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RIC-8B, um fator trocador de nucleotídeo guanina (GEF), é essencial para a embriogênese / RIC-8B, a guanine nucleotide exchange factor (GEF), is essential for embryogenesis

Gutiyama, Luciana Mayumi 30 September 2013 (has links)
RIC-8B é uma proteína que apresenta, in vitro, atividade de fator de troca de nucleotídeos guanina (GEF). No entanto, seu papel in vivo não é conhecido. Dados anteriores do nosso laboratório demonstraram que essa proteína interage especificamente com Gαolf, que é uma proteína G exclusiva do sistema olfatório, presente nos cílios dos neurônios olfatórios, onde ocorre a transdução de sinal ativada pelos odorantes. No camundongo adulto verificou-se, por meio de ensaios de hibridização in situ, que RIC-8B está presente somente em regiões de expressão de Gαolf: no epitélio olfatório maduro e no núcleo estriado do sistema nervoso central. Para avaliar a função fisiológica de RIC-8B in vivo, resolvemos gerar uma linhagem de camundongo knockout para Ric-8B. Verificamos que a linhagem é inviável devido à letalidade dos embriões já em fases precoces do desenvolvimento (por volta de E8,5 e E9,0). A coloração de embriões com X-gal mostra que RIC-8B é especificamente expressa em regiões que darão origem ao sistema nervoso, como na região ventral do tubo neural, e em regiões cefálicas. Interessantemente, mostramos que RIC-8B é expressa na placa do assoalho do tubo neural, de uma maneira muito semelhante ao padrão de expressão de Sonic Hedgehog (SHH), que apresenta um papel fundamental para a organização do sistema nervoso, entre outras funções. Nossos resultados indicam, portanto, que RIC-8B desempenha um papel crucial durante a embriogênese, e que este papel pode estar relacionado com o papel exercido por SHH. Além disso, como a via de sinalização de SHH ocorre em cílios primários nas células alvo, nossos dados levantam a interessante possibilidade de que RIC-8B apresenta funções relacionadas a cílios, tanto no camundongo adulto (neste caso nos cílios dos neurônios olfatórios) como no embrião (neste caso nos cílios primários). / RIC-8B is a protein that, in vitro, acts as a guanine nucleotide exchange factor (GEF). However, its role in vivo remains unknown. Previous data from our laboratory demonstrated that this protein is able to interact specifically with Gαolf, a G protein found only in the olfactory system. This G protein is located in the cilia from olfactory neurons, where odorant signaling occurs. In situ hybridization experiments showed that RIC-8B, in adult mice, is expressed only in regions where Gαolf is expressed, such as the olfactory epithelium and the nucleus striatum in the central nervous system. In order to determine the function of RIC-8B in vivo, we decided to generate a knockout mouse strain for Ric-8B. We found that this strain is not viable due to the lethality of embryos in the early stages of development (around days E8.5 and E9.0). X-gal staining of embryos shows that RIC-8B is specifically expressed in regions that originate the nervous system, such as the ventral neural tube and also cephalic regions. Interestingly, we show that RIC-8B is restrictedly expressed in the floor plate of the neural tube, in a pattern that is very similar to the one shown by Sonic Hedgehog (SHH). The SHH protein plays a fundamental role in the organization of the nervous system, among other functions. Therefore, our results indicate that RIC-8B plays an essential role during the embryogenesis, and that this role can be related to the role played by SHH. Furthermore, because the SHH signaling pathway occurs in primary cilia in the target cells, our data raise the interesting possibility that the role played by RIC-8B is related to ciliary functions, both in adult mice (in this case, in olfactory cilia), and in the embryo (in this case, in primary cilia)
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Avaliação da ultraestrutura e do movimento ciliar em crianças com pneumopatias crônicas e de repetição se diagnóstico definido / Evaluation of the ultrastructure and of the movement of cilia in children with chronic and repetition pneumopathies without a defined diagnosis

Olm, Mary Anne Kowal 05 March 2010 (has links)
INTRODUÇÃO: A discinesia ciliar primária é uma doença genética que se caracteriza pela alteração da ultraestrutura e função do cílio móvel, com consequentes alterações do transporte mucociliar, causando infecções das vias aéreas superiores, inferiores e infertilidade. O diagnóstico, realizado por avaliação da ultraestrutura ou pesquisa de mutação genética, é feito mediante critérios de seleção de pacientes e testes de screening. Esta pesquisa avalia a ultraestrutura e frequência de batimento ciliar, propõe um modelo de investigação de discinesia ciliar primária, e caracteriza os pacientes diagnosticados. MÉTODO: Foi realizado um estudo transversal controlado entre janeiro de 2007 e julho de 2009, no Ambulatório de Pneumologia Pediátrica do Instituto da Criança. Foram selecionadas 28 crianças e adolescentes (6 meses a 19 anos, de ambos os sexos), de uma população de 75 crianças com pneumopatias crônicas e de repetição sem diagnóstico definido, que apresentavam ao menos um dos seguintes achados: bronquiectasia de causa desconhecida, doença de vias aéreas superiores com sintomatologia crônica, infecções pulmonares de repetição, dextrocardia e/ou situs inversus acompanhados de sintomas em vias aéreas superiores e/ou inferiores, e asma de difícil controle com sintomas em vias aéreas superiores e/ou inferiores. A presença de pneumopatias crônicas com diagnóstico definido foi utilizada como critério de exclusão por meio dos seguintes exames: dois testes do suor (exclusão de fibrose cística), tomografia computadorizada do tórax (suspeita de bronquiolite obliterante), dosagem de alfa-1 antitripsina (investigação de déficit de alfa-1 antitripsina), e exames de investigação das imunodeficiências mais frequentes (hemograma, dosagens de imunoglobulinas, contagem de linfócitos T e B, sorologias para avaliação da produção ativa de anticorpos, PPD e HIV). Foi desenvolvido um sistema medição da frequência de batimento ciliar, baseado em análise espectral. Dez adultos voluntários saudáveis (maiores ou iguais a 17 anos, de ambos os sexos), sem doença infecciosa respiratória aguda no último mês e não fumantes, formaram o grupo controle para a frequência do batimento ciliar. Foi realizada a coleta ciliar por escovado nasal. A amostra foi dividida para a avaliação da ultraestrutura e verificação da frequência do batimento ciliar. Os pacientes diagnosticados foram avaliados com tomografia de tórax e seios da face (esta última nos maiores de cinco anos), provas de função pulmonar e avaliação otorrinolaringológica. RESULTADOS: Os 28 pacientes