Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La calcificación arterial es un importante factor de riesgo asociado a morbilidad y mortalidad cardiovascular. La arterioesclerosis o esclerosis de Mönckeberg es un tipo de calcificación que involucra específicamente a la túnica media arterial, aumentando la rigidez de vasos de distinto calibre. Una situación clínica en que se observa un desarrollo rápido y agresivo de complicaciones cardiovasculares es la insuficiencia renal crónica, donde existe una alteración del metabolismo fosfo-cálcico y la presencia de hiperaldosteronismo, lo que contribuiría a la calcificación arterial y daño cardiovascular. Estudios recientes indican que la arterioesclerosis ocurre mediante la captación activa de fosfato por el tejido vascular, mediada por un cotransportador de fosfato dependiente de sodio (NaPi), que utiliza el fosfato como sustrato para la formación de cristales de hidroxiapatita. NaPi-III es el mediador de la captación de fosfato en los tejidos cardiovasculares, en los que se expresan dos isoformas: Pit-1 y Pit-2. Al aumentar la captación de fosfato, las células de músculo liso de la pared arterial sufren un cambio fenotípico, activando un programa de diferenciación de tipo osteocondrogénica. En el presente trabajo se estudió el efecto de aldosterona sobre la actividad y expresión del cotransportador sodio-fosfato NaPi-III y la diferenciación osteocondrogénica en el tejido arterial. Ratas macho fueron sometidas a nefrectomía 5/6 y divididas en 3 grupos: SHAM (control), NPX (nefrectomía 5/6) y NPXspi (NPX más tratamiento con espironolactona, un antagonista del receptor de aldosterona, 15 mg/Kg/día). Se extrajeron aortas de ratas sanas, las que fueron incubadas durante 18 a 24 horas con aldosterona y/o espironolactona, obteniendo los siguientes grupos experimentales: CONTROL (vehículo), ALDO (aldosterona 10-9 a 10-7 M), SPI (espironolactona 5*10-6 M) y ALDO+SPI (aldosterona 10-7 M más espironolactona 5*10-6 M). La actividad de NaPi-III en anillos aórticos fue evaluada mediante captación de 32P sensible a arseniato de sodio (10 mM) o ácido fosfonofórmico (1 mM). Las ratas urémicas presentaron un significativo aumento en la actividad NaPi (SHAM: 196±8; NPX: 437±128 cpm/mg tejido húmedo/10 min; P < 0,05 vs SHAM). Espironolactona previno el aumento de la actividad NaPi (NPXspi: 173±38 cpm/mg tejido húmedo/10 min). Se realizaron western blot con un anticuerpo específico para Pit-1 en los grupos de ratas, observándose un aumento significativo en la expresión de esta proteína en el grupo NPX, comparado con SHAM y NPXspi (SHAM: 1,334+0,139; NPX: 2,205+0,337; NPXspi: 1,027+0,328 unidades arbitrarias (u.a.); P < 0,05 NPX vs SHAM y NPXspi). La actividad NaPi también aumentó significativamente en los explantes 8 del grupo ALDO (10-7 M) respecto al CONTROL (CONTROL: 242±30; ALDO: 868±67 cpm/mg tejido húmedo/10 min; P < 0,01). Mediante western blot se demostró que los explantes arteriales presentaron un aumento dosis dependiente de Pit-1 frente a concentraciones crecientes de aldosterona (CONTROL: 1; ALDO 10-9 M: 1,228±0,197; ALDO 10-8 M: 1,653±0,299; ALDO 10-7 M: 2,051±0,440 u.a.; obteniéndose una diferencia significativa en los dos últimos grupos con respecto al CONTROL, P < 0,05) como también se observó la inhibición del efecto positivo de aldosterona sobre Pit-1, a través de espironolactona, sin diferencias importantes entre los grupos CONTROL, SPIRO y ALDO+SPIRO y un aumento significativo de Pit-1 en el grupo ALDO (10-7 M) (CONTROL: 1; SPI: 1,032±0,072; ALDO: 1,599±0,281; ALDO+SPI: 1,045±0,120 u.a.; P < 0,05). Se evaluó mediante RT-PCR la abundancia relativa de mRNA del gen Cbfa-1, factor de transcripción típico de la diferenciación osteocondrogénica, observándose un aumento importante en la expresión de este gen en los explantes estimulados con aldosterona 10-7 M (ALDO), mientras que no existe una diferencia significativa entre los grupos CONTROL, SPI y ALDO+SPI (CONTROL: 0,92±0,15; SPI: 0,76±0,27; ALDO: 2,20±0,71; ALDO+SPI: 1,04±0,25 ng; P < 0,05). Estos resultados demuestran una regulación de la actividad y expresión de Pit-1 en el tejido arterial por aldosterona y su relación en la activación del programa de diferenciación osteocondrogénica que ocurre en la calcificación arterial.

