Thèses (M.Sc.)--Université de Sherbrooke (Canada), 2000. / Titre de l'écran-titre (visionné le 20 juin 2006). Publié aussi en version papier.

Orientador: Sonia Nair Bao / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T02:50:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silveira_EniBragada_M.pdf: 5121869 bytes, checksum: 0e643694629badb03e0006ee99c05090 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Nestes últimos anos, evidências levaram à percepção de uma estreita associação e coevolução entre a resposta apoptótica de células hospedeiras, que pode prevenir disseminação viral, e estratégias virais de bloqueio ou evasão à apoptose, capazes de garantir a replicação, o que tem feito do estudo dos vírus importante área para a compreensão de aspectos relacionados à regulação da apoptose. Neste sentido, o estudo dos baculovírus tem trazido importantes contribuições. Durante a construção e isolamento de um vírus Anticarsia gemmatalis nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) recombinante obtivemos um mutante (vApAg) que induz morte prematura em uma linhagem celular derivada de Anticarsia gemmatalis (UFL-AG-286), permissiva a AgMNPV, e que replica normalmente em outra linhagem celular, derivada de Trichoplusia ni (BTI- Tn5B-4) (Tn-5B). Estudos em microscopia de luz e eletrônica foram feitos para descrever comparativamente o processo infeccioso e a indução de apoptose por vApAg em células UFL-AG-286 e Tn-5B e pelo vírus vP3Sdel, derivado de Autographa californica nucleopolyhedrovirus (AcMNPV), em células UFL-AG-286. Foi demonstrado que células UFL-AG-286 morrem por apoptose quando infectadas por v ApAg e vP35del, apresentando dilatação de endomembranas, blebbing de superficie e formação de corpos apoptóticos. No entanto, somente vP3Sdel foi capaz de induzir condensação cromatínica. Apesar da indução de apoptose massiva em células UFL-AG-286 pelo vírus vApAg, este vírus foi capaz de produzir progênie uma vez que a apoptose foi retardada neste sistema. Para células UFL-AG-286 infectadas com vP35del isto não ocorreu porque a apoptose é mais rápida. Este fato resultou em várias diferenças ultraestruturais na forma com que a apoptose ocorre nestes dois sistemas, incluindo as diferenças relativas à condensação cromatínica. Foi também demonstrado que v ApAg completa um ciclo normal de infecção em células Tn-5B, com ausência de apoptose. Estas observações morfológicas foram confirmadas pela ocorrência da degradação oligonucleossomal do DNA em células UFL-AG-286 infectadas com vP35del em tempos iniciais de infecção e, com v ApAg, em tempos mais tardios. Estes resultados sugerem que a mutação de v ApAg ocorreu de tal forma que este vírus ainda possui a capacidade de bloquear a apoptose no início da infecção. Entretanto, isto não ocorre no caso de vP3Sdel, onde uma deleção no gene p35 faz com que o mesmo não seja capaz de codificar uma proteína funcional, a qual mostra-se essencial para o bloqueio da apoptose e replicação deste vírus em células UFL-AG-286 / Abstract: In the last few years, evidences about the dose association and coevolution of host cell apoptotic responses, that can prevent virus spread, and viral strategies to block or evade apoptosis for replication have been obtained, rendering the study of viruses very important to the understanding of some aspects of the regulation of apoptotic pathways. Baculovirus studies, in particular, have provided valious information in this field. During the construction and isolation of an Anticarsia gemmatalis nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) recombinant virus, a mutant (vApAg) that induces premature cell death in a cellline derived from Anticarsia gemmatalis (UFL-AG-286), permissive to AgMNPV, but replicates normally in another cell line derived from Trichoplusia ni (BTI-Tn-SBI-4) (Tn-SB) was identified. Light and electron microscopy studies were carried out to describe, comparatively, the infection process and apoptosis induction by vApAg in UFL-AG-286 and Tn-5B cells and by the virus vP35del, derived from Autographa californica nucleopolyhedrovirus (AcMNPV), in UFL-AG-286 cells. We have shown that UFL-AG-286 cells die by apoptosis when infected with vApAg and vP3Sdel, presenting endomembranes dilation, surface blebbing and apoptotic bodies formation, however, only vP3 Sdel was able to induce chromatin condensation. In spite of the massive apoptosis induced by v ApAg in UFL-AG-286 cells, this virus produced some progeny because, in this case, apoptosis is delayed. For UFL-AG-286 cells infected with vP3Sdel this does not occur because apoptosis is faster. Such a difference is accompanied by some ultrastructural differences in the apoptotic process of these two systems, especially chromatin condensation. In Tn-5B cells v ApAg completes a normal cycle of infection, without apoptosis. These morphological observations were confirmed by the occurrence of oligonucleossomal DNA fragmentation in UFL-AG-286 cells infected with vP35del, early on infection, and with vApAg, late on infection. These results suggest that the mutation in vApAg occurred in a way that blocking of apoptosis can be achieved early on infection. However, such not occurr in the case of vP3 5del infection, where the antiapoptotic gene p35 has a deletion that completely prevents P35 protein activity, essential for blocking of apoptosis and replication of this virus in UFL-AG-286 cells / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular

Thèse doctorat : Médecine. Biologie cellulaire et moléculaire : Université de Nantes : 2003. / Bibliogr. f. 133-161.

Thèse de doctorat : Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie. Pharmacologie cellulaire et moléculaire : Strasbourg 1 : 2007. / Thèse soutenue sur un ensemble de travaux. Titre provenant de l'écran-titre. Bibliogr. f. 101-108.

Thèses (Ph.D.)--Université de Sherbrooke (Canada), 1998. / Titre de l'écran-titre (visionné le 20 juin 2006). Publié aussi en version papier.

Thèses (M.Sc.)--Université de Sherbrooke (Canada), 2001. / Titre de l'écran-titre (visionné le 20 juin 2006). Publié aussi en version papier.

Thèses (M.Sc.)--Université de Sherbrooke (Canada), 2001. / Titre de l'écran-titre (visionné le 20 juin 2006). Publié aussi en version papier.

Thèses (M.Sc.)--Université de Sherbrooke (Canada), 2002. / Titre de l'écran-titre (visionné le 20 juin 2006). Publié aussi en version papier.

Aline Borba Sbardelotto. Estudo do mecanismo de citotóxicidade da oncocalixona-A em leucemia promiolocítica humana – linhagem HL-60. 2013. 103 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-01-27T11:21:47Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_absbardelotto.pdf: 2256619 bytes, checksum: 5769a859b286e70e7de75a9e8b9ddbd5 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-01-27T11:23:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_absbardelotto.pdf: 2256619 bytes, checksum: 5769a859b286e70e7de75a9e8b9ddbd5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-27T11:23:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_absbardelotto.pdf: 2256619 bytes, checksum: 5769a859b286e70e7de75a9e8b9ddbd5 (MD5) Previous issue date: 2013 / Auxemma oncocalyx Taub. belongs to the Boraginaceae family. It is known as “pau branco” and is frequently found in the State of Ceará. The skin of that tree is an astringent and is commonly used as a medicine for wounds. Oncocalyxone A (Onco-A) is a quinone isolated from the ethanolic extract of A. oncocalyx, it has exhibited a series of pharmacological properties, such as analgesic, anti-inflammatory, antioxidant, cytotoxic and antitumor properties. The present study tried to provide a basic set of data on the cytotoxic effects of Onco-A against human promyelocytic leukemia cell line HL-60. The cytotoxic potential of Onco-A was evaluated by the MTT assay, colorimetric analysis, after 24 hours exposure in HL-60 cells with increasing concentrations (8, 16,5 e 33 µM). After the cells were exposure, there were performed experiments to identify the mecanisms of action in vitro (flow cytometry) by the cellular viability, phosphatidyl externalization, internucleosomal DNA fragmentation, identifying apoptotic pathway; the experiments to morphological analysis were made with tripan blue, May-Grunwald-Giemsa, and acridine orange/ethidium bromide; DNA integrity’s test by cometa assay; and the avaliation of interection of enzyme topoisomerase with Onco-A. Results: according to MTT test results, Onco-A showed a significant cytotoxic activity against HL-60 cells (IC50 11 µM). In addition, morphological analysis of cells treated with lower concentration of Onco – A demonstrated that there were reduction in cell’s volume, formation of apoptotic bodies, chromatin condensation, phosphatidylserine externalization, also reduction of cell viability and DNA fragmentation. The