selecionados foram submetidos ao escovado nasal. Para 24 dos 28 pacientes foi possível produzir filmes passíveis de avaliação. O grupo com ultraestrutura alterada (diagnóstico de discinesia ciliar primária) mostrou diferença das médias da frequência de batimento ciliar em relação ao grupo com ultraestrutura normal (p<0,001) e em relação ao grupo controle (p<0,001). O grupo com ultraestrutura normal e o grupo controle, quando comparados entre si, também apresentaram diferenças (p<0,005). Foram diagnosticados 12 pacientes com discinesia ciliar primária: dois com ausência de braços externos de dineína, um com encurtamento dos braços externos de dineína, cinco com defeitos nas espículas radiadas e braços internos de dineína, três com defeitos de ausência do par central com transposição, e um com ultraestrutura normal (Kartagener). Os pacientes, sete homens e cinco mulheres, com predomíno da etnia branca (11 pacientes - 91,6%), eram na maior parte fruto de pais consanguíneos (8 pacientes - 66,6%). Sete dos 12 pacientes (58,3%) apresentaram situs inversus. Sete dos dez pacientes que realizaram as provas de função pulmonar (70%) apresentaram distúrbio ventilatório obstrutivo. Achados radiológicos: Dez pacientes (83,3%) apresentaram algum grau de colapso ou consolidação, 11 (91,6%) apresentaram bronquiectasias, e todos (100%) algum grau de espessamento brônquico. A avaliação otorrinolaringológica apontou alterações em seis pacientes (50%): pólipos em três pacientes (25%), otite secretora em dois (16,6%), desvio de septo em dois (16,6%), e esclerose do tímpano em um (8,3%). CONCLUSÃO: Foi padronizada a técnica do escovado nasal para a coleta de material ciliar. Foram estabelecidos critérios de uniformidade quanto à análise dos defeitos ultraestruturais ciliares, baseados em experiência internacional. Foi desenvolvido um novo método de medição da frequência de batimento ciliar baseado em metodologia de análise espectral e vídeos de alta velocidade. Os pacientes diagnosticados com discinesia ciliar primária foram caracterizados, sendo a maioria: da etnia branca, de pais consanguíneos, com predomínio dos defeitos de espículas radiadas e braços internos de dineína, situs inversus, e distúrbio ventilatório obstrutivo. Problemas otorrinolaringológicos foram encontrados em metade dos pacientes. / INTRODUCTION: Primary ciliary dyskinesia (PCD) is a genetic disorder of the ultrastructure and function of mobile cilia, with consequent impairment of mucociliary clearance, leading to upper and lower airways respiratory infection and infertility. The diagnosis, based on ultrastructure evaluation or genetic scan, is performed according to patient selection and screening tests. This research evaluates cilia ultrastructure and beat frequency, proposes a model for investigating primary ciliary dyskinesia, and characterizes the patients diagnosed.METHOD: A controlled and observational study was carried out at the Pediatric Pulmonology Ambulatory of the Instituto da Criança between January 2007 and July 2009. Twenty eight children and teenagers (ages between 6 months and 19 years) were selected, from a population of 75 patients with chronic and repetition pneumopathies without a defined diagnosis, which met at least one of the following inclusion criteria: bronchiectasis of unknown cause, upper respiratory disease with chronic symptoms, repetition pulmonary infections, dextrocardia and/or situs inversus with symptoms in upper and/or lower respiratory airways, and asthma of difficult control with symptoms in upper and/or lower respiratory airways. The presence of cronic pneumopathies with a defined diagnosis was used as exclusion criterion, based on the following exams: two sweat tests (cystic fibrosis exclusion), lung CT scan (bronchiolitis obliterans exclusion), seric levels of alpha-1 anti-trypsin (alpha-1 anti-trypsin deficit evaluation), and evaluation of more frequent immunodeficiency disorders (white blood cells, T and B lymphocytes levels, and sorology tests for humoral immunity, PPD and HIV). A cilia beat frequency measurement system was developed, based on spectral analysis. Ten healthy adult volunteers (ages greater than or equal to 17 years old, of both sexes), without an acute respiratory disease in the last month, and non-smoking, formed the control group for the cilia beat frequency measurements. Cilia samples were collected employing nasal brushing. The sample was divided for cilia ultrastructure evaluation and for cilia beat frequency measurement. Diagnosed patients were sent to lung and sinuses CT scan (> 5 years), pulmonary function tests and ear, nose and throat evaluation. RESULTS: For the 28 patients selected a nasal brushing was performed. For 24 of the 28 patients it was possible to make films suitable for evaluation. The average cilia beat frequency of the defective ultrastructure group (primary ciliary dyskinesia group) was different from the average frequency of the normal ultrastructure group (p<0.001) and from the control group (p<0.001). The average cilia beat frequency of the normal ultrastructure group was different from the average frequency of the control group (p<0.005). Twelve patients were diagnosed with primary ciliary dyskinesia: two with absence of outer dynein arm, one with a shortened outer dynein arm, five with radial spoke and inner dynein arm, three with absence of central par and transposition, and one with a normal ultrastructure (Kartagener). The patients, seven men and five women, were mostly white (11 patients 91.6%) and had parents who were relatives (eight patients 66.6%). Seven of the twelve patients (58.3%) had Situs inversus. Seven of the ten patients (70%) for whom pulmonary function tests were performed presented a ventilatory obstructive pattern. Radiological findings: Ten patients (83.3%) presented signs of consolidation or collapse, eleven patients (91.6%) had bronchiectasis, and 12 (100%) presented some degree of bronchial wall thickening. Otorhinolaryngologycal evaluation indicated impairments in 6 patients (50%): polips in three patients (25%), effusion otitis in two (16.6%), sept problems in two (16.6%) and timpanus sclerosis in one (8,3%). CONCLUSION: The nasal brushing technique was standardized for the collection of cilia. Uniform criteria for the analysis of ultrastructural cilia defects were established, based on international experience. A new method of cilia beat frequency measurement was developed, based on spectral analysis and high speed video images. Patients diagnosed with primary ciliary dyskinesia were characterized. The majority was white, had parents who were also relatives, had a prevalence of radial spoke and inner dynein arm defects, situs inversus, and ventilatory obstructive pattern. Otorhinolaryngologycal problems were found in 50% of the patients.
