Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2016-12-14T16:06:41Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Grazzielle Guimarães de Matos - 2016.pdf: 6175984 bytes, checksum: 49ee98e2341033b338755369c46b165a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-12-15T17:30:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Grazzielle Guimarães de Matos - 2016.pdf: 6175984 bytes, checksum: 49ee98e2341033b338755369c46b165a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-15T17:30:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Grazzielle Guimarães de Matos - 2016.pdf: 6175984 bytes, checksum: 49ee98e2341033b338755369c46b165a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In Brazil, L. (V.) braziliensis is specie responsible for many cases of American Tegumentary Leishmaniasis (ETL). To effective vaccine development, formulations contained immunogenic antigens associated with adjuvants that induce a T helpe 1 (Th1) immune response are been investigated, among of antigen have the “Thiol Specific Antioxidant” (rTSA), “Stress Inducible protein 1” (rSTI) and “Leishmania elongation initiation fator” (rLeIF) of L. major, which have been immunogenic and promising. The genes that corresponding to these antigens in L. (V.) braziliensis were sequenced and recombinants proteins were obtained and used in this study. Works that used BCG and β-glucan showed that these could provide protection against not related pathogens. The present study had as aim to evaluate the immunogenicity and the effectiveness of the vaccine using the rTSA, rSTI and rLeIF proteins (Triple), associated or not with β-glucan, with or without BCG stimulus. BALB/c mice were divided in 2 groups, one of the groups was stimulated with BCG and the other not. Posteriorly, the animals were divided in subgroups and vaccinated with triple, associated or not with β-glucan. Mice’s serum were collected to search of cytokines and antibodies by immunoenzymatic technique. Lymph node and spleen’s cells were cultivated and cytokines searched in supernatants. BCG stimulation induced a greater IFN-γ production. The vaccinated mice with triple produced IgG total, IgG1 and IgG2a specifics to L. (V.) braziliensis. BCG stimulation induced a high IgG total and IgG2a production in animals that received the triple without β-glucan. To evaluate the protection provided by vaccine, the immunized animals were infected with L. (V.) braziliensis and paw them measured along of 8 weeks. The subgroup don’t stimulated with BCG and vaccinated with triple, associated with β-glucan, has developed bigger lesions that the others subgroups. The subgroups that received only BCG stimulation or BCG stimulation and vaccine with triple plus β-glucan presented bigger lesions that animal don’t stimulated or vaccinated. After infection by L. (V.) braziliensis, (i) the animals stimulated with BCG and vaccinated with triple presents more IgG specific to L. (V.) braziliensis; (ii) the immunizations with triple maintained IFN-γ levels elevated; (iii) all animals presented lower IL-17 levels in serum; (iv) the subgroups produced similar IFN-γ levels, but with a high IL-17 production in subgroup vaccinated with triple plus β-glucan, don’t BCG stimulated, in spleen; (v) the animals that received only BCG produced more IFN-γ and IL-17 in lymph node. In conclusion: the immunizations with triple were immunogenic; the immunization scheme containing triple plus β- glucan, without BCG stimulation, provided partial protection against L. (V.) braziliensis infection; BCG stimulations induced biggest lesions in subgroup that received only saline or triple plus β-glucan; the vaccination scheme containing triple maintained high IFN-γ production after L. (V.) braziliensis infection; in infection site, the BCG stimulation induced a Th1/Th17 heterologous response. / No Brasil, L. (V.) braziliensis é a espécie responsável pela maioria dos casos de Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA). Para o desenvolvimento de uma vacina eficaz, formulações contendo antígenos imunogênicos, associados com adjuvantes, indutores de uma resposta imune do perfil T auxiliar 1 (Th1), estão sendo investigados, entre eles têm-se o “Thiol Specific Antioxidant” (rTSA), a “Stress Inducible protein 1” (rSTI) e o “Leishmania elongation initiation fator” (rLeIF) de L. major, que se mostraram imunogênicos e promissores. Os genes destas proteínas, de L. (V.) braziliensis, foram sequenciados e as proteínas recombinantes obtidas e utilizadas neste estudo. Trabalhos utilizando BCG e β-glucana mostraram a capacidade destes em fornecer proteção inespecífica. O presente estudo teve como objetivo avaliar a imunogenicidade e a eficácia da vacina com as proteínas rTSA, rSTI e Leif (Tríplice) de L. (V.) braziliensis associadas com o adjuvante β-glucana, com ou sem estímulo prévio com BCG. Camundongos BALB/c foram divididos em 2 grupos, um deles inoculado com BCG e o outro não. Posteriormente, os animais foram divididos em subgrupos e vacinados com tríplice, associadas ou não com β-glucana. Foram coletados os soros dos animais para dosagem de citocinas e anticorpos pela técnica imunoenzimática. Células do baço e linfonodo drenante foram cultivadas para dosagem de citocinas no sobrenadante. O estimulo com BCG induziu uma maior produção de IFN-γ. Os camundongos vacinados com a tríplice produziram anticorpos IgG total, IgG1 e IgG2a específicos para L. (V.) braziliensis. O estimulo com BCG induziu uma maior produção de anticorpos IgG total e IgG2a, nos animais vacinados com a tríplice sem β-glucana. Para avaliar a proteção fornecida pela vacina, os animais imunizados foram infectados com L. (V.) braziliensis e as patas mensuradas durante 8 semanas. O subgrupo, não estimulado com BCG e vacinado com a tríplice, associada com β-glucana, desenvolveu lesões menores que os demais subgrupos (p<0,05). Os subgrupos que receberam apenas BCG ou foram vacinados com a tríplice mais β-glucana apresentaram lesões maiores que os animais não estimulados e imunizados (p<0,05). Após a infecção por L. (V.) braziliensis, (i) os animais estimulados e vacinados com a tríplice apresentaram níveis elevados de IgG específicos para L. (V.) braziliensis; (ii) as imunizações com a tríplice mantiveram os níveis de IFN-γ aumentados (p<0,05); (iii) todos os animais apresentaram menores concentrações de IL-17, no soro; (iv) houve detecção similar de IFN-γ entre os subgrupos, mas com uma maior produção de IL-17 no subgrupo vacinado com a tríplice mais β-glucana, não estimulados com BCG, no baço (p<0,05); (v) os animais que receberam apenas BCG produziram mais IFN-γ e IL-17, no linfonodo drenante. Conclui-se que: as imunizações com tríplice foram imunogênicas; o esquema de imunização com a tríplice mais β-glucana, sem estimulo com BCG, forneceu proteção parcial contra a infecção por L. (V.) braziliensis; o estimulo com BCG induziu lesões maiores nos subgrupos que receberam salina ou a tríplice mais β- glucana; o esquema de vacinação com a tríplice manteve a produção de IFN-γ elevada após a infecção por L. (V.) braziliensis; no sitio de infecção, o estimulo com a BCG levou a uma resposta heteróloga Th1/Th17.