Onco-A caused mitochondrial depolarization, activated caspase starters -9 and -8, and the effectors -3 and -7, cleaved Poly ADP-Ribose polymerase – intrinsic and extrinsic pathways. Although our results had shown that none of the doses was able to generate Reactive Oxigen Species, after pre-treated for 1 hour with N-acetylcysteine, the cytotoxicity of Onco-A was changed, an increase in membrane integrity, decreased DNA fragmentation, drag on the G2/M cell cycle phase and low levels of DNA damage. Besides the Onco-A does not interact with the enzyme topoisomerase, the data suggest that their target as Michael acceptor, can be the DNA. These results suggest that apoptosis is one of the major forms of cell’s death caused by Onco-A, and reinforces the compound may be a prototype for cancer therapy. / Auxemma oncocalyx Taub pertence a família das Boraginaceae, é conhecida como “pau branco” e frequentemente encontrada no estado do Ceará. A casca da árvore é um adstringente e popularmente utilizado no tratamento de feridas. Oncocalixona A (Onco-A), uma quinona isolada do extrato etílico da A. oncocalyx, possui uma série de propriedades farmacológicas, tais como: analgésica, anti-inflamatória, antioxidante, citotóxica e antitumoral. O presente estudo foi realizado para avaliar os efeitos citotóxicos da Onco-A na linhagem tumoral promielocítica, HL-60. O potencial citotóxico foi avaliado pelo teste colorimétrico de análise indireta, MTT, depois de 24 horas de exposição das células HL-60 às concentrações crescentes (8, 16,5 e 33 µM) da Onco-A. Após o tratamento, os procedimentos experimentais realizados para identificar os mecanismos de ação in vitro (no citômetro de fluxo) foram de viabilidade celular, externalização da fosfatildiserina, fragmentação do DNA intercucleossomal, identificação da via apoptótica, geração de espécie reativa de oxigênio; os experimentos de análise morfológica foram com azul de tripan, May-Grunwald-Giemsa, e laranja de acridina/ brometo de etídio; a integridade do DNA pelo teste cometa e também avaliado a interação da Onco-A com enzima topoisomerase. Resultados: de acordo com o teste do MTT, Onco-A apresentou significante citotoxicidade nas linhagem HL-60 (IC50 11 µM). As análises dos experimentos demonstraram que as células tratadas com a menor concentração de Onco-A tiveram redução no volume celular, formação de corpos apoptóticos, condensação da cromatina, externalização de fosfatildiserina, redução da viabilidade celular e fragmentação do DNA. Onco-A causou despolarização mitocondrial, ativou caspase iniciadoras -9 e -8, e as efetoras -3 e -7, clivou a proteína Poli ADP-Ribose polimerase – via intrínseca e extrínseca. Apesar de nossos resultados demonstrem que nenhuma das doses foi capaz de gerar espécies reativas de oxigênio, depois de pré-tratadas por 1 hora com N-Acetilcisteína, a citotoxicidade da Onco-A foi alterada, apresentando aumento na integridade da membrana, diminuição na fragmentação do DNA, parada na fase do ciclo celular G2/M e baixo nível de dano no DNA. Embora a Onco-A não interaja com as enzimas topoisomerases, os dados apresentados sugerem que seu alvo, como aceptor de Michael, pode ser a molécula de DNA. Esses resultados sugerem que a apoptose é uma importante forma de morte celular causada pela Onco-A, e reforça que o composto pode ser um protótipo para o tratamento do câncer.