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Efeito das diferentes frações do material particulado proveniente da emissão de motores movidos a óleo diesel sobre o epitélio do palato da rã / Effects of different fractions from diesel engines exhaust particles on the frog ciliated epithelium

Trindade, Sergio Henrique Kiemle 30 March 2011 (has links)
INTRODUÇÃO: A poluição atmosférica é reconhecida como fonte de possíveis agravos à saúde. Estudos tem demonstrado uma clara associação entre aumento da concentração dos poluentes atmosféricos, especialmente o material particulado proveniente de resíduos de exaustão de motores movidos a diesel, com morbidade e mortalidade respiratória e cardíaca na população geral. Até o presente momento, sabe-se que o material particulado possui ações deletérias sobre as vias aéreas superiores e inferiores; contudo, ainda não são completamente conhecidas as ações tóxicas isoladas das diferentes frações do material particulado do diesel. OBJETIVO: O presente estudo teve por finalidade avaliar o grau de toxicidade das frações orgânicas de baixa, média e alta polaridade e da fração inorgânica do material particulado proveniente da emissão de motores movidos a óleo diesel sobre o epitélio mucociliar. MÉTODOS: Para tanto, utilizou-se como modelo experimental a preparação do palato da rã, que possui um epitélio similar ao das vias aéreas de mamíferos. O estudo foi dividido em duas etapas: Fase I - Quarenta palatos foram utilizados com intuito de titular a concentração de material particulado bruto capaz de promover um aumento significante no tempo relativo de transporte mucociliar. Fase II - Uma vez definida a concentração efetiva, cinqüenta palatos foram expostos aos seguintes tratamentos: material particulado bruto do diesel (sem nenhum tipo de tratamento), material particulado do diesel tratado com hexano (solvente que reduz a quantidade dos compostos orgânicos de baixa polaridade), material particulado do diesel tratado metanol (solvente que reduz a quantidade de compostos orgânicos de polaridade intermediária, gerando aumento relativo da concentração de orgânicos de baixa e alta polaridade) e material particulado do diesel tratado ácido nítrico (solvente que reduz a concentração de compostos inorgânicos, gerando aumento relativo da fração orgânica como um todo). Para fins de controle utilizou-se um grupo com ringer-rã. As variáveis analisadas foram: tempo relativo de transporte mucociliar, freqüência de batimento ciliar e análise histológica, na qual foram avaliados o volume proporcional de muco ácido, muco neutro, muco misto, de cílios, vacúolos, dos núcleos celulares e interstício e espessura epitelial. RESULTADOS: Fase I: A concentração de material particulado bruto capaz de promover um aumento significativo no tempo relativo de transporte mucociliar, e também do volume proporcional de muco ácido (p<0,05), correspondeu a 12mg/L. Fase II: Observou-se: a) aumento significativo no tempo relativo de transporte mucociliar e redução significativa do volume proporcional de muco neutro no grupo ácido nítrico; b) maior volume proporcional de muco ácido no grupo metanol (p<0,05); c) ausência de diferenças entre o grupo controle e o grupo hexano, tanto na análise histológica quanto no tempo relativo de transporte mucociliar. CONCLUSÃO: Os dados obtidos sugerem que os compostos orgânicos de baixa polaridade do material particulado proveniente da emissão de motores movidos a óleo diesel desempenham um importante papel na toxicidade aguda ao epitélio ciliado / INTRODUCTION: Air pollution is recognized as a source of potential health problems. Studies have shown a clear association between increasing concentration of atmospheric pollutants, especially particulate matter from waste exhaust of diesel engines, and respiratory and cardiac morbidity and mortality in the general population. To date, it is well known that particulate matter from diesel exhaust has deleterious actions on upper and lower airways; however, the isolated toxic actions of different fractions of the particulate matter are not yet fully understood. OBJECTIVE: This study aimed at evaluating the degree of toxicity of the organic fractions of low, intermediate and high polarity and of the inorganic fraction of particulate matter from diesel engines on the ciliated epithelium. METHODS: The experimental model used was the frog palate preparation, which has a similar epithelium to that found in mammalian airways. The study was divided into two phases: Phase I - Forty palates were used in order to titrate the concentration of intact diesel particulate matter able to elicit a significant increase in the relative time of mucociliary transport. Phase II Once defined the optimal concentration, fifty palates were exposed to dilutions with the following treatments: intact diesel particulate material (without any treatment), particulate matter from diesel exhaust treated with hexane (solvent which reduces the amount of organic compounds of low polarity), particulate matter from diesel exhaust treated with methanol (solvent which reduces the amount of organic compounds with intermediate polarity, generating a relative increase in concentration of organic compounds with low and high polarity) and particulate matter from diesel exhaust treated with nitric acid (solvent which removes inorganic compounds, eliciting a relative increase of the organic fraction as a whole). For control purposes, a group of frog-ringer was used. The following variables were analyzed: relative time of mucociliary transport, ciliary beating frequency and histological analysis, which evaluated proportional volume of acid mucus, neutral and mixed mucus, cilia, vacuoles, cell nuclei and interstice, and epithelial thickness. RESULTS: Phase I: The effective concentration of intact diesel particulate matter in eliciting a significant increase in the relative time of mucociliary transport, and a proportional increase of acid mucus volume (p<0.05), corresponded to 12mg/L. Phase II: a) The nitric acid treatment caused a significant increase in the relative time of mucociliary transport, and decrease in the proportional volume of neutral mucus. b) A higher proportional volume of acid mucus was found in the methanol group (p<0.05). c) There were no differences between control and hexane groups regarding histological findings and relative time of mucociliary transport. CONCLUSION: The results suggest that organic compounds of low polarity from diesel engines exhaust particles play an important role in the acute toxicity on the ciliated epithelium
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Avaliação da ultraestrutura e do movimento ciliar em crianças com pneumopatias crônicas e de repetição se diagnóstico definido / Evaluation of the ultrastructure and of the movement of cilia in children with chronic and repetition pneumopathies without a defined diagnosis

Mary Anne Kowal Olm 05 March 2010 (has links)
