La population du virus de l’hépatite B (VHB) a été classée en huit génotypes allant de A à H. Des études récentes ont montré que le génotype E du VHB (VHB/E) prédomine sur un vaste territoire allant du Sénégal à l'Angola. La République centrafricaine (RCA) est située en zone de forte endémie où la prévalence de l’infection chronique par le VHB est estimée à 15,4% chez les adultes. Une étude menée chez 196 patients atteints d’hépatite B chronique a permis d’obtenir 66 séquences complètes ou partielles d’ADN des VHB. L’analyse phylogénétique a montré que 62 souches appartenaient au génotype E, une au génotype A1 et 3 au génotype D. Une souche était un recombinant des génotypes E/D. Comme dans la plupart des pays d’Afrique Sub-saharienne le génotype E du VHB prédomine nettement en RCA, avec une faible variabilité (1,67%) sur l’ensemble des souches du génotype E déjà décrites. Ces résultats sont en faveur d’une introduction récente du génotype E dans l’espèce humaine avec un essaimage rapide dans les populations concernées. Une origine simienne de ces souches est possible étant donné les identités de séquences entre l’ADN du VHB/E et l’ADN du VHB du chimpanzé. La deuxième partie du travail est une étude clinique et biologique chez 68 patients hospitalisés pour une suspicion de carcinome hépatocellulaire (CHC). Tous les patients recrutés (100%) étaient infectés par le VHB. L’échographie a permis de confirmer un CHC chez 43 patients et la cytoponction a permis un diagnostic de certitude chez 14 malades. L’antigène HBs (AgHBs) était présent chez 10 de ces 43 patients et 7 sur ces 10 étaient co-infectés par le VHD. La moyenne du dosage de l’alpha-foetoprotéine était de 10394 UI/mL. Chez les 25 autres patients, 21 avaient de l’AgHBs, parmi ceux-ci 11 étaient co-infectés par le VHD. La moyenne du dosage de l’AFP était de 9 UI/mL. Le CHC est donc fréquent en RCA et les patients consultent à un stade terminal de la maladie. Ce travail confirme aussi la relation entre VHB et CHC en RCA. Le VHD est associé aux formes graves d’hépatite B chronique. Les prélèvements de sérum et de lésions hépatiques qui ont été obtenus permettront par la suite d’étudier la variabilité du gène X et ses relations avec le CHC. / Hepatitis B virus (HBV) strains have been classified into eight genotypes A to H. Recent studies have shown that the HBV genotype E (HBV/E) predominates in a vast crescent spanning from Senegal to Angola. The Central African Republic (CAR) is an endemic country for HBV infection and prevalence of chronic infection in adults is estimated to be about 15.4%. A survey of 196 patients attending local hospital with symptoms of hepatitis has permitted to obtain 66 complete or partial sequences of HBV DNA. Phylogenetic analyses have shown that 62 strains belonged to Genotype E while one was of genotype A1, and three of genotype D. One strain presented a recombination between genotypes E and D. Genotype E is thus predominant in RCA as in most Sub-Saharan countries. The variability of strains is limited not only among CAR strains but when all strains isolated so far are compared (1.67 %), suggesting a recent introduction of HBV in the human species with a rapid expansion. A simian origin of the genotype E is possible considering the DNA sequence identities with chimpanzee HBV DNA. The second part of this study is a clinical and biological survey of 68 patients attending the “Hôpital de l’Amitié” of Bangui for a suspicion of hepatocellular carcinoma (HCC). All the patients (100 %) have been infected by HBV. Echography confirmed the suspicion of HCC in 43 patients and cytopathology ascertained the diagnosis for 14 patients for whom cytoponction was feasible. Hepatitis B surface antigen (HBsAg) was present in 10 of these 43 patients, of whom 7 were co-infected with HDV. The average level of alpha-fetoprotein (AFP) was 10394 UI/mL. For the 25 other patients, HBsAg was detected in 21 of whom 11 were co-infected with HDV. Low level of AFP was observed (mean: 9UI/mL). This study shows that HBV related HCC is common in the country and that patients come to hospital late in the evolution of this disease. This study also confirms the association between HBV and HCC in CAR. HDV is associated with severe symptoms of hepatitis B. Serum and HCC lesions samples will be used to study variability of X gene and its relation with HCC.

Thèse d'exercice : Médecine. Médecine. Gynécologie-obstétrique : Nantes : 2008. / Bibliogr.

Thèse d'exercice : Médecine. Médecine. Gynécologie-obstétrique : Nantes : 2008. / Bibliogr.

Reproduction de : Thèse d'exercice : Chirurgie dentaire : Nantes : 2008. / Bibliogr.

