Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La leptospirosis es una zoonosis re-emergente de distribución mundial, producida por bacterias patógenas del genero Leptospira. El cuadro clínico en humanos varía desde asintomático hasta letal. La transmisión de la bacteria a un hospededero susceptible se realiza por contacto directo o indirecto con orina de animales infectados. Dentro de la epidemiología los cursos de agua cumplen un rol significativo, ya que la bacteria es hidrofílica, permaneciendo viable en agua por largos períodos de tiempo. Los animales de vida silvestre son un importante reservorio, siendo los roedores el caso más estudiado, también se ha evidenciado transporte renal y largos periodos de leptospiruria, en mustélidos, zorrillos y mapaches. Al respecto estudios recientes en Francia han revelado 86% de prevalencia de anticuerpos contra Leptospira, y un porte renal de un 23%, por pruebas de PCR, en visón americano (Neovison vison). Con el fin de detectar Leptospiras patógenas en visones americanos de vida libre, introducidos en el sur de Chile, se tomaron muestras de sangre y riñón desde animales capturados en 3 regiones distintas del país (Los Ríos, Los Lagos y Aysén). Se detectaron Leptospiras patógenas mediante PCR en 29 de 57 individuos. Las muestras de riñón presentaron mayores resultados positivos en proporción a la cantidad de muestras analizadas. Las regiones de los Lagos y de Aysén obtuvieron mayores tasas de captura y alto porcentaje de individuos positivos. Neovison vison presentó un alto porcentaje de portación de Leptospira (50%), pudiendo ser un importante agente diseminador de esta bacteria. Debido a su capacidad invasiva de ambientes naturales, y a la interacción con especies domésticas y silvestres nativas se deben realizar estudios que lo confirmen / Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 1100139

La Ehrlichiosis es una zoonosis que ha sido identificada en muchos países de América Latina y el mundo entero. Esta enfermedad ocasiona alteraciones hematológicas y bioquímicas en los pacientes afectados. Los estudios reportados en el Perú muestran valores variables de seropositividad en relación a la enfermedad. En el presente estudio se determinó la presencia de seropositividad a Ehrlichia canis mediante la prueba de Inmunofluorescencia indirecta (IFI) en pacientes humanos y la evaluación hematológica respectiva en cada uno de ellos y su asociación con variables de sexo, edad, exposición a garrapatas y nivel de contacto con perros mediante la prueba de Chi Cuadrado. Se evaluaron 91 sujetos sin distinción de sexo, edad o condición socioeconómica cuyos perros tenían historia de erliqiosis reciente (máximo 6 meses previos al muestreo), los cuales llenaron una encuesta con datos clínico-epidemiológicos de importancia. El muestreo fue realizado entre los meses de febrero y mayo en el Laboratorio de Patología Clínica de la FMV-UNMSM y en los domicilios de cada uno de los pacientes; mientras que, el procesamiento de las muestras se ejecutó en dicho Laboratorio y en la Section de Virología del Laboratorio de Microbiología y Parasitología de dicha facultad. Los resultados de la evaluación hematológica mostraron ausencia de pacientes positivos, habiendo 15.38% de pacientes sospechosos (presencia de corpúsculos de inclusión en células mononucleares y ausencia de trombocitopenia). El porcentaje de pacientes seropositivos por IFI fue de 14.29%, no encontrándose significancia estadística a la prueba de Chi Cuadrado (p menor 0.05) con las variables de interés. Estos hallazgos confirman la exposición a Ehrlichia canis en propietarios de caninos domésticos con antecedentes de Ehrlichiosis en Lima Metropolitana, sin evidenciar asociación de los resultados con los factores de riesgo evaluados. / Ehrlichiosis is a zoonotic disease found in many Latin American countries and worldwide as well. The disease causes hematological and biochemical changes in affected patients. Studies reported in Peru show variable seropositivity values related to this disease. In this study, we evaluated