The proteins tyrosine kinases (PTKs) and the proteins tyrosine phosphatases (PTPs) are very important proteins implicated in the regulation of the cell cycle and numerous human diseases including cancer. VHR is a dual-specific phosphatase whose principles substrats are the MAPKs ERK and JNK. Previous studies of our laboratory showed that this phosphatase is regulated during the cell cycle. Its level is low during the G1 phase and increases during S and G2 phases to reach a top at the G2/M phases. The low level of VHR during the G1 phase is probably due to an alteration of the protein stability demonstrated by a decreased half-life (after treatment of the cell with cycloheximide). In addition, VHR deletion by RNA interference in HeLa cells induces a cell cycle arrest during G1/S and G2/M transitions [1]. In the first part of our work, we show that the dual-specificity phosphatase VHR is overexpressed in cervix cancer cell lines compared to primary keratinocytes. These cell lines are infected (HeLa, CaSki and SiHa) or not (C33 and HT3) by HPV, suggesting that VHR overexpression is HPV independent, virus which is responsible of cervix cancer. We show that VHR overexpression is associated with a differential subcellular localization. Indeed, VHR is localized in the cytoplasm of normal keratinocytes while it localizes in both cytoplasm and nucleus of the cell lines studied. This observed overexpression is not associated with an increased expression of its mRNA but with a stabilization of the protein. CHX chase showed us that VHR half life is about 2 hours in primary keratinocytes and longer than 8 hours in cervix cancer cell lines. The TMA technique allowed us to study a large number of preneoplasic and neoplasic cervical lesions. Interestingly, we observe that VHR is significantly overexpressed in CIN III (Cervical intraepithelial Lesions III) (n=18) and in SCCs (Squamous Cell Carcinoma) (n=12) compared to normal exocols (n=16) and although in ADCs (Adenocarcinoma) (n=12) and AISs (Adenocarcinoma in situ) (n=9) compared to normal endocols (n=19). The differential subcellular localization is also observed in CIN III and SCCs compared to normal exocols but not in ADCs and AISs compared to normal endocols. In the second part of our work, we analyzed the effect of small selectif inhibitors of VHR developped by Dr. L. Tautz from Burnham Institute in La Jolla, CA on cervical cell lines, HeLa and CaSki. We show that these small sulfonic acids induced a decreased number and a decreased proliferation of HeLa and CaSki cells. These effects are similar to those induced by RNA interference. We also show that these inhibitors induced an increased level of ERK phosphorylation. Since ERK is a specific substrat of VHR, these results suggest that the small inhibitors developped by L. Tautz et al. are specific for VHR.

Le cancer du col utérin est précédé par des lésions prénéoplasiques. Celles-ci sont associées dans plus de 95% des cas à une infection par un papillomavirus (HPV). Un phénomène fréquent durant la cancérogenèse cervicale est l'intégration du génome dun HPV oncogène dans lADN cellulaire. Celle-ci entraîne une expression sélective de gènes codant pour des oncoprotéines virales (appelées E6 et E7) capables d'inactiver les produits de certains gènes suppresseurs de tumeurs (p53, p21, pRb) ou dinteragir avec dautres protéines cellulaires impliquées dans le contrôle du cycle cellulaire. Des travaux antérieurs du laboratoire daccueil suggèrent que le développement du cancer du col utérin est associé à une faible capacité de présentation dantigènes au système immunitaire, comme le démontre la rareté et le déficit fonctionnel des cellules de Langerhans (LC, cellules dendritiques ayant une fonction professionnelle de présentation antigénique au niveau de la peau et des muqueuses) dans les lésions (pré)cancéreuses cervicales. Ces altérations pourraient empêcher une réponse immunitaire efficace et faciliter la persistance du virus ainsi que la progression tumorale. Il est actuellement bien admis que les kératinocytes (cellules cibles de linfection par HPV) sont susceptibles dinfluencer les réactions immunitaires au niveau de la peau et des muqueuses épidermoïdes par lintermédiaire de facteurs solubles, les chémokines (CCL20, contrôlant linfiltration des LC immatures au sein de lépithélium) ou de contacts membranaires (E-cadhérine). Les kératinocytes infectés par HPV pourraient se différencier des cellules normales pour la production de ces facteurs, ce qui pourrait contribuer aux altérations des cellules de Langerhans/cellules dendritiques (LC/DC) observées dans les lésions (pré)cancéreuses cervicales. Le fait que la molécule dadhésion E-cadhérine intervienne dans lattachement des LC aux kératinocytes suggère limportance de cette molécule dadhésion dans la rétention des CL au sein de lépithélium cervical. Les objectifs de ce travail ont été détudier linfluence des oncogènes viraux sur lexpression de facteurs immunitaires et dexaminer les conséquences de linhibition de E6 et de E7 sur lexpression de la E-cadhérine et de CCL20, qui jouent un rôle important dans limmunosurveillance au niveau des épithélia via leur action sur les cellules de Langerhans. En accord avec notre hypothèse, nous avons montré une diminution de lexpression de la E-cadhérine dans les lésions (pré)néoplasiques du col par rapport à lépithélium exocervical normal (Hubert et coll. 2005). Par des expériences dARN interférence (siRNA), nous avons également démontré limplication de loncoprotéine virale E7 dans linhibition de lexpression de la E-cadhérine membranaire (Caberg et coll. 2008) et limplication des oncoprotéines virales E6 et E7 dans la diminution de la sécrétion de la chémokine CCL20 dans des kératinocytes transformés par HPV16 (Caberg et coll. 2008).