INTRODUÇÃO: A discinesia ciliar primária é uma doença genética que se caracteriza pela alteração da ultraestrutura e função do cílio móvel, com consequentes alterações do transporte mucociliar, causando infecções das vias aéreas superiores, inferiores e infertilidade. O diagnóstico, realizado por avaliação da ultraestrutura ou pesquisa de mutação genética, é feito mediante critérios de seleção de pacientes e testes de screening. Esta pesquisa avalia a ultraestrutura e frequência de batimento ciliar, propõe um modelo de investigação de discinesia ciliar primária, e caracteriza os pacientes diagnosticados. MÉTODO: Foi realizado um estudo transversal controlado entre janeiro de 2007 e julho de 2009, no Ambulatório de Pneumologia Pediátrica do Instituto da Criança. Foram selecionadas 28 crianças e adolescentes (6 meses a 19 anos, de ambos os sexos), de uma população de 75 crianças com pneumopatias crônicas e de repetição sem diagnóstico definido, que apresentavam ao menos um dos seguintes achados: bronquiectasia de causa desconhecida, doença de vias aéreas superiores com sintomatologia crônica, infecções pulmonares de repetição, dextrocardia e/ou situs inversus acompanhados de sintomas em vias aéreas superiores e/ou inferiores, e asma de difícil controle com sintomas em vias aéreas superiores e/ou inferiores. A presença de pneumopatias crônicas com diagnóstico definido foi utilizada como critério de exclusão por meio dos seguintes exames: dois testes do suor (exclusão de fibrose cística), tomografia computadorizada do tórax (suspeita de bronquiolite obliterante), dosagem de alfa-1 antitripsina (investigação de déficit de alfa-1 antitripsina), e exames de investigação das imunodeficiências mais frequentes (hemograma, dosagens de imunoglobulinas, contagem de linfócitos T e B, sorologias para avaliação da produção ativa de anticorpos, PPD e HIV). Foi desenvolvido um sistema medição da frequência de batimento ciliar, baseado em análise espectral. Dez adultos voluntários saudáveis (maiores ou iguais a 17 anos, de ambos os sexos), sem doença infecciosa respiratória aguda no último mês e não fumantes, formaram o grupo controle para a frequência do batimento ciliar. Foi realizada a coleta ciliar por escovado nasal. A amostra foi dividida para a avaliação da ultraestrutura e verificação da frequência do batimento ciliar. Os pacientes diagnosticados foram avaliados com tomografia de tórax e seios da face (esta última nos maiores de cinco anos), provas de função pulmonar e avaliação otorrinolaringológica. RESULTADOS: Os 28 pacientes selecionados foram submetidos ao escovado nasal. Para 24 dos 28 pacientes foi possível produzir filmes passíveis de avaliação. O grupo com ultraestrutura alterada (diagnóstico de discinesia ciliar primária) mostrou diferença das médias da frequência de batimento ciliar em relação ao grupo com ultraestrutura normal (p<0,001) e em relação ao grupo controle (p<0,001). O grupo com ultraestrutura normal e o grupo controle, quando comparados entre si, também apresentaram diferenças (p<0,005). Foram diagnosticados 12 pacientes com discinesia ciliar primária: dois com ausência de braços externos de dineína, um com encurtamento dos braços externos de dineína, cinco com defeitos nas espículas radiadas e braços internos de dineína, três com defeitos de ausência do par central com transposição, e um com ultraestrutura normal (Kartagener). Os pacientes, sete homens e cinco mulheres, com predomíno da etnia branca (11 pacientes - 91,6%), eram na maior parte fruto de pais consanguíneos (8 pacientes - 66,6%). Sete dos 12 pacientes (58,3%) apresentaram situs inversus. Sete dos dez pacientes que realizaram as provas de função pulmonar (70%) apresentaram distúrbio ventilatório obstrutivo. Achados radiológicos: Dez pacientes (83,3%) apresentaram algum grau de colapso ou consolidação, 11 (91,6%) apresentaram bronquiectasias, e todos (100%) algum grau de espessamento brônquico. A avaliação otorrinolaringológica apontou alterações em seis pacientes (50%): pólipos em três pacientes (25%), otite secretora em dois (16,6%), desvio de septo em dois (16,6%), e esclerose do tímpano em um (8,3%). CONCLUSÃO: Foi padronizada a técnica do escovado nasal para a coleta de material ciliar. Foram estabelecidos critérios de uniformidade quanto à análise dos defeitos ultraestruturais ciliares, baseados em experiência internacional. Foi desenvolvido um novo método de medição da frequência de batimento ciliar baseado em metodologia de análise espectral e vídeos de alta velocidade. Os pacientes diagnosticados com discinesia ciliar primária foram caracterizados, sendo a maioria: da etnia branca, de pais consanguíneos, com predomínio dos defeitos de espículas radiadas e braços internos de dineína, situs inversus, e distúrbio ventilatório obstrutivo. Problemas otorrinolaringológicos foram encontrados em metade dos pacientes. / INTRODUCTION: Primary ciliary dyskinesia (PCD) is a genetic disorder of the ultrastructure and function of mobile cilia, with consequent impairment of mucociliary clearance, leading to upper and lower airways respiratory infection and infertility. The diagnosis, based on ultrastructure evaluation or genetic scan, is performed according to patient selection and screening tests. This research evaluates cilia ultrastructure and beat frequency, proposes a model for investigating primary ciliary dyskinesia, and characterizes the patients diagnosed.METHOD: A controlled and observational study was carried out at the Pediatric Pulmonology Ambulatory of the Instituto da Criança between January 2007 and July 2009. Twenty eight children and teenagers (ages between 6 months and 19 years) were selected, from a population of 75 patients with chronic and repetition pneumopathies without a defined diagnosis, which met at least one of the following inclusion criteria: bronchiectasis of unknown cause, upper respiratory disease with chronic symptoms, repetition pulmonary infections, dextrocardia and/or situs inversus with symptoms in upper and/or lower respiratory airways, and asthma of difficult control with symptoms in upper and/or lower respiratory airways. The presence of cronic pneumopathies with a defined diagnosis was used as exclusion criterion, based on the following exams: two sweat tests (cystic fibrosis exclusion), lung CT scan (bronchiolitis obliterans exclusion), seric levels of alpha-1 anti-trypsin (alpha-1 anti-trypsin deficit evaluation), and evaluation of more frequent immunodeficiency disorders (white blood cells, T and B lymphocytes levels, and sorology tests for humoral immunity, PPD and HIV). A cilia beat frequency measurement system was developed, based on spectral analysis. Ten healthy adult volunteers (ages greater than or equal to 17 years old, of both sexes), without an acute respiratory disease in the last month, and non-smoking, formed the control group for the cilia beat frequency measurements. Cilia samples were collected employing nasal brushing. The sample was divided for cilia ultrastructure evaluation and for cilia beat frequency measurement. Diagnosed patients were sent to lung and sinuses CT scan (> 5 years), pulmonary function tests and ear, nose and throat evaluation. RESULTS: For the 28 patients selected a nasal brushing was performed. For 24 of the 28 patients it was possible to make films suitable for evaluation. The average cilia beat frequency of the defective ultrastructure group (primary ciliary dyskinesia group) was different from the average frequency of the normal ultrastructure group (p<0.001) and from the control group (p<0.001). The average cilia beat frequency of the normal ultrastructure group was different from the average frequency of the control group (p<0.005). Twelve patients were diagnosed with primary ciliary dyskinesia: two with absence of outer dynein arm, one with a shortened outer dynein arm, five with radial spoke and inner dynein arm, three with absence of central par and transposition, and one with a normal ultrastructure (Kartagener). The patients, seven men and five women, were mostly white (11 patients 91.6%) and had parents who were relatives (eight patients 66.6%). Seven of the twelve patients (58.3%) had Situs inversus. Seven of the ten patients (70%) for whom pulmonary function tests were performed presented a ventilatory obstructive pattern. Radiological findings: Ten patients (83.3%) presented signs of consolidation or collapse, eleven patients (91.6%) had bronchiectasis, and 12 (100%) presented some degree of bronchial wall thickening. Otorhinolaryngologycal evaluation indicated impairments in 6 patients (50%): polips in three patients (25%), effusion otitis in two (16.6%), sept problems in two (16.6%) and timpanus sclerosis in one (8,3%). CONCLUSION: The nasal brushing technique was standardized for the collection of cilia. Uniform criteria for the analysis of ultrastructural cilia defects were established, based on international experience. A new method of cilia beat frequency measurement was developed, based on spectral analysis and high speed video images. Patients diagnosed with primary ciliary dyskinesia were characterized. The majority was white, had parents who were also relatives, had a prevalence of radial spoke and inner dynein arm defects, situs inversus, and ventilatory obstructive pattern. Otorhinolaryngologycal problems were found in 50% of the patients.