seropositivity and hematologic changes in human subjects by indirect Inmunofluorescent test (IFI) and hematology. We tested the results against risk factors such as sex, age, ticks and dog contact using the Chi-Square test. Ninety-one samples were collected from patients with no difference related to socioeconomic status, age or sex whose dogs had recent history of ehrlichiosis (6 months preview to the sampling) and were asked to fill out a survey with these information. Data recopilation was done between february and may of 2010 at the FMV-UNMSM Clinical Pathology Laboratory and at the subject’s home when necessary. Samples were processed in this laboratory as well as in the Virology Unit of the Microbiology and Parasithology Laboratory. Hematology results revealed an absence of positive cases and 15.38% of suspected cases (showing presence of inclusions bodies within the cytoplasm of mononuclear cells and absence of thrombocytopenia). The IFI seropositive patients were 14.29%, without statistic relevance to the Chi Square test (p menor 0.05) compared to any of the risk factors considered above. These findings confirm exposition to Ehrlichia canis in dog owners with previous record of Ehrilichiosis in Lima Metropolitana, without statistical relationship between tests results and the risk factors evaluated.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Durante la última década la presencia humana en la Antártica se ha incrementado en forma progresiva, debido al desarrollo de la industria del turismo y a la gran cantidad de asentamientos humanos que existen en la actualidad. Este fenómeno, coincide con las altas tasas de infección registradas en los últimos años y con los recientes aislamientos de microbios que infectan humanos, presentes en animales silvestres que habitan en la Antártica y zonas sub-antárticas, algunos de los cuales, han mostrado resistencia a antibióticos. Esto ha llevado a varios investigadores a pensar que el efecto antropogénico podría estar influyendo sobre estos territorios. En esta investigación se intentó detectar la presencia de cepas de Salmonella enterica resistente a antibióticos en pingüinos Papúa (Pygoscelis papua) que habitan la Antártica Chilena. Para esto, se tomaron 200 muestras fecales de cuatro zonas de la Península Antártica con diferente grado de exposición a la presencia humana. De estas muestras, se aislaron cuatro cepas de S. enterica, todas ellas provenientes de las muestras tomadas en la base General Bernardo O’Higgins. Las cuatro cepas fueron resistentes al menos a tres agentes antimicrobianos, siendo una de ellas multirresistente, mostrando resistencia contra β-lactámicos, fluoroquinolonas y contra la asociación de Sulfametoxazol más Trimetoprim. Los resultados de esta investigación sugieren que los asentamientos humanos estarían afectando negativamente el medioambiente antártico, alterando la flora intestinal de la vida silvestre con la presencia de patógenos zoonóticos resistentes a antibióticos

Memoria para optar al título Profesional de Médico Veterinario / Cryptosporidium spp. es un agente parasitario protozoario zoonótico capaz de infectar a múltiples especies animales en todo el mundo, definido como prioritario para monitoreo en fauna silvestre. Produce diarrea en individuos inmunocomprometidos, siendo transmitido por vía fecal-oral, donde el agua juega un rol epidemiológico importante. Este patógeno, ya ha sido detectado en aguas marinas y superficiales y en animales acuáticos, incluyendo pingüinos de la Antártica. Los Sphenisciformes se consideran centinelas oceánicos, ya que reflejan cambios en la productividad oceánica y cambios ambientales producidos por actividades humanas. Con el objetivo de detectar este patógeno en pingüinos de zonas templadas, en este estudio se tomaron muestras a partir de tórulas cloacales y heces frescas desde el ambiente provenientes de Pingüinos de Magallanes (Spheniscus magellanicus) pertenecientes a dos colonias reproductivas, Isla Magdalena y Seno Otway, en la Región de Magallanes y Antártica Chilena. En Isla Magdalena, un 3,5% de las muestras obtenidas directamente desde las aves fueron positivas al agente, mientras que en Seno Otway un 3,4% de ellas dieron positivas, no existiendo diferencias significativas en los niveles de infección entre las colonias. Por otro lado, en las muestras ambientales, tomadas solamente en Isla Magdalena, se encontró un 29,1% de positividad a la presencia este parásito, siendo esta la primera descripción de Cryptosporidium spp. en S. magellanicus, y a su vez en pingüinos de zonas templadas. / Proyecto FONDECYT 1110255

La Ehrlichiosis es una zoonosis que ha sido identificada en muchos países de América Latina y el mundo entero. Esta enfermedad ocasiona alteraciones hematológicas y bioquímicas en los pacientes afectados. Los estudios reportados en el Perú muestran valores variables de seropositividad en relación a la enfermedad. En el presente estudio se determinó la presencia de seropositividad a Ehrlichia canis mediante la prueba de Inmunofluorescencia indirecta (IFI) en pacientes humanos y la evaluación hematológica respectiva en cada uno de ellos y su asociación con variables de sexo, edad, exposición a garrapatas y nivel de contacto con perros mediante la prueba de Chi Cuadrado. Se evaluaron 91 sujetos sin distinción de sexo, edad o condición socioeconómica cuyos perros tenían historia de erliqiosis reciente (máximo 6 meses previos al muestreo), los cuales llenaron una encuesta con datos clínico-epidemiológicos de importancia. El muestreo fue realizado entre los meses de febrero y mayo en el Laboratorio de Patología Clínica de la FMV-UNMSM y en los domicilios de cada uno de los pacientes; mientras que, el procesamiento de las muestras se ejecutó en dicho Laboratorio y en la Section de Virología del Laboratorio de Microbiología y Parasitología de dicha facultad. Los resultados de la evaluación hematológica mostraron ausencia de pacientes positivos, habiendo 15.38% de pacientes sospechosos (presencia de corpúsculos de inclusión en células mononucleares y ausencia de trombocitopenia). El porcentaje de pacientes seropositivos por IFI fue de 14.29%, no encontrándose significancia estadística a la prueba de Chi Cuadrado (p menor 0.05) con las variables de interés. Estos hallazgos confirman la exposición a Ehrlichia canis en propietarios de caninos domésticos con antecedentes de Ehrlichiosis en Lima Metropolitana, sin evidenciar asociación de los resultados con los factores de riesgo evaluados. / Ehrlichiosis is a zoonotic disease found in many Latin American countries and worldwide as well. The disease causes hematological and biochemical changes in affected patients. Studies reported in Peru show variable seropositivity values related to this disease. In this study, we evaluated seropositivity and hematologic changes in human subjects by indirect Inmunofluorescent test (IFI) and hematology. We tested the results against risk factors such as sex, age, ticks and dog contact using the Chi-Square test. Ninety-one samples were collected from patients with no difference related to socioeconomic status, age or sex whose dogs had recent history of ehrlichiosis (6 months preview to the sampling) and were asked to fill out a survey with these information. Data recopilation was done between february and may of 2010 at the FMV-UNMSM Clinical Pathology Laboratory and at the subject’s home when necessary. Samples were processed in this laboratory as well as in the Virology Unit of the Microbiology and Parasithology Laboratory. Hematology results revealed an absence of positive cases and 15.38% of suspected cases (showing presence of inclusions bodies within the cytoplasm of mononuclear cells and absence of thrombocytopenia). The IFI seropositive patients were 14.29%, without statistic relevance to the Chi Square test (p menor 0.05) compared to any of the risk factors considered above. These findings confirm exposition to Ehrlichia canis in dog owners with previous record of Ehrilichiosis in Lima Metropolitana, without statistical relationship between tests results and the risk factors evaluated.

