Submitted by NATÁLIA AUGUSTO BENEDETTI null (benedetti@fmb.unesp.br) on 2016-04-06T23:09:36Z No. of bitstreams: 1 dissertação final abril 2016.docx: 4301870 bytes, checksum: 5ef2edd34f4c9f2caef591ab8900f625 (MD5) / Rejected by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: A versão final da dissertação/tese deve ser submetida no formato PDF (Portable Document Format). O arquivo PDF não deve estar protegido e a dissertação/tese deve estar em um único arquivo, inclusive os apêndices e anexos, se houver. Por favor, corrija o formato do arquivo e realize uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2016-04-07T18:21:01Z (GMT) / Submitted by NATÁLIA AUGUSTO BENEDETTI null (benedetti@fmb.unesp.br) on 2016-04-12T15:26:01Z No. of bitstreams: 1 dissertação final abril 2016.pdf: 1048311 bytes, checksum: 20ef19de54a6fc1bc779302643956cce (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-04-13T13:10:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 benedeti_na_me_bot.pdf: 1048311 bytes, checksum: 20ef19de54a6fc1bc779302643956cce (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-13T13:10:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 benedeti_na_me_bot.pdf: 1048311 bytes, checksum: 20ef19de54a6fc1bc779302643956cce (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / O Sistema de Vigilância Sanitária da Itália detectou 445 casos de hepatite B e 69 de hepatite C, relacionados aos tratamentos de beleza. Fato esse alarmante, pois, os cuidados com a aparência, têm levado a população a buscar os padrões de beleza estabelecidos pela mídia. Destacando-se que os salões de beleza no Brasil estão cada vez mais comuns com a atuação dos profissionais de manicure e pedicure. Entretanto, os produtos cosméticos necessitam de uma avaliação da qualidade sanitária, ou seja, testes que indicam a quantidade de micro-organismos viáveis em cada amostra. Pois, evidências mostram a sobrevivência dos Trichophytonrubrum, Trichopyton mentagrophytes, Candida albicans, Candida parapsilosis no esmalte de unha. Todavia, a composição e a fabricação do esmalte são pouco conhecidas, devido várias etapas estarem envolvidas na produção dos esmaltes de unhas comuns. Objetivo: Avaliar a ação dos solventes presentes no esmalte de unha, o acetato de etila e o acetato de butila, sobre o herpes vírus bovino tipo 5. Método: Realizou ensaios da atividade antiviral nas diferentes fases do ciclo replicativo com os solventes, acetato de etila e o acetato de butila. Resultados: No pré-tratamento, não houve replicação viral no acetato de etila a partir da diluição 10-6 e no acetato de butila 10-5 . No póstratamento não houve replicação viral no acetato de etila a partir da diluição 10-7 e no acetato de butila 10-5 e na inativação viral, tanto o acetato de etila como o butila, após 48 e 72 horas, todas as diluições apresentaram replicação viral, 10-1 a 10-10 . Discussão: Apesar de não identificar na literatura relatos específicos sobre solventes acetato de etila e acetato de butila na atividade antiviral, o presente estudo evidenciou que apesar de pouca diferença entre as diluições sequenciais desses solventes, houve replicação viral em diluições mais concentradas de vírus e de solventes. A limitação do estudo, com o uso do esmalte de unha, se deu pelo fato deste produto não ser diluído em meio de cultura para células em sua totalidade, além de conter substâncias muito voláteis que secam o produto rapidamente. Conclusão: Concluiu-se que houve replicação viral nas diferentes diluições, em maior concentração de solvente e maior número de vírus. Para diminuir o risco de contaminação cruzada da população pela disseminação de micro-organismos, mostra a necessidade dos órgãos fiscalizadores atuarem mais nesses estabelecimentos, educando e verificando a rotina do trabalho desses profissionais. / The Health Surveillance System in Italy detected 445 cases of hepatitis B and 69 hepatitis C related to beauty treatments. These alarming facts, for care of the appearance have led people to look for the beauty standards set by the media. If highlighting the beauty salons in Brazil is becoming more common with the activities of manicure and pedicure professionals. However, cosmetic products require a quality assessment of the health, is tests which indicate the amount of viable microorganisms in each sample. For evidence shows the survival of Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes, Candida albicans, Candida parapsilosis in nail polish. However, the enamel composition and manufacturing are little known due several steps are involved in the production of common nail enamels. Objective: To evaluate the action of solvents present in nail enamel, ethyl acetate and butyl acetate, about herpesvirus bovine type 5. Method: The antiviral activity test performed at different stages of the replicative cycle of the solvents, ethyl acetate and butyl acetate. Results: In the pre-treatment, there was no viral replication in the ethyl acetate dilution from 10-6 to 10-5 in butyl acetate. In the post-treatment there was no viral replication in ethyl acetate from the dilution 10-7 and 10-5 butyl acetate and viral inactivation, both the ethyl acetate and the butyl after 48 and 72 hours, all dilutions they showed viral replication, 10-1 to 10-10 . Discussion: Although not identify the specific reports literature solvents ethyl acetate and butyl acetate in antiviral activity, this study showed that despite little difference between serial dilutions of these solvents, there viral replication in more concentrated dilutions of virus and solvents. A limitation of the study, using the nail polish, was due to the fact that this product is not be diluted in culture medium to cells in its entirety, and contain highly volatile substances that dry the product quickly. Conclusion: We conclude that there was viral replication in the different dilutions, higher solvent concentration and a higher number of viruses. To reduce the risk of cross-contamination of the population by the spread of micro-organisms, it shows the need for regulatory agencies act more in these establishments, educating and checking the routine work of these professionals.