VIEIRA, Gabriella Cunha. Avaliação in vitro do potencial citotóxico de quatro análogos de benzotiazóis. 2011. 103 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-27T13:58:03Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_gcvieira.pdf: 1610317 bytes, checksum: 53155bc645bf59489da8b81c8e2e6ee2 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-27T15:58:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_gcvieira.pdf: 1610317 bytes, checksum: 53155bc645bf59489da8b81c8e2e6ee2 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-27T15:58:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_gcvieira.pdf: 1610317 bytes, checksum: 53155bc645bf59489da8b81c8e2e6ee2 (MD5) Previous issue date: 2011 / Benzothiazole are compounds consisted of a benzene ring with a thiazole ring that present significant anticancer activity, especially the fenil substituted. Due to molecular modeling, a common method for drug design in medicinal chemistry and a useful technique for the development of new drugs, the substituted synthesis of Benzothiazole presented great advantage for the treatment of specific types of cancer. In the present study it was evaluated the cytotoxic potential of four of synthetic benzothiazole analogues with malignant and non malignant cell lines. The results demonstrated that all the tested analogues presented cytotoxic activity, however compound 1 (CI50 = 1,65µM) was chosen to give continuity to the assays because it is the prototype of the others, and compound 3 (CI50 = 1,01µM) was chosen due to its higher cytotoxicity compared to the others and for presenting a selectivity towards malignant cell line when compared to a non malignant cell line, peripheral mononuclear blood cells(PMBC). A series of assays was then carried out in vitro, where it aimed to clarify effects involved in this cytotoxic activity. The cell line HL60 was chosen to conduct the experiments for it was the most sensitive cell line to the exposure of compounds. In the viability assay a reduction in the number of viable cells was observed in the concentration of 1µM for compound 1 (56.54% viable cells, p < 0.001) and compound 3 (38.45% viable cells, p< 0.001). The morphology of HL-60 cells evaluated with the use of the May-Grünwald-Giemsa dye showed cellular death with characteristics of apoptosis which was further confirmed with the orange acridine and ethidium bromide differential count assay (LA/BE), where it was considered statistically significant from the concentration of 2µM for compound 1, with 79,92% (p< 0.001) of cells with characteristics of apoptosis and for compound 3 in the concentration of 1µM with 28,86% (P< 0.001). In the flow cytometry assays it was observed that, when treated with the tested compounds, HL60 cells promoted the externalização of phosphatidyl serine in which in the concentration of 1µM it was considered statistically significant for compound 1 (12.38% of cells in apoptosis, p< 0.001) and for compound 3 (42.67%, p< 0.001). It was observed that the compounds activated caspase 8 (Extrinsic pathway), with 21,78% (P< 0.001) of cells with characteristics of apoptosis for compound 1 (2µM) and 47.5% (p< 0.001) for compound 3 (1µM); they also activated caspase 9 (intrinsic pathway), with 17,10% (p< 0.001) of cells with characteristics of apoptosis for compound 1 (1µM) and 33.55% (p< 0.001) for compound 3 (1µM); consequently, it was activated caspases 3 and 7, involved in the final process of apoptosis, with 30,05% (p< 0.001) of cells with characteristics of apoptosis for compound 1 (2µM) and 53.19% (p< 0.001) for compound 3 (1µM). Intense DNA fragmentation was observed in cells treated with the tested compounds, where in the concentration of 1µM it was observed 23.13% (p 0.001<, composition 1) and 61.02% (p 0.001<, composition 3) of fragmented DNA. The compounds were not able to generate reactive oxygen species (ROS) and