrição TCF7 e os genes-alvo MYC e WISP2) foi avaliada por qPCR, utilizando-se o método de 2-Ct. Adicionalmente, a expressão de proteínas da via Wnt/-catenina e P53 foi avaliada por imunoistoquímica. Avaliou-se a relação entre possíveis anormalidades moleculares com o fenótipo clínico e o desfecho. Resultados: A sobrevida geral foi maior em pacientes menores que 5 anos de idade (p<0.0001) e em pacientes com estágios tumorais menos avançados (p<0.0001). A mutação P53 p.R337H foi encontrada em 87% dos pacientes e não se associou com características clinicopatológicas ou desfecho. Mutações do gene CTNNB1 foram encontradas em 4/62 (6%) TAC, todos carreadores da mutação P53 p.R337H. Houve associação entre óbito e presença de mutações do gene CTNNB1 (p=0,02). Acúmulo difuso da -catenina foi observado em 71% dos TAC, a maioria sem mutações do CTNNB1. Comparados a adrenais normais, os TAC apresentaram aumento da expressão do RNAm de CTNNB1 (p=0.008) e diminuição da expressão de genes inibidores da via Wnt: DKK3 (p<0.0001), SFRP1 (p=0.05) e AXIN1 (p=0.04). Com relação aos genes-alvo da via Wnt/-catenina, TAC apresentaram expressão aumentada de WISP2 e baixa expressão de MYC. Maior sobrevida geral foi associada à expressão baixa de SFRP1 (p=0.01), WNT4 (p=0.004) e TCF7 (p<0.01). Conclusões: Em TAC pediátricos, mutações somáticas ativadoras do gene CTNNB1 são pouco freqüentes e parecem estar associadas à maior ocorrência de óbito. Mesmo na ausência de mutações do gene CTNNB1, estes tumores apresentaram acúmulo de -catenina e do gene-alvo WISP2 e expressão reduzida de inibidores da via Wnt (DKK3, SFRP1 e AXIN1). Estes dados demonstram evidências de anormalidades na via Wnt/-catenina em TAC pediátricos, mesmo na ausência de mutações do gene CTNNB1. É provável que outros eventos genéticos afetando a via Wnt/-catenina estejam envolvidos na tumorigênese adrenocortical pediátrica / Context: CTNNB1 mutations and activation of Wnt/-catenin pathway are frequent in adult adrenocortical tumors (ACTs) but data on childhood ACTs are lacking. Objective: To investigate Wnt/-catenin pathway abnormalities and CTNNB1 mutations in childhood ACTs. Patients and Methods: Clinicopathological findings and outcome of 62 childhood ACTs patients were analyzed regarding to CTNNB1/ -catenin mutations and to the expression of Wnt-related genes (CTNNB1, a Wnt ligand: WNT4, Wnt inhibitors: SFRP1, DKK3 and AXIN1, a transcription factor: TCF7, and target genes: MYC and WISP2) by qPCR and immunohistochemistry. Results: Overall survival (OS) was higher in patients younger than 5 years (p<0.0001) and associated with less advanced tumoral stage (p<0.0001). The p.R337H P53 mutation, found in 87% of the patients, was not associated with clinicopathological findings or outcome. CTNNB1 activating mutations were found in only 4/62 ACTs (6%), all of them harboring TP53 mutation. There was association between the presence of CTNNB1 mutation and death (p=0.02). Diffuse -catenin accumulation was found in 71% of ACTs, most of them without CTNNB1 mutation. CTNNB1 mutated ACTs presented weak/moderate -catenin accumulation. Compared to normal adrenals, ACTs presented increased expression of CTNNB1 (p=0.008) and underexpression of Wnt inhibitor genes: DKK3 (p<0.0001), SFRP1 (p=0.05) and AXIN1 (p=0.04). With regards to Wnt/-catenin target genes, ACTs presented lower expression of MYC but increased expression of WISP2. Higher overall survival was associated with underexpression of SFRP1 (p=0.01), WNT4 (p=0.004) and TCF7 (p<0.01). Conclusions: In childhood ACTs, CTNNB1 mutations are rare and appear to be associated with poor prognosis. Regardless of CTNNB1 mutations, these tumors presented reduced expression of Wnt inhibitor genes (DKK3, SFRP1 and AXIN1) and increased expression of CTNNB1 and a target gene, WISP2. Thus, besides CTNNB1 mutations, additional genetic events affecting the Wnt/-catenin pathway may be involved in childhood adrenocortical tumorigenesis.