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RIC-8B, um fator trocador de nucleotídeo guanina (GEF), é essencial para a embriogênese / RIC-8B, a guanine nucleotide exchange factor (GEF), is essential for embryogenesis

Luciana Mayumi Gutiyama 30 September 2013 (has links)
RIC-8B é uma proteína que apresenta, in vitro, atividade de fator de troca de nucleotídeos guanina (GEF). No entanto, seu papel in vivo não é conhecido. Dados anteriores do nosso laboratório demonstraram que essa proteína interage especificamente com G&#945;olf, que é uma proteína G exclusiva do sistema olfatório, presente nos cílios dos neurônios olfatórios, onde ocorre a transdução de sinal ativada pelos odorantes. No camundongo adulto verificou-se, por meio de ensaios de hibridização in situ, que RIC-8B está presente somente em regiões de expressão de G&#945;olf: no epitélio olfatório maduro e no núcleo estriado do sistema nervoso central. Para avaliar a função fisiológica de RIC-8B in vivo, resolvemos gerar uma linhagem de camundongo knockout para Ric-8B. Verificamos que a linhagem é inviável devido à letalidade dos embriões já em fases precoces do desenvolvimento (por volta de E8,5 e E9,0). A coloração de embriões com X-gal mostra que RIC-8B é especificamente expressa em regiões que darão origem ao sistema nervoso, como na região ventral do tubo neural, e em regiões cefálicas. Interessantemente, mostramos que RIC-8B é expressa na placa do assoalho do tubo neural, de uma maneira muito semelhante ao padrão de expressão de Sonic Hedgehog (SHH), que apresenta um papel fundamental para a organização do sistema nervoso, entre outras funções. Nossos resultados indicam, portanto, que RIC-8B desempenha um papel crucial durante a embriogênese, e que este papel pode estar relacionado com o papel exercido por SHH. Além disso, como a via de sinalização de SHH ocorre em cílios primários nas células alvo, nossos dados levantam a interessante possibilidade de que RIC-8B apresenta funções relacionadas a cílios, tanto no camundongo adulto (neste caso nos cílios dos neurônios olfatórios) como no embrião (neste caso nos cílios primários). / RIC-8B is a protein that, in vitro, acts as a guanine nucleotide exchange factor (GEF). However, its role in vivo remains unknown. Previous data from our laboratory demonstrated that this protein is able to interact specifically with G&#945;olf, a G protein found only in the olfactory system. This G protein is located in the cilia from olfactory neurons, where odorant signaling occurs. In situ hybridization experiments showed that RIC-8B, in adult mice, is expressed only in regions where G&#945;olf is expressed, such as the olfactory epithelium and the nucleus striatum in the central nervous system. In order to determine the function of RIC-8B in vivo, we decided to generate a knockout mouse strain for Ric-8B. We found that this strain is not viable due to the lethality of embryos in the early stages of development (around days E8.5 and E9.0). X-gal staining of embryos shows that RIC-8B is specifically expressed in regions that originate the nervous system, such as the ventral neural tube and also cephalic regions. Interestingly, we show that RIC-8B is restrictedly expressed in the floor plate of the neural tube, in a pattern that is very similar to the one shown by Sonic Hedgehog (SHH). The SHH protein plays a fundamental role in the organization of the nervous system, among other functions. Therefore, our results indicate that RIC-8B plays an essential role during the embryogenesis, and that this role can be related to the role played by SHH. Furthermore, because the SHH signaling pathway occurs in primary cilia in the target cells, our data raise the interesting possibility that the role played by RIC-8B is related to ciliary functions, both in adult mice (in this case, in olfactory cilia), and in the embryo (in this case, in primary cilia)
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Efeito das diferentes frações do material particulado proveniente da emissão de motores movidos a óleo diesel sobre o epitélio do palato da rã / Effects of different fractions from diesel engines exhaust particles on the frog ciliated epithelium

Sergio Henrique Kiemle Trindade 30 March 2011 (has links)
INTRODUÇÃO: A poluição atmosférica é reconhecida como fonte de possíveis agravos à saúde. Estudos tem demonstrado uma clara associação entre aumento da concentração dos poluentes atmosféricos, especialmente o material particulado proveniente de resíduos de exaustão de motores movidos a diesel, com morbidade e mortalidade respiratória e cardíaca na população geral. Até o presente momento, sabe-se que o material particulado possui ações deletérias sobre as vias aéreas superiores e inferiores; contudo, ainda não são completamente conhecidas as ações tóxicas isoladas das diferentes frações do material particulado do diesel. OBJETIVO: O presente estudo teve por finalidade avaliar o grau de toxicidade das frações orgânicas de baixa, média e alta polaridade e da fração inorgânica do material particulado proveniente da emissão de motores movidos a óleo diesel sobre o epitélio mucociliar. MÉTODOS: Para tanto, utilizou-se como modelo experimental a preparação do palato da rã, que possui um epitélio similar ao das vias aéreas de mamíferos. O estudo foi dividido em duas etapas: Fase I - Quarenta palatos foram utilizados com intuito de titular a concentração de material particulado bruto capaz de promover um aumento significante no tempo relativo de transporte mucociliar. Fase II - Uma vez definida a concentração efetiva, cinqüenta palatos foram expostos aos seguintes tratamentos: material particulado bruto do diesel (sem nenhum tipo de tratamento), material particulado do diesel tratado com hexano (solvente que reduz a quantidade dos compostos orgânicos de baixa polaridade), material particulado do diesel tratado metanol (solvente que reduz a quantidade de compostos orgânicos de polaridade intermediária, gerando aumento relativo da concentração de orgânicos de baixa e alta polaridade) e material particulado do diesel tratado ácido nítrico (solvente que reduz a concentração de compostos inorgânicos, gerando aumento relativo da fração orgânica como um todo). Para fins de controle utilizou-se um grupo com ringer-rã. As variáveis analisadas foram: tempo relativo de transporte mucociliar, freqüência de batimento ciliar e análise histológica, na qual foram avaliados o volume proporcional de muco ácido, muco neutro, muco misto, de cílios, vacúolos, dos núcleos celulares e interstício e espessura epitelial. RESULTADOS: Fase I: A concentração de material particulado bruto capaz de promover um aumento significativo no tempo relativo de transporte mucociliar, e também do volume proporcional de muco ácido (p<0,05), correspondeu a 12mg/L. Fase II: Observou-se: a) aumento significativo no tempo relativo de transporte mucociliar e redução significativa do volume proporcional de muco neutro no grupo ácido nítrico; b) maior volume proporcional de muco ácido no grupo metanol (p<0,05); c) ausência de diferenças entre o grupo controle e o grupo hexano, tanto na análise histológica quanto no tempo relativo de transporte mucociliar. CONCLUSÃO: Os dados obtidos sugerem que os compostos orgânicos de baixa polaridade do material particulado proveniente da emissão de motores movidos a óleo diesel desempenham um importante papel na toxicidade aguda ao epitélio ciliado / INTRODUCTION: Air pollution is recognized as a source of potential health problems. Studies have shown a clear association between increasing concentration of atmospheric pollutants, especially particulate matter from waste exhaust of diesel engines, and respiratory and cardiac morbidity and mortality in the general population. To date, it is well known that particulate matter from diesel exhaust has deleterious actions on upper and lower airways; however, the isolated toxic actions of different fractions of the particulate matter are not yet fully understood. OBJECTIVE: This study aimed at evaluating the degree of toxicity of the organic fractions of low, intermediate and high polarity and of the inorganic fraction of particulate matter from diesel engines on the ciliated epithelium. METHODS: The experimental model used was the frog palate preparation, which has a similar epithelium to that found in mammalian airways. The study was divided into two phases: Phase I - Forty palates were used in order to titrate the concentration of intact diesel particulate matter able to elicit a significant increase in the relative time of mucociliary transport. Phase II Once defined the optimal concentration, fifty palates were exposed to dilutions with the following treatments: intact diesel particulate material (without any treatment), particulate matter from diesel exhaust treated with hexane (solvent which reduces the amount of organic compounds of low polarity), particulate matter from diesel exhaust treated with methanol (solvent which reduces the amount of organic compounds with intermediate polarity, generating a relative increase in concentration of organic compounds with low and high polarity) and particulate matter from diesel exhaust treated with nitric acid (solvent which removes inorganic compounds, eliciting a relative increase of the organic fraction as a whole). For control purposes, a group of frog-ringer was used. The following variables were analyzed: relative time of mucociliary transport, ciliary beating frequency and histological analysis, which evaluated proportional volume of acid mucus, neutral and mixed mucus, cilia, vacuoles, cell nuclei and interstice, and epithelial thickness. RESULTS: Phase I: The effective concentration of intact diesel particulate matter in eliciting a significant increase in the relative time of mucociliary transport, and a proportional increase of acid mucus volume (p<0.05), corresponded to 12mg/L. Phase II: a) The nitric acid treatment caused a significant increase in the relative time of mucociliary transport, and decrease in the proportional volume of neutral mucus. b) A higher proportional volume of acid mucus was found in the methanol group (p<0.05). c) There were no differences between control and hexane groups regarding histological findings and relative time of mucociliary transport. CONCLUSION: The results suggest that organic compounds of low polarity from diesel engines exhaust particles play an important role in the acute toxicity on the ciliated epithelium
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Efeitos da lesão pulmonar induzida pela ventilação mecânica sobre o epitélio das vias aéreas de condução e sua influência no aparelho mucociliar: modelo experimental em coelhos / Effects of ventilator-induced lung injury on airway-ciliated epithelia and the influence on mucociliary transport system

Piccin, Vivien Schmeling 30 March 2010 (has links)
A ventilação mecânica (VM) pode ser causa de lesão pulmonar sendo este fato reconhecido na literatura como Lesão Pulmonar Induzida pela Ventilação Mecânica (LPIV), onde alterações tanto fisiológicas quanto morfológicas são evidenciadas no pulmão. O objetivo desse trabalho foi avaliar a repercussão das forças envolvidas na ventilação mecânica através de diferentes mecanismos de LPIV sobre o sistema mucociliar pela análise funcional e histopatológica desse aparelho. Em um estudo controlado e randomizado vinte e sete coelhos machos da raça Nova Zelândia foram separados em quatro grupos. Nos primeiros trinta minutos foram submetidos à VM com volume corrente de 8 ml/kg peso, fluxo de 3 L/minuto, e pressão positiva expiratória final (PEEP) de 5 cm H2O e FIO2 de 0,4, sendo que o grupo Sham (n=6) foi ventilado por apenas 10 minutos. Os grupos Baixo Volume/BV (n=6; Vt 8, Ppico 17, Pmédia 9, PEEP 5, Fluxo 3), Alto Volume/AV (n=7; Vt 16, Ppico 27, Pmédia 12, PEEP 5, Fluxo 5) e Alta Pressão/AP (n=8; Vt 8, Ppico 30, Pmédia 20, PEEP 12, Fluxo 9) foram ventilados por mais 3 horas. A mecânica do sistema respiratório foi registrada pelo sistema Labview®. Foram acompanhados os valores de gasometria e sinais vitais. Amostras de tecido pulmonar foram coradas com H&E para análise de infiltrado inflamatório. Analisou-se a frequência de batimento ciliar (FBC), transporte mucociliar na traqueia (TMCT), transportabilidade em palato de rã (MCT) e ângulo de contato (AC). Amostras de pulmão e traquéia foram coradas pela técnica PAS/AB para avaliação do muco. Observamos diminuição da complacência do sistema respiratório (p<0,05) no grupo AP em comparação com os demais grupos ventilados. Os grupos BV, AV e AP apresentaram um aumento de células polimorfonucleares por área de parênquima pulmonar (p<0,001) em comparação com o grupo Sham. Não foram observadas diferenças quanto ao TMCT e AC nos grupos ventilados. A transportabilidade em palato diminuiu no grupo BV (p=0,007) ao final do protocolo de ventilação (1,42 com variações de 2,11-0,99 para 0,95 com variações de 1,15-0,92). A FBC diminuiu (p=0,047) no grupo AP quando comparamos os valores iniciais (13,51 variação de 14,49-11,62) e finais ao protocolo de VM (11,69 variação de 14,18-10,12). Respostas fisiológicas e microscopia eletrônica (ME) da traquéia corroboram a disfunção da FBC no grupo AP. Na traquéia os grupos ventilados apresentaram uma diminuição da quantidade de muco total (BV 2.018, AV 3.219 e AP 2.883) e de muco ácido (BV 672, AV 240 e AP 480) por m2 de tecido pulmonar por campo estudado (p<0.05) quando comparados com o grupo Sham (4.660 m2 de muco total e 1.873 m2 de muco ácido). Em bronquíolos distais a quantidade de muco total diminuiu nos grupos BV e AP (p<0.05) quando comparados aos grupos Sham e AV. O mesmo fenômeno foi observado com relação ao muco neutro. Concluímos que as forças geradas pela ventilação mecânica têm impacto direto sobre o aparelho mucociliar, alterando suas propriedades funcionais e sua morfologia. Aparentemente a VM acarreta desequilíbrio na produção de muco, sendo essa alteração mais visível quando utilizado um alto volume corrente e uma maior pressão média pulmonar (associada a um fluxo de ar aumentado). O aumento da pressão média com alto fluxo dos gases ventilados também ocasiona maior sofrimento celular do aparelho mucociliar, disfunção da frequência de batimento ciliar e provável perda ciliar. Tais alterações se devem provavelmente ao efeito das forças físicas geradas pela VM associadas a prováveis oscilações na resposta inflamatória e no fluxo sanguíneo local. / Mechanical ventilation (MV) can result in a medical complication named Ventilator-Induced Lung Injury (VILI), where physiologic and morphologic alterations in the lungs have been reported. In this study, we have hypothesized that MV-induced injury can have a major impact on the mucociliary system. In a randomized controlled trial twenty-seven male New Zealand rabbits were separated into four groups. During the first thirty minutes all rabbits were subjected to MV with tidal volume of 8 ml/kg of body weight, 3 L/minute of flow, positive end expiratory pressure (PEEP) of 5 cm H2O and FIO2 of 0.4. After that the study animals were divided into 4 groups: Sham (n=6) was ventilated for ten minutes, Lower Volume/LV (n=6; Vt 8, P peak 17, P mean 9, PEEP 5, Flow 3), High Volume/HV (n=7; Vt 16, P peak 27, P mean 12, PEEP 5, Flow 5) and High Pressure/HP (n=8; Vt 8, P peak 30, P mean 20, PEEP 12, Flow 9) and ventilated for 3 hours more. Respiratory system mechanics was recorded using Labview®. Blood gasometry and vital signals were monitored. Lung tissue sections were stained by H&E to analyze inflammation. We also studied the ciliary beating frequency (CBF), tracheal mucociliary transport (TMCT) in situ and in vitro, mucus contact angle (CA) and respiratory mucus viscosity. To quantify mucosubstances, tracheal samples were stained with PAS/AB. As a result we have that the respiratory system compliance decreased (p<0.05) in the HP group compared to other ventilated groups. All ventilated groups showed an increase in polymorphonuclear cells quantity per area of lung parenchyma (p<0.001) compared to the Sham group. There were no differences in TMCT and CA among ventilated groups, when initial and final measurements were compared. MCT significantly decreased in the LV group (p=0.007) after the protocol (1.42 range of 2.11-0.99 to 0.95 range of 1.15-0.92). The CBF significantly decreased (p=0.047) in the HP group when the initial (13.51 range of 14.49-11.62) and final (11.69 range of 14.18-10.12) measurements were compared. Physiological data and tracheal electronic microscopy confirm the CBF dysfunction observed in the AP group. In the trachea all ventilated groups showed a significant decrease in total mucus (LV 2,018, HV 3,219 and HP 2,883) and acid mucus (LV 672, HV 240 and HP 480) per um2 of lung tissue (p<0.05) compared to the sham group (4,660 um2 of total mucus and 1,873 um2 of acid mucus). In distal bronchioles there was a significant decrease in total mucus in the LV and HP group (p<0.05) compared to Sham and HV groups. The same phenomenon was observed regarding neutral mucus. We concluded that mechanical forces involved in MV affect mucociliary function. Mechanical ventilation probably leads to the dysfunction on the mucus production. This phenomenon is better perceived when higher volume and higher mean pressure (associated with inspired gases high flow) are used. An increase of the mean pressure combined with inspired gases high flow also leads to mucociliary cells suffering, to ciliary beat frequency dysfunction and probably cilia loss. These alterations probably occur due to the effect of the physical forces generated by the mechanical ventilation in association with the oscillation of the inflammatory response and local blood flow.
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Efeitos da lesão pulmonar induzida pela ventilação mecânica sobre o epitélio das vias aéreas de condução e sua influência no aparelho mucociliar: modelo experimental em coelhos / Effects of ventilator-induced lung injury on airway-ciliated epithelia and the influence on mucociliary transport system

Vivien Schmeling Piccin 30 March 2010 (has links)
A ventilação mecânica (VM) pode ser causa de lesão pulmonar sendo este fato reconhecido na literatura como Lesão Pulmonar Induzida pela Ventilação Mecânica (LPIV), onde alterações tanto fisiológicas quanto morfológicas são evidenciadas no pulmão. O objetivo desse trabalho foi avaliar a repercussão das forças envolvidas na ventilação mecânica através de diferentes mecanismos de LPIV sobre o sistema mucociliar pela análise funcional e histopatológica desse aparelho. Em um estudo controlado e randomizado vinte e sete coelhos machos da raça Nova Zelândia foram separados em quatro grupos. Nos primeiros trinta minutos foram submetidos à VM com volume corrente de 8 ml/kg peso, fluxo de 3 L/minuto, e pressão positiva expiratória final (PEEP) de 5 cm H2O e FIO2 de 0,4, sendo que o grupo Sham (n=6) foi ventilado por apenas 10 minutos. Os grupos Baixo Volume/BV (n=6; Vt 8, Ppico 17, Pmédia 9, PEEP 5, Fluxo 3), Alto Volume/AV (n=7; Vt 16, Ppico 27, Pmédia 12, PEEP 5, Fluxo 5) e Alta Pressão/AP (n=8; Vt 8, Ppico 30, Pmédia 20, PEEP 12, Fluxo 9) foram ventilados por mais 3 horas. A mecânica do sistema respiratório foi registrada pelo sistema Labview®. Foram acompanhados os valores de gasometria e sinais vitais. Amostras de tecido pulmonar foram coradas com H&E para análise de infiltrado inflamatório. Analisou-se a frequência de batimento ciliar (FBC), transporte mucociliar na traqueia (TMCT), transportabilidade em palato de rã (MCT) e ângulo de contato (AC). Amostras de pulmão e traquéia foram coradas pela técnica PAS/AB para avaliação do muco. Observamos diminuição da complacência do sistema respiratório (p<0,05) no grupo AP em comparação com os demais grupos ventilados. Os grupos BV, AV e AP apresentaram um aumento de células polimorfonucleares por área de parênquima pulmonar (p<0,001) em comparação com o grupo Sham. Não foram observadas diferenças quanto ao TMCT e AC nos grupos ventilados. A transportabilidade em palato diminuiu no grupo BV (p=0,007) ao final do protocolo de ventilação (1,42 com variações de 2,11-0,99 para 0,95 com variações de 1,15-0,92). A FBC diminuiu (p=0,047) no grupo AP quando comparamos os valores iniciais (13,51 variação de 14,49-11,62) e finais ao protocolo de VM (11,69 variação de 14,18-10,12). Respostas fisiológicas e microscopia eletrônica (ME) da traquéia corroboram a disfunção da FBC no grupo AP. Na traquéia os grupos ventilados apresentaram uma diminuição da quantidade de muco total (BV 2.018, AV 3.219 e AP 2.883) e de muco ácido (BV 672, AV 240 e AP 480) por m2 de tecido pulmonar por campo estudado (p<0.05) quando comparados com o grupo Sham (4.660 m2 de muco total e 1.873 m2 de muco ácido). Em bronquíolos distais a quantidade de muco total diminuiu nos grupos BV e AP (p<0.05) quando comparados aos grupos Sham e AV. O mesmo fenômeno foi observado com relação ao muco neutro. Concluímos que as forças geradas pela ventilação mecânica têm impacto direto sobre o aparelho mucociliar, alterando suas propriedades funcionais e sua morfologia. Aparentemente a VM acarreta desequilíbrio na produção de muco, sendo essa alteração mais visível quando utilizado um alto volume corrente e uma maior pressão média pulmonar (associada a um fluxo de ar aumentado). O aumento da pressão média com alto fluxo dos gases ventilados também ocasiona maior sofrimento celular do aparelho mucociliar, disfunção da frequência de batimento ciliar e provável perda ciliar. Tais alterações se devem provavelmente ao efeito das forças físicas geradas pela VM associadas a prováveis oscilações na resposta inflamatória e no fluxo sanguíneo local. / Mechanical ventilation (MV) can result in a medical complication named Ventilator-Induced Lung Injury (VILI), where physiologic and morphologic alterations in the lungs have been reported. In this study, we have hypothesized that MV-induced injury can have a major