Orientador: Ione Corrêa / Resumo: O Sistema de Vigilância Sanitária da Itália detectou 445 casos de hepatite B e 69 de hepatite C, relacionados aos tratamentos de beleza. Fato esse alarmante, pois, os cuidados com a aparência, têm levado a população a buscar os padrões de beleza estabelecidos pela mídia. Destacando-se que os salões de beleza no Brasil estão cada vez mais comuns com a atuação dos profissionais de manicure e pedicure. Entretanto, os produtos cosméticos necessitam de uma avaliação da qualidade sanitária, ou seja, testes que indicam a quantidade de micro-organismos viáveis em cada amostra. Pois, evidências mostram a sobrevivência dos Trichophytonrubrum, Trichopyton mentagrophytes, Candida albicans, Candida parapsilosis no esmalte de unha. Todavia, a composição e a fabricação do esmalte são pouco conhecidas, devido várias etapas estarem envolvidas na produção dos esmaltes de unhas comuns. Objetivo: Avaliar a ação dos solventes presentes no esmalte de unha, o acetato de etila e o acetato de butila, sobre o herpes vírus bovino tipo 5. Método: Realizou ensaios da atividade antiviral nas diferentes fases do ciclo replicativo com os solventes, acetato de etila e o acetato de butila. Resultados: No pré-tratamento, não houve replicação viral no acetato de etila a partir da diluição 10-6 e no acetato de butila 10-5 . No póstratamento não houve replicação viral no acetato de etila a partir da diluição 10-7 e no acetato de butila 10-5 e na inativação viral, tanto o acetato de etila como o butila, após 48 e ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Health Surveillance System in Italy detected 445 cases of hepatitis B and 69 hepatitis C related to beauty treatments. These alarming facts, for care of the appearance have led people to look for the beauty standards set by the media. If highlighting the beauty salons in Brazil is becoming more common with the activities of manicure and pedicure professionals. However, cosmetic products require a quality assessment of the health, is tests which indicate the amount of viable microorganisms in each sample. For evidence shows the survival of Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes, Candida albicans, Candida parapsilosis in nail polish. However, the enamel composition and manufacturing are little known due several steps are involved in the production of common nail enamels. Objective: To evaluate the action of solvents present in nail enamel, ethyl acetate and butyl acetate, about herpesvirus bovine type 5. Method: The antiviral activity test performed at different stages of the replicative cycle of the solvents, ethyl acetate and butyl acetate. Results: In the pre-treatment, there was no viral replication in the ethyl acetate dilution from 10-6 to 10-5 in butyl acetate. In the post-treatment there was no viral replication in ethyl acetate from the dilution 10-7 and 10-5 butyl acetate and viral inactivation, both the ethyl acetate and the butyl after 48 and 72 hours, all dilutions they showed viral replication, 10-1 to 10-10 . Discussion: Although not identify the sp... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Introdução: Isolados clínicos do Citomegalovirus (CMV) são facilmente propagados in vitro resultando em comprometimento da monocamada celular onde o vírus foi inoculado, evidenciando assim a presença ou ausência de infecção. A cultura celular é um método clássico para detecção do CMV e foi bastante utilizada no passado. O ensaio de antigenemia, que detecta o antígeno viral pp65 do CMV, é o método mais utilizado atualmente na prática clínica, por ser mais rápido e específico para detecção da infecção ativa. Recentemente a técnica de PCR em tempo real tem sido empregada no monitoramento da infecção por meio da quantificação da carga viral por ser um método de alta sensibilidade e especificidade ao DNA viral. Sendo assim, o objetivo do estudo foi empregar testes usados no diagnóstico e monitoramento da infecção clínica à cepa padrão do CMV como protocolo para implantação em experimentos in vitro. Métodos: Monocamada de células fibroblásticas humanas confluentes e em quiescência foram inoculadas com amostras de células infectadas pela cepa adaptada em laboratório do CMV AD169. O efeito do vírus sobre a cultura foi monitorado 1 hora, 24 horas, 48 horas e 72 horas após a infecção (h.p.i) através da observação do efeito citopático. As mesmas amostras foram analisadas por antigenemia estimando-se a média de células positivas em 2x105 células e por PCR em tempo real estimando-se a média de cópias de DNA viral/Log10 presente nas amostras. Resultados: Efeito citopático foi observado pela primeira vez 24 h.p.i, evidenciando que o início das mudanças morfológicas ocorreu