A matriz extracelular (MEC) pode ser definida como um complexo de proteínas e glicoproteínas que envolve as células nos mais diversos tecidos e tem papel importante na diferenciação e atividade celular, bem como no processo de mineralização e nos processos neoplásicos. Os componentes não colágenos da MEC têm sido abundantemente estudados, visando conhecer os minuciosos detalhes da biologia dos tecidos e assim entender os mecanismos envolvidos em suas patologias. Neste contexto, o presente trabalho tem como objetivo estudar a expressão e distribuição dos seguintes componentes não colágenos da MEC dos tecidos dentais: biglican, decorin, fibromodulin, osteonectina (ONC), osteopontina (OPN), sialoproteína óssea (BSP) e osteocalcina (OCC) no ameloblastoma e no tumor odontogênico cístico calcificante (cisto de Gorlin). Para ta nto foi utilizada a técnica da imunoistoquímica, com o método da estreptavidina-biotina-peroxidase, e anticorpos contra as proteínas anteriormente citadas. Os resultados mostraram que o biglican, o decorin e a BSP foram expressos somente nas células epiteliais metaplásicas, nas células fantasmas e células fantasmas em processo de calcificação, no estroma dos ameloblastomas e no ectomesênquima neoplásico do tumor odontogênico cístico calcificante. Já o fibromodulin e a OC foram predominantemente negativos no componente epitelial e no mesenquimal, com exceção para as células fantasmas, células fantasmas em processo de calcificação e áreas de hialinização próximas ao epitélio. A ONC foi positiva na maioria das células epiteliais, com exceção das células estrelárias dos ameloblastomas folicular e acantomatoso, e também no componente mesenquimal de ambas neoplasias. Já a OPN apresentou positividade somente nos focos de calcificação presentes no tumor odontogênico cístico calcificante. As proteínas estudadas apresentaram distribuição semelhante em neoplasias caracterizadas por padrões de crescimento diferentes, levando a crer que, apesar de participarem ativamente do mecanismo de crescimento neoplásico intra-ósseo, isoladamente não exercem papel decisivo na determinação do tipo de padrão de crescimento. Outro fato digno de relevância é a baixa expressão dessas proteínas nas células epiteliais neoplásicas quando comparada com a expressão no estroma e ectomesênquima, levando-nos a crer que as células epiteliais atuem principalmente como estimuladores da expressão dessas proteínas, que, por sua vez, podem atuar de forma agonista ou antagonista ao crescimento neoplásico. / The extracellular matrix (ECM) can be defined as a complex of proteins and glycoproteins that involves the cells in all tissues. It has a key role in cell differentiation and activity, as well as in mineralization and neoplastic processes. The non-collagenous components of the ECM have been abundantly studied to know the details of the biology of tissues and thus to understand the mechanisms involved in its pathologies. The aim of the present work is to study the expression and distribution of the following noncollagenous components of the ECM of dental tissues: biglycan, decorin, fibromodulin, osteonectin (ONC), osteopontin (OPN), bone sialoprotein (BSP) and osteocalcin (OCC) in ameloblastoma and the calcifying cystic odontogenic tumour. The streptavidin-biotinperoxidase method of immunohistochemistry was used with antibodies against the antigens previously cited. The results show that biglican, decorin and BSP had been expressed only in metaplastic epithelial cells, in ghost cells and ghost cells in calcification process, stroma of ameloblastomas and neoplastic ectomesenchyma of the calcifying cystic odontogenic tumour. The fibromodulin and the OCC showed predominantly negative expression in the epithelial and mesenchymal components, with exception for the ghost cells, ghost cells in calcification process and hyalinization areas next to the epithelium. The ONC was positive in the majority of the epithelial cells, with exception of the central cells of follicular and acanthomatous ameloblastomas, and also in the mesenchymal component of both tumours. OPN presented positivity only in the calcification focus of the calcifying cystic odontogenic tumour. The proteins studied presented similar distribution in tumours characterized by different patterns of growth, leading to believe that although they participate actively of the mechanism of intraosseous growth, separately they do not exert a key role in the determination of the type of growth pattern. Another relevance fact is the low expression of these proteins in the neoplastic epithelial cells when compared to the expression in stroma and ectomesenchyma, which make us believe that the epithelial cells act mainly as stimulators of the expression of these proteins, which in turn can act as agonist or antagonist to the tumour growth.

