Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-08-17T20:14:00Z No. of bitstreams: 1 2016_YannaReisPraça.pdf: 8951084 bytes, checksum: 723a2e6a0e521ef29a7ba1303584bf80 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-09-20T18:44:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_YannaReisPraça.pdf: 8951084 bytes, checksum: 723a2e6a0e521ef29a7ba1303584bf80 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-20T18:44:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_YannaReisPraça.pdf: 8951084 bytes, checksum: 723a2e6a0e521ef29a7ba1303584bf80 (MD5) / Os triatomíneos são artrópodes hematófagos durante todo o seu ciclo de vida e para garantir o sucesso de seu repasto, desenvolveram estratégias adaptativas que contrapõem o sistema hemostático e imune do hospedeiro, injetando moléculas farmacologicamente ativas durante esse processo. Por possuirem diversas moléculas com interesse farmacológico, a saliva desses artrópodes hematófagos passou a ser alvo de pesquisas. Para ampliar o conhecimento sobre essas moléculas, esse trabalho teve como objetivos: 1) investigar a expressão protéica na saliva de Triatoma dimidiata em diferentes tempos após a alimentação sanguínea, por meio da análise proteômica comparativa por LC-MS/MS, eletroforese bidimensional e análises in silico, e 2) caracterizar in silico a sequência aminoacídica do antígeno 5 salivar de Rhodnius neglectus (RNAV), além da expressão dessa molécula em Escherichia coli. A análise proteômica comparativa da saliva de T. dimidiata levou à identificação de 362 proteínas, das quais 65 eram específicas da amostra de cinco dias após a alimentação sanguínea (dpa) e 79 específicas da amostra de 10 dpa, além de contribuir para validar dados do transcritoma dessa espécie disponível na literatura. A análise in silico do RNAV sugere que a molécula é secretada pela via clássica, que modificações pós-traducionais como fosforilação e glicosilação devem ocorrer na proteína, e que existem aproximadamente 25 resíduos de aminoácidos que podem estar presentes em epítopos lineares para células B. Não foi possível obter o RNAV recombinante. O conhecimento das proteínas salivares do T. dimidiata e sua comparação com as de outras espécies de artrópodes hematófagos pode ser útil para entender processos biológicos fundamentais como sobrevivência, adaptação e as interações desses vetores com seus hospedeiros e com os agentes infecciosos que eles são capazes de transmitir. _________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Triatomine are bloodsucking arthropods throughout their life cycle and to ensure the success of their meal, they have developed adaptive strategies that counteract the hemostatic and immune system of the host, injecting pharmacologically active molecules during this process. By owning several molecules with pharmacological interest, bloodsucking arthropods saliva has become the subject of various research. To enhance our knowledge about these molecules, this study aimed 1) to investigate the protein expression in Triatoma dimidiata saliva at different times after the blood feeding through comparative proteomic analysis using LC-MS/MS, 2-DE electrophoresis and bioinformatics, and 2) to characterize in silico the salivary antigen 5 of Rhodnius neglectus (RNAV), beyond its expressin in Escherichia coli. The comparative proteomic analysis of T. dimidiata saliva revealed 362 proteins, 65 specific of the sample collected 5 days after feeding and 79 specific of the sample collected 10 days after feeding, and aided to validate available data from T. dimidiata transcriptome. RNAV in silico analysis revealed this protein may be secreted by the classical pathway, phosphorilation and glycosilation sites, and the existence of 25 amino acid residues that may be present in linear epitopes to B cells. Our attempt failed to produce recombinant RNAV. Knowing T. dimidiata salivary proteins and comparison with those from other species of hematophagous arthropods may help to understand fundamental biological processes such as survival, adaptation, vector-host and vector-pathogens interactions.