Introdução: Em crianças das regiões Sul e Sudeste do Brasil há uma incidência elevada de tumores adrenocorticais (TAC). Anormalidades da ?-catenina tem sido encontradas em TAC em adultos e sugerem a ativação da via Wnt/ -catenina nestes tumores. No entanto, não há estudos avaliando o papel desta via em casuísticas de TAC pediátricos. Objetivos: Avaliar o papel da via Wnt/catenina e mutações do gene CTNNB1 na tumorigênese adrenocortical pediátrica. Indivíduos, Material e Métodos: Foram avaliados 62 pacientes pediátricos com TAC oriundos de dois centros de referência. Controles: córtex adrenal de indivíduos jovens com morte acidental. Avaliou-se a presença de mutação nos genes TP53 e CTNNB1. A expressão de genes da via Wnt (CTNNB1, o ligante WNT4, os inibidores SFRP1, DKK3 e AXIN1, o fator de transcrição TCF7 e os genes-alvo MYC e WISP2) foi avaliada por qPCR, utilizando-se o método de 2-Ct. Adicionalmente, a expressão de proteínas da via Wnt/-catenina e P53 foi avaliada por imunoistoquímica. Avaliou-se a relação entre possíveis anormalidades moleculares com o fenótipo clínico e o desfecho. Resultados: A sobrevida geral foi maior em pacientes menores que 5 anos de idade (p<0.0001) e em pacientes com estágios tumorais menos avançados (p<0.0001). A mutação P53 p.R337H foi encontrada em 87% dos pacientes e não se associou com características clinicopatológicas ou desfecho. Mutações do gene CTNNB1 foram encontradas em 4/62 (6%) TAC, todos carreadores da mutação P53 p.R337H. Houve associação entre óbito e presença de mutações do gene CTNNB1 (p=0,02). Acúmulo difuso da -catenina foi observado em 71% dos TAC, a maioria sem mutações do CTNNB1. Comparados a adrenais normais, os TAC apresentaram aumento da expressão do RNAm de CTNNB1 (p=0.008) e diminuição da expressão de genes inibidores da via Wnt: DKK3 (p<0.0001), SFRP1 (p=0.05) e AXIN1 (p=0.04). Com relação aos genes-alvo da via Wnt/-catenina, TAC apresentaram expressão aumentada de WISP2 e baixa expressão de MYC. Maior sobrevida geral foi associada à expressão baixa de SFRP1 (p=0.01), WNT4 (p=0.004) e TCF7 (p<0.01). Conclusões: Em TAC pediátricos, mutações somáticas ativadoras do gene CTNNB1 são pouco freqüentes e parecem estar associadas à maior ocorrência de óbito. Mesmo na ausência de mutações do gene CTNNB1, estes tumores apresentaram acúmulo de -catenina e do gene-alvo WISP2 e expressão reduzida de inibidores da via Wnt (DKK3, SFRP1 e AXIN1). Estes dados demonstram evidências de anormalidades na via Wnt/-catenina em TAC pediátricos, mesmo na ausência de mutações do gene CTNNB1. É provável que outros eventos genéticos afetando a via Wnt/-catenina estejam envolvidos na tumorigênese adrenocortical pediátrica / Context: CTNNB1 mutations and activation of Wnt/-catenin pathway are frequent in adult adrenocortical tumors (ACTs) but data on childhood ACTs are lacking. Objective: To investigate Wnt/-catenin pathway abnormalities and CTNNB1 mutations in childhood ACTs. Patients and Methods: Clinicopathological findings and outcome of 62 childhood ACTs patients were analyzed regarding to CTNNB1/ -catenin mutations and to the expression of Wnt-related genes (CTNNB1, a Wnt ligand: WNT4, Wnt inhibitors: SFRP1, DKK3 and AXIN1, a transcription factor: TCF7, and target genes: MYC and WISP2) by qPCR and immunohistochemistry. Results: Overall survival (OS) was higher in patients younger than 5 years (p<0.0001) and associated with less advanced tumoral stage (p<0.0001). The p.R337H P53 mutation, found in 87% of the patients, was not associated with clinicopathological findings or outcome. CTNNB1 activating mutations were found in only 4/62 ACTs (6%), all of them harboring TP53 mutation. There was association between the presence of CTNNB1 mutation and death (p=0.02). Diffuse -catenin accumulation was found in 71% of ACTs, most of them without CTNNB1 mutation. CTNNB1 mutated ACTs presented weak/moderate -catenin accumulation. Compared to normal adrenals, ACTs presented increased expression of CTNNB1 (p=0.008) and underexpression of Wnt inhibitor genes: DKK3 (p<0.0001), SFRP1 (p=0.05) and AXIN1 (p=0.04). With regards to Wnt/-catenin target genes, ACTs presented lower expression of MYC but increased expression of WISP2. Higher overall survival was associated with underexpression of SFRP1 (p=0.01), WNT4 (p=0.004) and TCF7 (p<0.01). Conclusions: In childhood ACTs, CTNNB1 mutations are rare and appear to be associated with poor prognosis. Regardless of CTNNB1 mutations, these tumors presented reduced expression of Wnt inhibitor genes (DKK3, SFRP1 and AXIN1) and increased expression of CTNNB1 and a target gene, WISP2. Thus, besides CTNNB1 mutations, additional genetic events affecting the Wnt/-catenin pathway may be involved in childhood adrenocortical tumorigenesis.