A matriz extracelular (MEC) pode ser definida como um complexo de proteínas e glicoproteínas que envolve as células nos mais diversos tecidos e tem papel importante na diferenciação e atividade celular, bem como no processo de mineralização e nos processos neoplásicos. Os componentes não colágenos da MEC têm sido abundantemente estudados, visando conhecer os minuciosos detalhes da biologia dos tecidos e assim entender os mecanismos envolvidos em suas patologias. Neste contexto, o presente trabalho tem como objetivo estudar a expressão e distribuição dos seguintes componentes não colágenos da MEC dos tecidos dentais: biglican, decorin, fibromodulin, osteonectina (ONC), osteopontina (OPN), sialoproteína óssea (BSP) e osteocalcina (OCC) no ameloblastoma e no tumor odontogênico cístico calcificante (cisto de Gorlin). Para ta nto foi utilizada a técnica da imunoistoquímica, com o método da estreptavidina-biotina-peroxidase, e anticorpos contra as proteínas anteriormente citadas. Os resultados mostraram que o biglican, o decorin e a BSP foram expressos somente nas células epiteliais metaplásicas, nas células fantasmas e células fantasmas em processo de calcificação, no estroma dos ameloblastomas e no ectomesênquima neoplásico do tumor odontogênico cístico calcificante. Já o fibromodulin e a OC foram predominantemente negativos no componente epitelial e no mesenquimal, com exceção para as células fantasmas, células fantasmas em processo de calcificação e áreas de hialinização próximas ao epitélio. A ONC foi positiva na maioria das células epiteliais, com exceção das células estrelárias dos ameloblastomas folicular e acantomatoso, e também no componente mesenquimal de ambas neoplasias. Já a OPN apresentou positividade somente nos focos de calcificação presentes no tumor odontogênico cístico calcificante. As proteínas estudadas apresentaram distribuição semelhante em neoplasias caracterizadas por padrões de crescimento diferentes, levando a crer que, apesar de participarem ativamente do mecanismo de crescimento neoplásico intra-ósseo, isoladamente não exercem papel decisivo na determinação do tipo de padrão de crescimento. Outro fato digno de relevância é a baixa expressão dessas proteínas nas células epiteliais neoplásicas quando comparada com a expressão no estroma e ectomesênquima, levando-nos a crer que as células epiteliais atuem principalmente como estimuladores da expressão dessas proteínas, que, por sua vez, podem atuar de forma agonista ou antagonista ao crescimento neoplásico. / The extracellular matrix (ECM) can be defined as a complex of proteins and glycoproteins that involves the cells in all tissues. It has a key role in cell differentiation and activity, as well as in mineralization and neoplastic processes. The non-collagenous components of the ECM have been abundantly studied to know the details of the biology of tissues and thus to understand the mechanisms involved in its pathologies. The aim of the present work is to study the expression and distribution of the following noncollagenous components of the ECM of dental tissues: biglycan, decorin, fibromodulin, osteonectin (ONC), osteopontin (OPN), bone sialoprotein (BSP) and osteocalcin (OCC) in ameloblastoma and the calcifying cystic odontogenic tumour. The streptavidin-biotinperoxidase method of immunohistochemistry was used with antibodies against the antigens previously cited. The results show that biglican, decorin and BSP had been expressed only in metaplastic epithelial cells, in ghost cells and ghost cells in calcification process, stroma of ameloblastomas and neoplastic ectomesenchyma of the calcifying cystic odontogenic tumour. The fibromodulin and the OCC showed predominantly negative expression in the epithelial and mesenchymal components, with exception for the ghost cells, ghost cells in calcification process and hyalinization areas next to the epithelium. The ONC was positive in the majority of the epithelial cells, with exception of the central cells of follicular and acanthomatous ameloblastomas, and also in the mesenchymal component of both tumours. OPN presented positivity only in the calcification focus of the calcifying cystic odontogenic tumour. The proteins studied presented similar distribution in tumours characterized by different patterns of growth, leading to believe that although they participate actively of the mechanism of intraosseous growth, separately they do not exert a key role in the determination of the type of growth pattern. Another relevance fact is the low expression of these proteins in the neoplastic epithelial cells when compared to the expression in stroma and ectomesenchyma, which make us believe that the epithelial cells act mainly as stimulators of the expression of these proteins, which in turn can act as agonist or antagonist to the tumour growth.