impact on the mucociliary system. In a randomized controlled trial twenty-seven male New Zealand rabbits were separated into four groups. During the first thirty minutes all rabbits were subjected to MV with tidal volume of 8 ml/kg of body weight, 3 L/minute of flow, positive end expiratory pressure (PEEP) of 5 cm H2O and FIO2 of 0.4. After that the study animals were divided into 4 groups: Sham (n=6) was ventilated for ten minutes, Lower Volume/LV (n=6; Vt 8, P peak 17, P mean 9, PEEP 5, Flow 3), High Volume/HV (n=7; Vt 16, P peak 27, P mean 12, PEEP 5, Flow 5) and High Pressure/HP (n=8; Vt 8, P peak 30, P mean 20, PEEP 12, Flow 9) and ventilated for 3 hours more. Respiratory system mechanics was recorded using Labview®. Blood gasometry and vital signals were monitored. Lung tissue sections were stained by H&E to analyze inflammation. We also studied the ciliary beating frequency (CBF), tracheal mucociliary transport (TMCT) in situ and in vitro, mucus contact angle (CA) and respiratory mucus viscosity. To quantify mucosubstances, tracheal samples were stained with PAS/AB. As a result we have that the respiratory system compliance decreased (p<0.05) in the HP group compared to other ventilated groups. All ventilated groups showed an increase in polymorphonuclear cells quantity per area of lung parenchyma (p<0.001) compared to the Sham group. There were no differences in TMCT and CA among ventilated groups, when initial and final measurements were compared. MCT significantly decreased in the LV group (p=0.007) after the protocol (1.42 range of 2.11-0.99 to 0.95 range of 1.15-0.92). The CBF significantly decreased (p=0.047) in the HP group when the initial (13.51 range of 14.49-11.62) and final (11.69 range of 14.18-10.12) measurements were compared. Physiological data and tracheal electronic microscopy confirm the CBF dysfunction observed in the AP group. In the trachea all ventilated groups showed a significant decrease in total mucus (LV 2,018, HV 3,219 and HP 2,883) and acid mucus (LV 672, HV 240 and HP 480) per um2 of lung tissue (p<0.05) compared to the sham group (4,660 um2 of total mucus and 1,873 um2 of acid mucus). In distal bronchioles there was a significant decrease in total mucus in the LV and HP group (p<0.05) compared to Sham and HV groups. The same phenomenon was observed regarding neutral mucus. We concluded that mechanical forces involved in MV affect mucociliary function. Mechanical ventilation probably leads to the dysfunction on the mucus production. This phenomenon is better perceived when higher volume and higher mean pressure (associated with inspired gases high flow) are used. An increase of the mean pressure combined with inspired gases high flow also leads to mucociliary cells suffering, to ciliary beat frequency dysfunction and probably cilia loss. These alterations probably occur due to the effect of the physical forces generated by the mechanical ventilation in association with the oscillation of the inflammatory response and local blood flow.
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"Análise do padrão de expressão do produto de PKHD1, o gene mutado na doença renal policística autossômica recessiva" / Analysis of the expression pattern of the PKHD1 gene product, mutated in autossomal recessive polycystic kidney disease

Menezes, Luis Fernando Carvalho de 15 June 2004 (has links)
O gene PKHD1, mutado na doença renal policística autossômica recessiva, apresenta um padrão de splicing complexo associado a múltiplos transcritos alternativos. Neste trabalho estudamos o perfil de expressão de seu produto, poliductina. Análises por western blot revelaram produtos putativos de membrana de > 440 kDa e ~230 kDa, e de ~140 kDa em frações solúveis de rim, fígado e pâncreas. Estudos imunoistoquímicos mostraram marcação em ductos coletores renais e porção ascendente espessa da alça de Henle, em epitélios ductais biliar e pancreático e, no período embrionário, em broto ureteral, ductos biliar e pancreático e glândula salivar. Análises por imunofluorescência e microscopia imunoeletrônica sugerem que poliductina se localize em cílio apical primário, membrana apical e citoplasma de células do ducto coletor. Nossos resultados indicam que PKHD1 codifica isoformas de membrana e solúveis / PKHD1, the gene mutated in autosomal recessive polycystic kidney disease, presents a complex splicing pattern, associated with multiple alternative transcripts. In this work we have studied the expression profile of its product, polyductin. Western blot analysis revealed putative membrane products of > 440 kDa and 230 kDa, and of ~140 kDa in soluble fractions in kidney, liver and pancreas. Immunohistochemistry studies showed staining in renal collecting duct and thick ascending limb of Henle, in biliary and pancreatic ductal epithelia and, in the embryonic period, in ureteric bud, biliary and pancreatic ducts and salivary gland. Immunofluorescence and immunoelectron microscopy studies suggest that polyductin localizes to primary apical cilium, apical membrane and cytoplasm of collecting duct cells. Our data indicate that PKHD1 codifies membrane and soluble isoforms
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"Análise do padrão de expressão do produto de PKHD1, o gene mutado na doença renal policística autossômica recessiva" / Analysis of the expression pattern of the PKHD1 gene product, mutated in autossomal recessive polycystic kidney disease

Luis Fernando Carvalho de Menezes 15 June 2004 (has links)
O gene PKHD1, mutado na doença renal policística autossômica recessiva, apresenta um padrão de splicing complexo associado a múltiplos transcritos alternativos. Neste trabalho estudamos o perfil de expressão de seu produto, poliductina. Análises por western blot revelaram produtos putativos de membrana de > 440 kDa e ~230 kDa, e de ~140 kDa em frações solúveis de rim, fígado e pâncreas. Estudos imunoistoquímicos mostraram marcação em ductos coletores renais e porção ascendente espessa da alça de Henle, em epitélios ductais biliar e pancreático e, no período embrionário, em broto ureteral, ductos biliar e pancreático e glândula salivar. Análises por imunofluorescência e microscopia imunoeletrônica sugerem que poliductina se localize em cílio apical primário, membrana apical e citoplasma de células do ducto coletor. Nossos resultados indicam que PKHD1 codifica isoformas de membrana e solúveis / PKHD1, the gene mutated in autosomal recessive polycystic kidney disease, presents a complex splicing pattern, associated with multiple alternative transcripts. In this work we have studied the expression profile of its product, polyductin. Western blot analysis revealed putative membrane products of > 440 kDa and 230 kDa, and of ~140 kDa in soluble fractions in kidney, liver and pancreas. Immunohistochemistry studies showed staining in renal collecting duct and thick ascending limb of Henle, in biliary and pancreatic ductal epithelia and, in the embryonic period, in ureteric bud, biliary and pancreatic ducts and salivary gland. Immunofluorescence and immunoelectron microscopy studies suggest that polyductin localizes to primary apical cilium, apical membrane and cytoplasm of collecting duct cells. Our data indicate that PKHD1 codifies membrane and soluble isoforms

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