El objetivo de este trabajo fue determinar la prevalencia de Guardia sp. en la población canina doméstica en los 6 distritos que conforman la Provincia Constitucional del Callao en el Perú. Para tal fin se colectaron 385 muestras fecales de perros aparentemente normales de ambos sexos, de diferentes edades y de acuerdo a la zona en donde habitaban sus propietarios. Las muestras fueron procesadas mediante la técnica de sedimentación espontánea; encontrándose una prevalencia de 9,35 ± 2% de Guardia sp. Mediante la prueba de regresión logística se cuantificó la asociación entre la presencia del parásito y las características físicas de las heces, estrato distrital de procedencia, sexo y edad del canino; se determinó una relación estadísticamente significativa entre el hallazgo de quistes de Guardia sp. y las características físicas de las muestras. Los resultados de nuestro estudio denotan una parasitosis moderada de Guardia sp. en los caninos, evidenciando un riesgo zoonótico, por lo que se hace necesario el establecimiento de programas educativos para prevenir la posibilidad de contagio especialmente en la población infantil. Asimismo, debido a que la ocurrencia del parásito es más frecuente en heces diarreicas o pastosas que en heces normales, se debe consultar al Médico Veterinario para que determine la causa y un adecuado tratamiento a ese trastorno digestivo. / The aim of this study was to determine Guardian sp. prevalence in household dog population on different districts that form Provincia Constitutional del Callao in Peru. Fecal samples were collected from 385 apparently healthy dogs of different ages that were selected depending on the zone where their owners lived. Stool samples were processed by spontaneous sedimentation technique and we found that 9,35 ± 2% (36/385) of the canine population in this study were positive to Giardia sp. cysts. Relationships between cysts detection and stool samples characteristics, provenience, sex and age of the dogs were analyzed by logistic regression; significant statistical relationship was found between Giardia sp detection and stoll samples physical characteristics. Results show a moderate Giardia sp. infection in dogs which evidences a zoonotic risk that makes necessary the setting of educational programs in order to prevent Giardia sp. transmission especially to infant population. Giardia sp. is more frequently detected in diarrheic or soft stool samples that in normal ones, this is the reason why owners of dogs with that stool characteristic should ask veterinarian to determine the cause and to give an appropriate treatment to that problem. / Tesis

El objetivo de este trabajo fue determinar la prevalencia de Guardia sp. en la población canina doméstica en los 6 distritos que conforman la Provincia Constitucional del Callao en el Perú. Para tal fin se colectaron 385 muestras fecales de perros aparentemente normales de ambos sexos, de diferentes edades y de acuerdo a la zona en donde habitaban sus propietarios. Las muestras fueron procesadas mediante la técnica de sedimentación espontánea; encontrándose una prevalencia de 9,35 ± 2% de Guardia sp. Mediante la prueba de regresión logística se cuantificó la asociación entre la presencia del parásito y las características físicas de las heces, estrato distrital de procedencia, sexo y edad del canino; se determinó una relación estadísticamente significativa entre el hallazgo de quistes de Guardia sp. y las características físicas de las muestras. Los resultados de nuestro estudio denotan una parasitosis moderada de Guardia sp. en los caninos, evidenciando un riesgo zoonótico, por lo que se hace necesario el establecimiento de programas educativos para prevenir la posibilidad de contagio especialmente en la población infantil. Asimismo, debido a que la ocurrencia del parásito es más frecuente en heces diarreicas o pastosas que en heces normales, se debe consultar al Médico Veterinario para que determine la causa y un adecuado tratamiento a ese trastorno digestivo. / The aim of this study was to determine Guardian sp. prevalence in household dog population on different districts that form Provincia Constitutional del Callao in Peru. Fecal samples were collected from 385 apparently healthy dogs of different ages that were selected depending on the zone where their owners lived. Stool samples were processed by spontaneous sedimentation technique and we found that 9,35 ± 2% (36/385) of the canine population in this study were positive to Giardia sp. cysts. Relationships between cysts detection and stool samples characteristics, provenience, sex and age of the dogs were analyzed by logistic regression; significant statistical relationship was found between Giardia sp detection and stoll samples physical characteristics. Results show a moderate Giardia sp. infection in dogs which evidences a zoonotic risk that makes necessary the setting of educational programs in order to prevent Giardia sp. transmission especially to infant population. Giardia sp. is more frequently detected in diarrheic or soft stool samples that in normal ones, this is the reason why owners of dogs with that stool characteristic should ask veterinarian to determine the cause and to give an appropriate treatment to that problem.

El objetivo del estudio fue determinar la contaminación de los parques públicos del distrito de La Molina con huevos de Toxocara spp., relacionando sus resultados con la categorización de los parques (no amigables, amigables y poco amigables) dentro del Programa de vigilancia sanitaria de parques y jardines, elaborado por la Dirección de Higiene Alimentaria y Zoonosis de la DIGESA-Ministerio de Salud (MINSA). El estudio fue de tipo descriptivo, evaluándose 131 parques públicos, entre los meses de agosto de 2014 y abril de 2016. Muestras representativas de tierra y césped (1-2 kg) fueron colectadas de cada parque, mediante la técnica de la doble W y trasladadas al Laboratorio de Parasitología de la FMV-UNMSM para su procesamiento mediante las técnicas de sedimentación y flotación con solución sobresaturada de NaCl. Se consideró como parque positivo la presencia de al menos un huevo de Toxocara spp. en la muestra. La categorización de los parques fue realizada por personal de La Municipalidad de La Molina, en base al cumplimiento de tres criterios (infraestructura adecuada, ambiente y riesgos sanitarios), según la “Ficha de Evaluación Sanitaria Ambiental de Parques y Jardines” del DIGESA-MINSA. Solo un parque del distrito de La Molina resultó positivo a la presencia de huevos de Toxocara spp., representando una prevalencia de 0.76%. Paralelamente, 5 parques fueron considerados como no amigables, 75 como amigables y 51 como poco amigables; perteneciendo a este último grupo el parque positivo. No se pudo relacionar ambos resultados, por el escaso número de parques positivos. El bajo porcentaje de parques contaminados se debe probablemente a las mejoras realizadas por el municipio a inicios del 2011, con la implementación del Programa de Vigilancia Sanitaria de Parques y Jardines (tenencia responsable, recojo de excretas, etc.), además de realizar frecuentes campañas de desparasitación y charlas informativas a los dueños de las mascotas. / Tesis

Leptospirosis, a zoonotic disease, is transferable through wild animals to other animals and humans directly and indirectly through contact with urine on mucous membranes. This disease can pose hazards for humans because of their increased contact with wild animals through increased urbanization and greater wildlife rehabilitation efforts and also through increased contact with domesticated animals. Furthermore, humans also have the potential of contracting this potentially fatal disease through recreational activities in contaminated waters or soils. The disease can present itself mildly, similar to symptoms of the flu, or more severely, leading to end-organ damage of multiple systems. Having been reinstated as a nationally notifiable disease by the Centers for Disease Control and Prevention in January 2013, leptospirosis has been recognized as a re-emerging zoonosis that has global public health implications. Understanding the disease is important in limiting its transmission; thus, this thesis aims to provide a review of the biology and transmission of leptospirosis to animals and humans, providing a basis in understanding the possible ways to limit the transmission and prevent future outbreaks. Furthermore, this thesis describes the manifestations, diagnostic testing, and treatment options for leptospirosis in canines and humans, as the increased prevalence of canines in households may pose a risk to humans in the future in the transmission of leptospirosis. According to current research, leptospires are extremely viable bacteria that can survive for long periods of time in a variety of environments and host species. Researchers have conducted various experiments to evaluate the factors that increase the virulence of leptospires. Experiments include the osmolarity, presence of serum, temperature chances, and the presence of iron. Results demonstrate that virulence increases with increased osmolarity, presence of serum, increased temperature, and the presence of iron. These characteristics of pathogenic leptospires allow them to avoid destruction by the immune system and colonize in the host, specifically in the renal tubules, allowing for excretion into the environment. Limiting the transmission of the disease is very important to prevent future outbreaks for animal species and humans. One method of limiting this transmission includes the use of vaccines. A major issue is the transmission