O estudo investigou a influência do tratamento de 10 semanas com paricalcitol (0,1µg/kg 5x/semana) e calcitriol (0,03µg/kg 5x/semana) em modelo de aterosclerose espontânea utilizando camundongos ApoE -/- sham e uninefrectomizados (UNX). Resultados: a densidade capilar por comprimento no tecido cardíaco foi significativamente mais baixa nos animais UNX Controle quando comparados aos shams, o que não ocorreu nos animais UNX tratados com paricalcitol e calcitriol. Nas aortas, a relação parede/lúmen foi significativamente menor no grupo Sham Controle quando comparada à dos grupos UNX Controle e UNX Calcitriol, sendo que nesses últimos, foram evidenciadas calcificações vasculares acompanhadas por células positivas para Runx-2 (cbfa-1). Além disso, foi evidenciada uma menor expressão de TGFß nas aortas dos animais do grupo UNX Paricalcitol em relação aos grupos UNX Controle e UNX Calcitriol. Conclusões: Ambos os tratamentos preveniram alterações na capilarização cardíaca induzidas pela UNX. O tratamento com calcitriol na dose empregada induziu significativas calcificações vasculares, o que não ocorreu com o paricalcitol. / The study investigated the influence of a 10-week treatment with Paricalcitol (0.1µg/kg, 5x/week) or Calcitriol (0.03µg/kg, 5x/week) on cardiovascular disease in spontaneously atherosclerotic ApoE -/- mice submitted to uninephrectomy (UNX). Results: capillary length density of the heart was significantly lower in UNX Control, but not in UNX Paricalcitol and UNX Calcitriol animals, when compared to shams. In the aortas, a significantly lower wall/lumen ratio was observed in the Sham Control group when compared to UNX Control and UNX Calcitriol groups. In the latter, vascular calcifications accompanied by a significant presence of Runx-2 (cbfa-1) positive cells was observed. TGFß aorta expression was significantly higher in UNX Control and UNX Calciriol groups when compared to UNX Paricalcitol. Conclusions: Both treatments were able to prevent the reduction in heart capillarization induced by the UNX model. Treatment with Calcitriol at the employed dose and duration, though, induced significant vascular calcifications.

O estudo investigou a influência do tratamento de 10 semanas com paricalcitol (0,1µg/kg 5x/semana) e calcitriol (0,03µg/kg 5x/semana) em modelo de aterosclerose espontânea utilizando camundongos ApoE -/- sham e uninefrectomizados (UNX). Resultados: a densidade capilar por comprimento no tecido cardíaco foi significativamente mais baixa nos animais UNX Controle quando comparados aos shams, o que não ocorreu nos animais UNX tratados com paricalcitol e calcitriol. Nas aortas, a relação parede/lúmen foi significativamente menor no grupo Sham Controle quando comparada à dos grupos UNX Controle e UNX Calcitriol, sendo que nesses últimos, foram evidenciadas calcificações vasculares acompanhadas por células positivas para Runx-2 (cbfa-1). Além disso, foi evidenciada uma menor expressão de TGFß nas aortas dos animais do grupo UNX Paricalcitol em relação aos grupos UNX Controle e UNX Calcitriol. Conclusões: Ambos os tratamentos preveniram alterações na capilarização cardíaca induzidas pela UNX. O tratamento com calcitriol na dose empregada induziu significativas calcificações vasculares, o que não ocorreu com o paricalcitol. / The study investigated the influence of a 10-week treatment with Paricalcitol (0.1µg/kg, 5x/week) or Calcitriol (0.03µg/kg, 5x/week) on cardiovascular disease in spontaneously atherosclerotic ApoE -/- mice submitted to uninephrectomy (UNX). Results: capillary length density of the heart was significantly lower in UNX Control, but not in UNX Paricalcitol and UNX Calcitriol animals, when compared to shams. In the aortas, a significantly lower wall/lumen ratio was observed in the Sham Control group when compared to UNX Control and UNX Calcitriol groups. In the latter, vascular calcifications accompanied by a significant presence of Runx-2 (cbfa-1) positive cells was observed. TGFß aorta expression was significantly higher in UNX Control and UNX Calciriol groups when compared to UNX Paricalcitol. Conclusions: Both treatments were able to prevent the reduction in heart capillarization induced by the UNX model. Treatment with Calcitriol at the employed dose and duration, though, induced significant vascular calcifications.

Os tumores odontogênicos benignos compreendem um grupo de neoplasias originárias dos tecidos dentários. Pesquisas vêm buscando identificar moléculas envolvidas nos mecanismos moleculares que regulam a remodelação da matriz extracelular (MEC) e como isto influencia no comportamento localmente invasivo presente em alguns destes tumores. A Transição Epitélio-Mesenquimal (TEM conversão do fenótipo epitelial em mesenquimal) é bem caracterizada em diversos carcinomas, culminando em mestástase. MMPs são enzimas que degradam os componentes da MEC, geram moléculas bioativas, participam da TEM e o controle da remodelação da MEC dá-se pelo balanço entre elas, seus inibidores (TIMPs e RECK) e seu ativador (EMMPRIN). Assim, o objetivo deste trabalho foi delinear o perfil de expressão das MMPs (-2, -7, -9 e -14), seus inibidores (TIMPs -2, -3, -4 e RECK), seu ativador (EMMPRIN) e marcadores da TEM (Snail, Slug, N-caderina, Fibronectina, a-Actina de músculo liso e Vimentina) em Ameloblastomas (AB) e Tumores Odontogênicos Cístico Calcificantes (TOCC). Ainda, realizamos a comparação da expressão de cada molécula avaliada em cada compartimento celular (epitélio e estroma) e correlação entre as moléculas avaliadas no mesmo tumor. Utilizamos 19 casos de AB e 18 casos de TOCC (Serviço de Anatomia Patológica da FOUSP), localização das enzimas/proteínas por imunoistoquímica e analisadas nos compartimentos epitelial e estromal. Todas as proteínas/enzimas analisadas foram detectadas tanto nos AB quanto nos TOCC, sendo a maioria expressa em ambos os compartimentos. A N-caderina foi localizada apenas no epitélio dos AB e a Vimentina somente no estroma em ambos os tumores. Na comparação entre o epitélio x estroma dos ameloblastomas, verificamos que houve diferença estatisticamente significante (p<0,05) para a MMP-2, MMP-7, EMMPRIN/CD147, Fibronectina, a-Actina de músculo liso, N-caderina, Vimentina, Snail e Slug. Na comparação entre o epitélio x estroma dos TOCC, verificamos que houve diferença estatisticamente significante (p<0,05) para a MMP-9, RECK, EMMPRIN/CD147, Vimentina, N-caderina, Snail e Slug. Assim, entre o epitélio x estroma dos ameloblastomas e TOCC, verificamos que houve diferença estatisticamente significante (p<0,05) para a MMP-2, MMP-7, MMP-9, RECK, EMMPRIN/CD147, Fibronectina, Vimentina, a-Actina de músculo liso, N-caderina, Snail e Slug. Esta é a primeira vez que a EMMPRIN, RECK, TIMP-3, TIMP-4, Ncaderina, Snail e Slug são descritas em TOCC e TIMP-3, TIMP-4, Snail e Slug em ameloblastomas. Concluímos que estas proteínas/enzimas estão diferencialmente expressas tanto no epitélio quanto no estroma destes tumores e sugerimos que estes podem participar do comportamento localmente invasivo. / Odontogenic tumors comprise a group of benign neoplasms originating from dental tissues. Research looking for identify molecules involved in the molecular mechanisms that regulate extracellular matrix remodeling (ECM) and how this impacts on locally invasive behavior present in some of these tumors. Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT - conversion of epithelial phenotype into mesenchymal phenotype) is well characterized in several carcinomas, leaving to metastasis. MMPs are enzymes that degrade ECM components, generate bioactive molecules, participating in the EMT and control ECM remodeling is given by the balance between them, their inhibitors (TIMPs and RECK) and its activator (EMMPRIN). The aim of this study was evaluate expression profile of MMPs (-2, -7, -9 and - 14), their inhibitors (TIMPs -2, -3, -4 and RECK), its activator (EMMPRIN) and EMT markers (Snail, Slug, N-cadherin, Fibronectin, -smooth muscle actin and Vimentin) in ameloblastomas (AB) and Calcifying Cystic Odontogenic Tumor (CCOT). We also compared the expression of each molecule assessed in each cellular compartment (epithelium and stroma) and correlation between molecules evaluated in the same tumor. We used 19 AB cases and 18 CCOT cases from files of Pathology Laboratory (FOUSP), localization of enzymes/proteins and analyzed by immunohistochemistry in epithelial and stromal compartments. All proteins/enzymes were detected in both AB and CCOT, mostly expressed in both compartments. N-cadherin was localized only in the epithelium of AB and Vimentin only in stromal in both tumors. Comparing \"epithelium vs stroma\" of AB, we observed a statistically significant difference (p <0.05) for MMP-2, MMP-7, EMMPRIN/CD147, Fibronectin, -smooth muscle actin, N-cadherin, Vimentin, Snail and Slug. Comparing \"epithelium vs stroma\" of CCOT, we observed a statistically significant difference (p <0.05) for MMP-9, RECK, EMMPRIN/CD147, Vimentin, N-cadherin, Snail and Slug. Analizing epithelium vs stroma\" between AB and CCOT, we observed a statistically significant difference (p <0.05) for MMP-2, MMP-7, MMP-9, RECK, EMMPRIN/CD147, Fibronectin, Vimentin , -smooth muscle actin, N-cadherin, Snail and Slug. This is the first time that EMMPRIN, RECK, TIMP-3, TIMP-4, N-cadherin, Snail and Slug are described in CCOT and TIMP-3, TIMP-4, Snail and Slug in AB. We conclude that these proteins/enzymes are differentially expressed in both epithelium and stroma of these tumors and suggest that they may participate locally invasive behavior.

Os tumores odontogênicos benignos compreendem um grupo de neoplasias originárias dos tecidos dentários. Pesquisas vêm buscando identificar moléculas envolvidas nos mecanismos moleculares que regulam a remodelação da matriz extracelular (MEC) e como isto influencia no comportamento localmente invasivo presente em alguns destes tumores. A Transição Epitélio-Mesenquimal (TEM conversão do fenótipo epitelial em mesenquimal) é bem caracterizada em diversos carcinomas, culminando em mestástase. MMPs são enzimas que degradam os componentes da MEC, geram moléculas bioativas, participam da TEM e o controle da remodelação da MEC dá-se pelo balanço entre elas, seus inibidores (TIMPs e RECK) e seu ativador (EMMPRIN). Assim, o objetivo deste trabalho foi delinear o perfil de expressão das MMPs (-2, -7, -9 e -14), seus inibidores (TIMPs -2, -3, -4 e RECK), seu ativador (EMMPRIN) e marcadores da TEM (Snail, Slug, N-caderina, Fibronectina, a-Actina de músculo liso e Vimentina) em Ameloblastomas (AB) e Tumores Odontogênicos Cístico Calcificantes (TOCC). Ainda, realizamos a comparação da expressão de cada molécula avaliada em cada compartimento celular (epitélio e estroma) e correlação entre as moléculas avaliadas no mesmo tumor. Utilizamos 19 casos de AB e 18 casos de TOCC (Serviço de Anatomia Patológica da FOUSP), localização das enzimas/proteínas por imunoistoquímica e analisadas nos compartimentos epitelial e estromal. Todas as proteínas/enzimas analisadas foram detectadas tanto nos AB quanto nos TOCC, sendo a maioria expressa em ambos os compartimentos. A N-caderina foi localizada apenas no epitélio dos AB e a Vimentina somente no estroma em ambos os tumores. Na comparação entre o epitélio x estroma dos ameloblastomas, verificamos que houve diferença estatisticamente significante (p<0,05) para a MMP-2, MMP-7, EMMPRIN/CD147, Fibronectina, a-Actina de músculo liso, N-caderina, Vimentina, Snail e Slug. Na comparação entre o epitélio x estroma dos TOCC, verificamos que houve diferença estatisticamente significante (p<0,05) para a MMP-9, RECK, EMMPRIN/CD147, Vimentina, N-caderina, Snail e Slug. Assim, entre o epitélio x estroma dos ameloblastomas e TOCC, verificamos que houve diferença estatisticamente significante (p<0,05) para a MMP-2, MMP-7, MMP-9, RECK, EMMPRIN/CD147, Fibronectina, Vimentina, a-Actina de músculo liso, N-caderina, Snail e Slug. Esta é a primeira vez que a EMMPRIN, RECK, TIMP-3, TIMP-4, Ncaderina, Snail e Slug são descritas em TOCC e TIMP-3, TIMP-4, Snail e Slug em ameloblastomas. Concluímos que estas proteínas/enzimas estão diferencialmente expressas tanto no epitélio quanto no estroma destes tumores e sugerimos que estes podem participar do comportamento localmente invasivo. / Odontogenic tumors comprise a group of benign neoplasms originating from dental tissues. Research looking for identify molecules involved in the molecular mechanisms that regulate extracellular matrix remodeling (ECM) and how this impacts on locally invasive behavior present in some of these tumors. Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT - conversion of epithelial phenotype into mesenchymal phenotype) is well characterized in several carcinomas, leaving to metastasis. MMPs are enzymes that degrade ECM components, generate bioactive molecules, participating in the EMT and control ECM remodeling is given by the balance between them, their inhibitors (TIMPs and RECK) and its activator (EMMPRIN). The aim of this study was evaluate expression profile of MMPs (-2, -7, -9 and - 14), their inhibitors (TIMPs -2, -3, -4 and RECK), its activator (EMMPRIN) and EMT markers (Snail, Slug, N-cadherin, Fibronectin, -smooth muscle actin and Vimentin) in ameloblastomas (AB) and Calcifying Cystic Odontogenic Tumor (CCOT). We also compared the expression of each molecule assessed in each cellular compartment (epithelium and stroma) and correlation between molecules evaluated in the same tumor. We used 19 AB cases and 18 CCOT cases from files of Pathology Laboratory (FOUSP), localization of enzymes/proteins and analyzed by immunohistochemistry in epithelial and stromal compartments. All proteins/enzymes were detected in both AB and CCOT, mostly expressed in both compartments. N-cadherin was localized only in the epithelium of AB and Vimentin only in stromal in both tumors. Comparing \"epithelium vs stroma\" of AB, we observed a statistically significant difference (p <0.05) for MMP-2, MMP-7, EMMPRIN/CD147, Fibronectin, -smooth muscle actin, N-cadherin, Vimentin, Snail and Slug. Comparing \"epithelium vs stroma\" of CCOT, we observed a statistically significant difference (p <0.05) for MMP-9, RECK, EMMPRIN/CD147, Vimentin, N-cadherin, Snail and Slug. Analizing epithelium vs stroma\" between AB and CCOT, we observed a statistically significant difference (p <0.05) for MMP-2, MMP-7, MMP-9, RECK, EMMPRIN/CD147, Fibronectin, Vimentin , -smooth muscle actin, N-cadherin, Snail and Slug. This is the first time that EMMPRIN, RECK, TIMP-3, TIMP-4, N-cadherin, Snail and Slug are described in CCOT and TIMP-3, TIMP-4, Snail and Slug in AB. We conclude that these proteins/enzymes are differentially expressed in both epithelium and stroma of these tumors and suggest that they may participate locally invasive behavior.

