Auglių nekrozės faktorius (TNF - tumor necrosis factor) yra citokinas, kuris dalyvauja sukeliant uždegimą. Išskiriamas daugiausia makrofagų, bet taip pat ir limfocitų, endotelio ląstelių, adipozinio audinio ląstelių, širdies miocitų, nervinio audinio ląstelių. Padidėjusi TNF koncentracija sukelia pagrindinius uždegimo požymius: karščiavimą, tinimą, paraudimą ir skausmą. TNF skatinamas uždegiminis atsakas gali sukelti daug sveikatos problemų, susijusių su autoimuniniais sutrikimais – reumatoidinį artritą, ankilozinį spondilitą, Crohn‘o ligą, psoriazę, bronchinę astmą. Tyrimai parodė, jog, užblokavus TNF, pacientų būklė pagerėja. Šias ligas galima gydyti panaudojant TNF inhibitorius, kurių vaidmenį puikiai galėtų atlikti TNF surišantys antikūnai. Monokloniniai antikūnai tampa vis populiaresniais įrankiais analitiniuose ir diagnostiniuose metoduose, taip pat ir vis reikšmingesne terapine priemone. Tačiau antikūnų praktinį pritaikymą apsunkina jų imunogeniškumas, sudėtingas ir brangus jų gavimas, nepageidaujamas biologinis aktyvumas, ribotas afiniškumas bei sugebėjimas įsiskverbti į audinius (Zola et al., 1995). Siekiant šias problemas išspręsti yra kuriami rekombinantiniai antikūnai. Norint išvengti imunogeniškumo naudojami chimeriniai (IgG žmogaus, o Fab fragmentas – iš pelių), humanizuoti (iš pelės yra jau tik CDR rajonas) ak. Antikūnų fragmentai Fab, Fv gali taip pat jungtis prie antigeno kaip jų „tėvinės“ molekulės, net jei afiniškumas ir sumažėja. Tačiau, skirtingai nuo... [toliau žr. visą tekstą] / Tumor necrosis factor (TNF) is a cytokine involved in systemic inflammation. Tumor necrosis factor promotes the inflammatory response, which, in turn, causes many of the clinical problems associated with autoimmune disorders such as rheumatoid arthritis, ankylosing spondylitis, Crohn's disease, psoriasis and refractory asthma. These disorders could be treated using a TNF inhibitors. Antibodies against TNF proved to be the most perspective instrument for therapy of increased level of TNF.. Recombinant single chain antibodies (scFv) might be excellent alternative to expensive and complicated monoclonal antibodies. The scFv are recombinant antibody fragments consisting of only two domains: the variable light chain (VL) and variable heavy chain (VH) domains, covalently connected to one another by polypeptide linker. The benefits of scFv over traditional monoclonal antibodies shoul be the small penetrable size and rapid, inexpensive production. In addition, the lack of Fc domains makes them less immunogenic and less capable for binding to Fc receptors distributed on the normal cells. In this work we tried to construct and express scFv antibodies against TNF. Firstly, for this purpose we purified total RNA from hybridoma cells, producing monoclonal anti-TNF antibodies. Then we synthesised cDNA and isolated PCR fragments of variable heavy and light chain domains of monoclonal antibodies against TNF. In order to get single chain antibodies, we coupled domains by a flexible peptide... [to full text]