of disease surround renal shedding, or excretion of the bacteria in urine. Canine polyvalent vaccines, containing multiple serovars, have been proven to be effective for a year, providing immunity and decreasing renal shedding of the bacteria. While vaccines for humans have been developed, they are not widely used due to the variation of serovars that are able to infect humans around the world and also the geographic distribution of disease, with prevalence mainly in tropical regions. Since leptospirosis is a disease that is not well-known, but can be found globally, there is necessity for greater emphasis on education, improved diagnostic testing, and treatment regimens. Emphasis on education is not only important for future veterinarians but also for those working in at-risk occupations. Furthermore, since experiments have shown that pet owners may not be aware of the prevalence and danger of zoonotic diseases, veterinarians should provide education for pet owners as well. Currently, the disease is underreported, which is accounted for due to the currently used diagnostic methods that are not efficient for early diagnosis, such as microscopic agglutination test, polymerase chain reaction, and cultures. In regards to treatment, antimicrobial treatment is considered controversial and there is not an agreed upon method of treatment. Thus, an emphasis should be placed on a developing a treatment method that is able to directly affect leptospires and usable across varying populations.

Brucella abortus is a bacterial species that infects cattle, elk, and bison herds worldwide and is a causative agent of brucellosis. B. abortus is a common form of zoonosis, as incidental spillover into the human population results in millions of infections annually. Current treatment options are limited to culling infected animals and treating humans with a rigorous antibiotic regimen, which still results in up to a 30% relapse rate. Detection of the pathogen is difficult due to the replicative niche residing within the host's immune cells, specifically macrophages and dendritic cells. Numerous small regulatory RNAs (sRNAs) were found to be expressed by B. abortus, and it was hypothesized that they may be important for virulence. One sRNA, when deleted, was shown to be linked to outer membrane stress resistance and was named MssR (membrane sensitivity sRNA). When the ΔmssR strain was tested in both macrophage and mouse models of infection, there were no virulence defects. Additionally, proteomic and transcriptomic studies of the ΔmssR strain showed very few dysregulated targets. Expression of mssR was tested under numerous biologically relevant conditions, and it was shown to be expressed significantly more during exponential phase of growth, compared to stationary phase. Initial microscopical analysis of mutant cells after treatment with sodium dodecyl sulfate (SDS_ did not reveal any morphological differences. It is unknown what contributes to the observed phenotypes and additional experiments are required to determine what is causing the perturbations in the outer membrane of the ΔmssR strain. / Master of Science / Brucella abortus is a bacterial species that causes the disease brucellosis in cattle and humans worldwide. To understand how B. abortus establishes infection, we are studying how the bacteria control the expression of genes during the process of infection. One method of bacterial gene regulation is the use of small regulatory RNAs (sRNAs). These small transcripts are similar to mRNAs but are shorter in length and typically do not encode for a protein. One such sRNA in B. abortus was shown to be linked to sensitivity to outer membrane stress and was named Membrane Sensitivity sRNA (MssR). After engineering a strain of B. abortus that does not produce MssR, there were no differences in the ability of the bacteria to infect macrophages or mice. Additionally, there were no noticable differences in the structure of the bacterial cells. When sRNAs regulate gene expression, differences can be seen at the mRNA and protein levels when the sRNAs are deleted. Very few targets were found be dysregulated at the transcript and protein level within the ΔmssR mutant. It is unknown what is causing the mutant to be more sensitive to outer membrane perturbations and additional tests are necessary to determine how MssR is linked to this phenotype.