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AnaliseImunohistoquímicaAdamts.pdf: 2182822 bytes, checksum: f614e4856b0e4ff30df45d31a8939a93 (MD5) Previous issue date: 2014 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O ameloblastoma e o tumor odontogênico cístico calcificante (TOCC) são tumores odontogênicos que tem origem do epitélio odontogênico, porém ainda não é conhecido o estímulo ou gatilho que leva à transformação neoplásica desses tumores. O comportamento biológico das lesões é distinto, pois o ameloblastoma é um tumor mais agressivo e com taxa de recorrência significativa. Já o TOCC é um tumor menos agressivo e raramente há recorrência e por esse motivo foi utilizado como controle no estudo. Portanto, a elucidação completa dos mecanismos pelos quais esses tumores odontogênicos apresentam tais comportamentos biológicos continua sendo um desafio para os pesquisadores. As c (A Disintegrin and Metalloproteinase with ThromboSpondin) são metaloendopeptidases que são dependentes de zinco em seu domínio catalítico. Essas enzimas possuem ampla atividade catalítica contra uma variedade de substratos como os proteoglicanos (agrecan, brevican e versican), que são proteínas presente na matriz extracelular (MEC). As ADAMTS exibem características estruturais que lhes conferem um grande potencial para exibir múltiplas funções. Exibem função crucial em vários processos como proliferação, adesão, invasão e sinalização celular. As alterações nessas enzimas estão presentes em diversos tumores, o que sugere que estas proteínas podem estar envolvidas no processo carcinogênico em diferentes caminhos. Especificamente a ADAMTS-1 tem sido correlacionada com a tumorigênese de algumas neoplasias como no câncer de mama, pulmão e pâncreas. Assim como a ADAMTS, agrecan, brevican e versican são expressos em vários tumores e a regulação alterada desses proteoglicanos pode contribuir para o desenvolvimento da carcinogênese. Neste trabalho foram estudadas ADAMTS-1, agrecan, brevican e versican no ameloblastoma e TOCC. Foram incluídos 20 casos de ameloblastoma e 6 casos de TOCC, utilizados como controle. A expressão de ADAMTS-1, agrecan, brevican e versican foi avaliada por imunohistoquímica e as áreas de marcação foram mensuradas e analisadas. Para análise de correlação entre as proteínas estudadas utilizou-se o teste de Spearman. Todas as amostras de ameloblastoma expressaram ADAMTS-1, agrecan, brevican e versican. Todas as amostras de TOCC também expressaram as mesmas proteínas, porém numa quantidade significativamente menor que no ameloblastoma. A diferença de expressão de ADAMTS-1 e brevican no epitélio do ameloblastoma e do TOCC foi significante estatisticamente (p<0,0105). Assim como a expressão de agrecan e versican, no epitélio do ameloblastoma e do TOCC, também foi estatisticamente significante (p<0,0067) e (p<0,0148), respectivamente. Não houve correlação entre as proteínas estudadas. / Ameloblastoma and calcifying cystic odontogenic tumor (CCOT) are odontogenic tumors with origin odontogenic epithelium, but it is not yet known stimulus or trigger that lead to neoplastic transformation of tumors. The biological behavior of the lesions is distinct because the ameloblastoma is more aggressive and significant rate of tumor recurrence. CCOT is a less aggressive tumor and recurrence rarely there and therefore was used as a control in the study. Therefore, the complete elucidation of the mechanisms by which these odontogenic tumors show such biological behavior remains a challenge for researchers. The ADAMTS (A Disintegrin and Metalloproteinase with thrombospondin) are metalloendopeptidases who are dependent on zinc in its catalytic domain. These enzymes have catalytic activity against a broad range of substrates including proteoglycans (aggrecan, brevican and versican), which are proteins present in the extracellular matrix (ECM). The ADAMTS exhibit structural features that confer great potential to display multiple functions. Exhibit crucial role in various processes such as proliferation, adhesion, invasion and cell signaling. Changes to these enzymes are present in various tumors, suggesting that these proteins may be involved in the carcinogenic process in different ways. Specifically, ADAMTS-1 has been correlated with tumorigenesis of some cancers such as in breast, lung and pancreatic cancer. Like ADAMTS, aggrecan, versican and brevican are expressed in various tumors and altered regulation of proteoglycans may contribute to the development of carcinogenesis. In this work ADAMTS-1, aggrecan, brevican and versican in ameloblastoma and CCOT were studied, 20 cases of ameloblastoma and 6 cases of TOCC, used as controls were included. We evaluated the expression of ADAMTS-1, aggrecan, brevican and versican by immunohistochemical study and the marking areas were measured and analyzed. To correlation analysis between the studied proteins used the Spearman test. All samples of ameloblastoma expressed ADAMTS-1, aggrecan, brevican and versican. All samples TOCC also expressed the same proteins, but in significantly less than the amount ameloblastoma. The difference in expression of ADAMTS-1 and brevican in the epithelium of ameloblastoma and of TOCC was statistically significant (p<0.0105). As the expression of aggrecan and versican, between ameloblastoma and TOCC, in the epithelium was also statistically significant (p<0.0067) and (p<0.0148), respectively. There was no correlation between the proteins studied.