precocemente. Esse efeito tornou-se mais intenso após 72h. O ensaio de antigenemia evidenciou presença de infecção ativa pelo padrão de marcação do antígeno viral pp65 encontrado no núcleo das células infectadas, enquanto que a PCR em tempo real evidenciou o número de cópias de DNA viral nos diferentes tempos de infecção. Antigenemia apresentou uma média 57 ±56 células positivas 1h.p.i. O pico da infecção foi alcançado 24h.p.i com um aumento significativo da média para 2.381 ±168 (P<0.05 versus 1h.p.i), mantendo-se elevado 48h.p.i, mostrando uma média de 2.012 ±352. Entretanto, os níveis de antigenemia diminuem significativamente 72h.p.i para 262 ±5 (P<0.05 versus 48h.p.i). Assim como na antigenemia, observou-se aumento significativo da carga viral de 1 h.p.i para 24 h.p.i, sendo uma média de DNA viral detectado 11.30 ±0.30 e 11.96 ±0.09, respectivamente (P<0.05 versus 1h.p.i). Os níveis de DNA viral se mantêm elevados 48h.p.i, sendo detectada uma média de 12.33 ±0,26. Após esse período, carga viral cai significativamente para 11.57 ±0.06 (P<0.05 versus 48h.p.i). Não foi encontrada correlação entre os métodos quantitativos de antigenemia e PCR em tempo real. Conclusão: Os três métodos utilizados, isolamento viral, antigenemia e PCR em tempo real evidenciaram o sucesso da infecção “in vitro” pelo CMV por meio de mudanças cito-morfológicas, detecção de antígeno viral específico e carga viral por detecção do DNA viral, respectivamente. A técnica de PCR se mostrou a mais sensível na detecção viral em relação às demais técnicas. Embora sejam métodos sensíveis e específicos, consideramos a necessidade da titulação viral em quaisquer ensaios experimentais in vitro. / Introduction: Clinical isolates of Cytomegalovirus (CMV) are easily spread in vitro resulting in impairment of the monolayer cell where the virus was inoculated, thus evidencing the presence or absence of infection. The cell culture is a classic method for detection of CMV and it was widely used in the past. Antigenemia assay, which detects CMV pp65 antigen, is the method most used currently in clinical practice, because it is faster and specific for detection of the active infection. Recently, the real-time PCR has been used in monitoring of the infection through the quantification of viral load for being a high sensitivity and specificity method to viral DNA. Therefore, the aim of the study was employing tests used in diagnosis and monitoring of infection to the standard CMV strain as a protocol for implantation in experiments in vitro. Methods: Quiescent human fibroblasts in confluent monolayer were inoculated with samples of infected cells by the adapted CMV AD169 strain. The effect of the virus on culture was monitored at 1 hour, 24 hours, 48 hours and 72 hours post infection (h.p.i) by observation of cytopathic effect. The same samples were analyzed by antigenemia being estimate the mean of positive cells in 2x105 cells and by real-time PCR being estimate the mean of copies of viral DNA/Log10 present in samples. Results: Cytopathic effect was first noticed 24 h.p.i, showing that the initiation of morphological changes occurred early. This effect became more intense after 72 h.p.i. Antigenemia assay showed the presence of active infection through pattern of labeling of the pp65 viral antigen found on nucleus of infected cells, while the real-time PCR showed the number of copies of viral DNA in different times of infection. Antigenemia showed an mean of 57 ±56 positive cells 1h.p.i. The peak of the infection was reached 24h.p.i with a significant increase in the mean 2.381 ±168 (P<0.05 versus 1h.p.i) and remained high 48h.p.i, showing an mean of 2.012 ±352 positive cells. However, the mean of antigenemia decrease 72h.p.i to 262 ±5 (P<0.05 versus 48h.p.i). As well as in antigenemia, a significant increase of th viral load was observed of 1h.p.i to 24h.p.i, being the mean of viral DNA detected 11.30 ±0.30 and 11.96 ±0.09, respectively (P<0.05). The levels of viral DNA stayed high 48h.p.i, being detected a mean of 12.33 ±0.26. After this period, viral load decreased significantly to 11.57 ±0.06 (P<0.05 versus 48h.p.i). No correlation was found between the quantitative methods of antigenemia and real-time PCR. Conclusion: The three methods, virus isolation, antigenemia and real-time PCR, showed the success of the CMV infection “in vitro” by cyto-morphological changes, detection of viral antigen specific and viral load by virus DNA detection, respectively. PCR method was more sensitive in detecting virus in relation the other methods. Although sensitive and specific, we consider the need for viral titration in any experimental studies in vitro. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações