BEZERRA, F. T. G. Efeito da cilostamida e das metades foliculares no bloqueio da retomada da meiose e no nível de AMPc em oócitos bovinos. 2014. 67 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2014. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-06-29T14:05:58Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_ftgbezerra.pdf: 1009970 bytes, checksum: c13e81b55e7bd82edc9f4a494ecdb1ba (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-06-29T14:06:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_ftgbezerra.pdf: 1009970 bytes, checksum: c13e81b55e7bd82edc9f4a494ecdb1ba (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T14:06:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_ftgbezerra.pdf: 1009970 bytes, checksum: c13e81b55e7bd82edc9f4a494ecdb1ba (MD5) Previous issue date: 2014 / The aims of this study were (1) to evaluate the effects of cilostamide and follicular hemisections on the blockage of in vitro oocyte meiotic resumption in bovine cumulus oocyte complexs (COCs), (2) to investigate the reversibility of cilostamide effect on meiotic resumption, and (3) to quantify the levels of cAMP in COCs, denuded oocytes (DO) and cumulus cells (CC) after culturing COCs in presence of cilostamide and follicular hemisections. To this end, bovine oocytes were subjected to a pre-maturation period of 12 h in medium containing 10 µM cilostamide, follicular hemisections or combination of both and,then, submitted to in vitro maturation. To evaluate the reversibility of cilostamide effect, at the end of this culture period, COCs were washed and placed in maturation medium without cilostamide for 12, 14, 16, 18, 20, 22 and 24 hours. To investigate the levels of cAMPc, COCs subject to pre-maturation for 6 h were used to measure the levels of cAMP. After 12 hours of culture, groups COCs were fixed to assess chromatin configuration and meiotic rogression. The results showed that COCs cultured in presence of cilostamide and follicular hemisections had significantly higher percentages of oocytes at germinal vesicle stage (94%), after a period of 12 h of pre-maturation, than COCs cultured in other treatments. After blocking treatment, 75% of oocytes reached metaphase II after 16 h of maturation, emphasizing that the treatment is not toxic to oocytes. Moreover, oocytes cultured in medium containing cilostamide and follicular hemisctions had significantly higher levels of cAMP when compared to other treatments. It is concluded that cilostamide and follicular hemisections interact and promotes the maintenance of oocytes at germinal vesicle stage by increasing the levels cAMP in cultured COCs. / Os objetivos deste estudo foram: (1) avaliar os efeitos da cilostamida e das metades foliculares sobre o bloqueio da retomada da meiose de oócitos in vitro no complexo cumulus oócito bovinos (COC) , (2) investigar a reversibilidade do efeito da cilostamida na retomada da meiose, e (3) quantificar os níveis de AMPc em COCs, oócitos desnudos (OD) e células do cumulus (CC) após o cultivo de COCs na presença de cilostamida e metades foliculares. Para este fim, os oócitos de bovino foram submetidos a um período de pré-maturação de 12 h em meio contendo 10 μM cilostamida, metades foliculares ou combinação de ambos e, em seguida, submetidos a maturação in vitro. Para avaliar a reversibilidade do efeito da cilostamida, no final deste período de cultura, COC foram lavados e colocados em meio de maturação, sem cilostamida por 12, 14, 16, 18, 20, 22 e 24 horas. Para avaliar os níveis de AMPc, COCs submetidos a pré-maturação por 6 h foram utilizados para a quantificação do nível de AMPc. Após 12 horas de cultivo, grupos de COCs foram fixados para avaliar a configuração da cromatina e progressão da meiose. Os resultados mostraram que COCs cultivados em presença de cilostamida e metades foliculares apresentaram percentuais significativamente maiores de oócitos em vesícula germinativa (94%), depois de um período de 12 h de pré-maturação, do que COCs cultivados em outros tratamentos. Após o bloqueio, 75% dos oócitos atingiram metáfase II após 16 horas de maturação, enfatizando que o tratamento não é tóxico para os oócitos. Além disso, os oócitos cultivados em meio contendo cilostamida e metades foliculares tinham níveis significativamente mais elevados de AMPc quando comparado com outros tratamentos. Concluiu-se que a cilostamida e metades foliculares interagem e promovem a manutenção de oócitos no estágio de vesícula germinativa, aumentando os níveis de AMPc em COCs cultivados.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Os objetivos deste estudo foram: (1) avaliar os efeitos da cilostamida e das metades foliculares sobre o bloqueio da retomada da meiose de oÃcitos in vitro no complexo cumulus oÃcito bovinos (COC) , (2) investigar a reversibilidade do efeito da cilostamida na retomada da meiose, e (3) quantificar os nÃveis de AMPc em COCs, oÃcitos desnudos (OD) e cÃlulas do cumulus (CC) apÃs o cultivo de COCs na presenÃa de cilostamida e metades foliculares. Para este fim, os oÃcitos de bovino foram submetidos a um perÃodo de prÃ-maturaÃÃo de 12 h em meio contendo 10 μM cilostamida, metades foliculares ou combinaÃÃo de ambos e, em seguida, submetidos a maturaÃÃo in vitro. Para avaliar a reversibilidade do efeito da cilostamida, no final deste perÃodo de cultura, COC foram lavados e colocados em meio de maturaÃÃo, sem cilostamida por 12, 14, 16, 18, 20, 22 e 24 horas. Para avaliar os nÃveis de AMPc, COCs submetidos a prÃ-maturaÃÃo por 6 h foram utilizados para a quantificaÃÃo do nÃvel de AMPc. ApÃs 12 horas de cultivo, grupos de COCs foram fixados para avaliar a configuraÃÃo da cromatina e progressÃo da meiose. Os resultados mostraram que COCs cultivados em presenÃa de cilostamida e metades foliculares apresentaram percentuais significativamente maiores de oÃcitos em vesÃcula germinativa (94%), depois de um perÃodo de 12 h de prÃ-maturaÃÃo, do que COCs cultivados em outros tratamentos. ApÃs o bloqueio, 75% dos oÃcitos atingiram metÃfase II apÃs 16 horas de maturaÃÃo, enfatizando que o tratamento nÃo à tÃxico para os oÃcitos. AlÃm disso, os oÃcitos cultivados em meio contendo cilostamida e metades foliculares tinham nÃveis significativamente mais elevados de AMPc quando comparado com outros tratamentos. Concluiu-se que a cilostamida e metades foliculares interagem e promovem a manutenÃÃo de oÃcitos no estÃgio de vesÃcula germinativa, aumentando os nÃveis de AMPc em COCs cultivados. / The aims of this study were (1) to evaluate the effects of cilostamide and follicular hemisections on the blockage of in vitro oocyte meiotic resumption in bovine cumulus oocyte complexs (COCs), (2) to investigate the reversibility of cilostamide effect on meiotic resumption, and (3) to quantify the levels of cAMP in COCs, denuded oocytes (DO) and cumulus cells (CC) after culturing COCs in presence of cilostamide and follicular hemisections. To this end, bovine oocytes were subjected to a pre-maturation period of 12 h in medium containing 10 ÂM cilostamide, follicular hemisections or combination of both and,then, submitted to in vitro maturation. To evaluate the reversibility of cilostamide effect, at the end of this culture period, COCs were washed and placed in maturation medium without cilostamide for 12, 14, 16, 18, 20, 22 and 24 hours. To investigate the levels of cAMPc, COCs subject to pre-maturation for 6 h were used to measure the levels of cAMP. After 12 hours of culture, groups COCs were fixed to assess chromatin configuration and meiotic rogression. The results showed that COCs cultured in presence of cilostamide and follicular hemisections had significantly higher percentages of oocytes at germinal vesicle stage (94%), after a period of 12 h of pre-maturation, than COCs cultured in other treatments. After blocking treatment, 75% of oocytes reached metaphase II after 16 h of maturation, emphasizing that the treatment is not toxic to oocytes. Moreover, oocytes cultured in medium containing cilostamide and follicular hemisctions had significantly higher levels of cAMP when compared to other treatments. It is concluded that cilostamide and follicular hemisections interact and promotes the maintenance of oocytes at germinal vesicle stage by increasing the levels cAMP in cultured COCs.