Submitted by Biblioteca da Faculdade de Farmácia (bff@ndc.uff.br) on 2017-04-19T18:55:50Z No. of bitstreams: 1 Ferreira, Thaís Gonçalves [Dissertação, 2012].pdf: 3520619 bytes, checksum: 0a743346b244c2aef9fcdf90c62f99ae (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-19T18:55:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira, Thaís Gonçalves [Dissertação, 2012].pdf: 3520619 bytes, checksum: 0a743346b244c2aef9fcdf90c62f99ae (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Ministério da Ciência e Tecnologia (MTC/Pronex) / Ministério da Saúde do Brasil / INTRODUÇÃO: Clostridium difficile é um importante patógeno entérico e o agente etiológico da diarreia associada ao C. difficile (CDAD). Pacientes com CDAD excretam uma grande quantidade de células vegetativas e esporos em suas fezes, levando a contaminação do ambiente hospitalar e propagação deste patógeno. Este fato pode ser explicado pela resistência dos esporos a muitos desinfetantes utilizados na rotina de desinfecção hospitalar. O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade de desinfetantes hospitalares contra os esporos e células vegetativas de C. difficile. Além disso, foram analisados os perfis de proteínas totais das células vegetativas das cepas de C. difficile, tratadas com os mesmos desinfetantes. MÉTODOS: Os agentes de limpeza hospitalar Virkon® (peroxigênio), Cloro-Rio® (agente liberador de cloro ativo), Peresal® (peroxigênio), Riohex® (biguanida), e Cidex Opa® (aldeído), comumente utilizados em hospitais brasileiros, foram testados contra os esporos das cepas de C. difficile HU17- ribotipo 133 e SJ1-ribotipo 135, ambos ribotipos encontrados exclusivamente no Brasil. A cepa hipervirulenta de C. difficile, BI/NAP1/027, foi utilizada para comparação. Os testes foram realizados de acordo com o método padrão para teste da atividade esporocida de desinfetantes dos Estados Unidos, ASTM E2414-05. Para a análise do perfil de proteínas totais, as mesmas cepas de C. difficile, incluindo também a ATCC 9689, foram crescidas na presença e na ausência de concentração subinibitória dos desinfetantes citados e submetidas a eletroforese em gel de SDS-PAGE. RESULTADOS: Os agentes Cloro-Rio® e Cidex Opa® eliminaram completamente os esporos de todas as cepas testadas, enquanto o Riohex® não exibiu qualquer redução significante. Por outro lado, o Virkon® reduziu significativamente a concentração de esporos para as cepas HU17-133 e BI/NAP1/027, mas o mesmo não foi observado com a cepa SJ1-135. O agente Peresal® eliminou completamente os esporos da cepa HU17-133, mas apenas reduziu a concentração inicial dos esporos para as cepas C. difficile SJ1-135 e BI/NAP1/027. Os desinfetantes Cloro- Rio® e Riohex® foram os que mais afetaram a expressão de proteínas em todas as cepas avaliadas. CONCLUSÕES: Em conjunto, nossos resultados mostraram que o Cloro-Rio® e Cidex Opa® foram os desinfetantes mais eficazes para eliminação dos esporos de C. difficile. O estudo das proteínas afetadas pelos desinfetantes poderia ajudar a elucidar a resistência do C. difficile frente a alguns agentes de limpeza e criar novas alternativas para eliminar e/ou diminuir a contaminação do ambiente hospitalar por esta bactéria / Introduction: Clostridium difficile is an important enteric pathogen and the etiological agent of C. difficile-associated diarrhea (CDAD). Patients with CDAD, excrete a large amount of vegetative cells and spores in their stools, leading to contamination of the hospital environment and spread of the pathogen. This fact can be explained by the resistance of spores to many disinfectants used in hospital routine. The aim of this study was to evaluate the activity of hospital disinfectants against C. difficile spores and vegetative cells. Furthermore were analyzed the whole proteins profiles of the vegetative cells of these strains treated with the same disinfectant. METHODS: The hospital cleaning agents Virkon® (peroxygen), Cloro-Rio® (chlorine), Peresal® (peroxygen), Riohex® (biguanide), and Cidex Opa® (aldehyde), usually used in Brazilian hospitals, were tested against C. difficile strains spores HU17-ribotype 133 and SJ1-ribotype 135, both exclusively Brazilian. BI/NAP1/ribotype 027 strain was also used for comparison. The tests were performed in accordance with the standard method for testing the sporicidal activity of disinfectants of the United States, ASTM E2414-05. For the analysis of whole proteins profile, the strains were grown in the presence and absence of sub inhibitory concentrations of the disinfectants and applied on SDS-PAGE gel. RESULTS: Cloro-Rio® and Cidex Opa® completely eliminated spores of all strains tested, while Riohex® did not show any significant reduction. On the other hand, Virkon® significantly reduced HU17 and BI/NAP1/027 spores, but the same was not observed with SJ1 strain. The agent Peresal® completely eliminate the spores of strain HU17-133, but only reduced the initial concentration of spores for strains SJ1-135 and BI/NAP1/027. The disinfectants Cloro-Rio® and Riohex® were the most affected protein expression in all strains evaluated. CONCLUSIONS: Taken together, our results show that Cloro-Rio® and Cidex Opa® are the most remarkable agents for eliminating spores. The study of proteins affected by the disinfectant might help to elucidate the resistance of C. difficile against some cleaning agents and create new alternatives to eliminate and/or reduce the contamination of the hospital by this bacterium