cause direct or indirect damage to the DNA strand. In conclusion, both tested compounds can be considered as molecules with cytotoxic potential, highlighting compound 3 for its slightly higher cytotoxicity and selectivity. These data strengthen the importance to synthesize and to study synthetic compounds with more selective activities for the treatment of cancer. / Benzotiazóis são compostos com anel benzeno ligados ao anel tiazol, que apresentam atividade antitumoral significante. Devido à alteração de ligações químicas de moléculas ser um método comum para desenho de fármacos em química medicinal e uma técnica útil para o desenvolvimento de novos medicamentos, a síntese de Benzotiazóis substituídos apresentou muita vantagem para o tratamento de tipos específicos de câncer. No presente estudo foi avaliado o potencial citotóxico de quatro análogos de benzotiazóis substituídos frente a linhagens tumorais e não tumorais. Os resultados demonstraram que todos os análogos apresentaram atividade citotóxica, porém o composto 1 (CI50 = 1,65µM) foi escolhido para dar continuidade aos ensaios por ser protótipo dos demais, e o composto 3 (CI50 = 1,01µM) foi escolhido por apresentar maior citotoxicidade quando comparado aos demais e ainda por apresentar uma seletividade para linhagem não tumoral avaliada, células mononucleadas do sangue periférico humano (CMSPH). Foi então realizada uma série de ensaios in vitro, onde se buscou esclarecer os efeitos envolvidos nessa atividade citotóxica. A linhagem HL60 foi a escolhida para dar continuidade ao restante dos experimentos por ser a linhagem mais sensível à exposição dos compostos. Nos ensaios de viabilidade foi observado uma redução no número de células viáveis já na concentração de 1µM para o composto 1 (56,54% células viáveis, p<0,001) e para o composto 3 (38,45% células viáveis, p<0,001). A morfologia das células HL-60 avaliadas através do uso da coloração May-Grünwald-Giemsa revelou morte celular com características de apoptose que ainda foi confirmado com ensaio da coloração diferencial de laranja de acridina e brometo de etídio (LA/BE), onde foi considerada estatisticamente significante a partir da concentração de 2µM do composto 1, com 79,92% (p<0,001) de células com características de apoptose e para o composto 3 na concentração de 1µM com 28,86% (P<0,001). Nos ensaios de citometria de fluxo foi revelado que, quando tratados com os compostos, as células HL60 promoviam a externalização da fosfatidil serina no qual na concentração de 1µM foi considerado estatisticamente significante para o composto 1 (12,38% de células em apoptose, p<0,001) e para o composto 3 (42,67%, p<0,001). Foi obervado ainda que os compostos ativam caspase 8 (via extrínseca), com 21,78% (P<0,001) de células em apoptose para o composto 1 (2µM) e 47,5% (p<0,001) para o composto 3 (1µM); ativaram também caspase 9 (intrínseca), com 17,10% (p<0,001) de células em apoptose para o composto 1 (1µM) e 33,55% (p<0,001) para o composto 3 (1(P<0,001)M); e conseqüentemente ativaram as caspases 3 e 7, envolvidas no processo final da morte celular por apoptose, com 30,05% (p<0,001) de células em apoptose para o composto 1 (2µM) e 53,19% (p<0,001) para o composto 3 (1µM). Foi observada intensa fragmentação de DNA em células tratadas com ambos os compostos, onde já na concentração de 1µM foi observado 23,13% (p<0,001, composto 1) e 61,02% (p<0,001, composto 3) de DNA fragmentado. Os composto não foram capazes de induzir a formação de espécies reativas de oxigênio (EROs) e ou causar danos diretos ou indiretos à fita de DNA. Conclui se que ambos podem ser considerados como moléculas com potencial citotóxico, destacando o composto 3 por sua maior citotoxicidade e seletividade. E ainda, esses dados reforçam a importância de sintetizar e estudar análogos sintéticos com atividades cada vez mais seletivas para o tratamento do câncer.