Ces dernières années, il est apparu que le stroma péritumoral et en particulier les fibroblastes associés au cancer exprimant l’actine musculaire lisse (CAFs : carcinoma-associated fibroblasts/ myofibroblasts) faisaient partie intégrante du processus carcinologique observé dans diverses tumeurs épithéliales y compris dans les carcinomes mammaires.L’objectif de ce travail de thèse a donc été :1) D’analyser la distribution « in situ » de ses CAFs/myofibroblastes dans les lésions mammaires de carcinome intraductal (CID), de carcinomes invasifs non spécifiques (No Special Type – CaNST) et de carcinomes métastatiques.2) De déterminer si cette réaction myofibroblastique pouvait prendre naissance à partir des fibroblastes « résidents » CD 34 positifs par l’intermédiaire du TGF-1 et de son récepteur.3) De déterminer si l’action pro carcinogénique de cette réaction myofibroblastique pouvait être liée à la surexpression stromale de la métalloprotéinase de la matrice de type-2 (MMP-2).4) De déterminer si l’expression des récepteurs aux glucocorticoïdes (GR) était présente au sein de ces cellules stromales afin de constituer une cible thérapeutique potentielle. Nos trois premiers travaux ont consisté en une analyse semi-quantitative par immunohistochimie de l’expression de l’anticorps anti- CD 34, marqueur de fibroblastes mammaires, et de l’anticorps anti–actine musculaire lisse (AML), marqueur de myofibroblastes, au sein du stroma de lésions CID, de CaNST et de lésions métastatiques, hépatiques et ganglionnaires. Ces expériences ont mis en évidence la perte progressive de l’expression stromale du CD34 et l’apparition progressive, « en miroir », de l’expression stromale de l’AML autour des foyers de CID et ce de manière proportionnelle au grade nucléaire de ces lésions. En ce qui concerne les CaNST, nous avons constaté la perte de l’expression stromale du CD34 et la présence de la réaction myofibroblastique AML positive dans 100 % des cas. L'intensité d'expression de l'actine musculaire lisse était corrélée de manière significative avec la présence de métastases ganglionnaires. Enfin, cette réaction myofibroblastique a été également retrouvée de manière constante au sein des métastases ganglionnaires et hépatiques. Notre quatrième travail a consisté en l’étude immunohistochimique du TGF-1 et de son récepteur (TGF-R1) dans les lésions de CaNST et au traitement in vitro de lignées cellulaires de fibrocytes mammaires par du TGF-1. Nous avons pu constater une augmentation statistiquement significative de l’expression du TGF-1 au sein des cellules tumorales et une augmentation statistiquement significative de l’expression du TGF-R1 au sein du stroma péritumoral par rapport au tissu mammaire normal. Par ailleurs, le traitement in vitro d’une lignée de fibroblastes mammaires par le TGF-1 faisait apparaître une expression d’AML au sein de ces cellules.Notre cinquième travail a permis de mettre en évidence, par immunohistochimie, une relation entre l’expression stromale de la métalloprotéinase de la matrice de type 2 (MMP-2) et le sous-type tumoral selon la classification luminale. Les tumeurs exprimant HER-2/Neu présentaient une plus forte expression stromale de MMP-2, considérée comme potentiellement pro-invasive.Enfin, notre dernier travail a mis en évidence l’expression fréquente (>90% des cas) des récepteurs aux glucocorticoïdes (GR) au sein des CAFs/ myofibroblastes des CaNST. Cette expression était corrélée de manière significative avec le grade tumoral, l’indice de Ki-67 et l’expression de ces mêmes GR au sein des cellules tumorales épithéliales.En conclusion, les résultats découlant de ces différents travaux démontrent une réaction stromale péritumorale constante et ce tout au long du processus de développement tumoral, dès le stade de carcinome in situ jusqu’au stade métastatique.Une des origines potentielles de ces myofibroblastes est vraisemblablement la transformation des fibroblastes « résidents » mammaires par l’intermédiaire du TGF- et de son récepteur. Ces myofibroblastes présentent par ailleurs des caractéristiques d’expression de MMP-2 différentes en fonction des sous types de carcinomes mammaires suggérant que le stroma péritumoral est en partie différent en fonction du sous type tumoral. Enfin, les récepteurs aux glucocorticoïdes (GR) qui sont fréquemment observés dans ces cellules myofibroblastiques pourraient à l’avenir constituer de nouvelles cibles dans la régulation de l’action de ces cellules. / Doctorat en Sciences médicales (Médecine) / info:eu-repo/semantics/nonPublished

OBJECTIF : Le cancer du poumon est la principale cause de décès par cancer au Canada. L’objectif de ce projet est d’identifier des biomarqueurs d'expression génique dans la tumeur, associés à la survie des patients suivant une résection chirurgicale d’un adénocarcinome de stade 1. MÉTHODES : Des gènes candidats ont été sélectionnés grâce à une revue de littérature, ainsi qu’à l’analyse de bases de données publiques (PRECOG). L’un de nos jeux de données, dans lequel l'expression des gènes a été quantifiée à l'aide de biopuces à ADN dans la tumeur et le parenchyme pulmonaire non-tumoral a également été analysé. L’expression des gènes sélectionnés a ensuite été mesurée par qPCR sur 233 échantillons d’adénocarcinomes de stade 1. Des analyses de Kaplan-Meier ont été réalisées pour évaluer leur valeur pronostique. L’expression de deux de ces gènes a ensuite été testée dans une deuxième cohorte indépendante de 210 adénocarcinomes de stade 1. RÉSULTATS : Onze gènes ont été sélectionnés selon leur capacité à prédire une récidive ou une rémission grâce aux données publiques. Les analyses complémentaires sur notre jeu de données ont permis de réduire la liste à 3 gènes associés à un mauvais pronostic (RRM1, EZH2 et FOXM1) et 3 gènes associés à un bon pronostic (BTG2, SELENBP1 et NFIB). Les analyses de EZH2 et de RRM1 par qPCR ont révélé des courbes de survies significativement différentes entre les patients avec des niveaux d'expression génique élevés et faibles (EZH2 Kaplan-Meier log-rank p=3.2e-02, RRM1 Kaplan-Meier log-rank p=5.9e-04). La valeur pronostique de EZH2 et RRM1 n’a pas été confirmée dans la deuxième cohorte. CONCLUSION : Le rôle des gènes EZH2 et RRM1 comme biomarqueurs afin de prédire la récidive des adénocarcinomes de stade 1 a été confirmé dans une première cohorte, mais pas dans une deuxième cohorte équivalente sur la base clinique et pathologique. / OBJECTIVE: Lung cancer is the leading cause of cancer-related death. The objective of this study is to identify tumor-based gene expression biomarkers associated with survival after curative resection for stage 1 adenocarcinoma. METHODS: Candidate genes were selected based on literature review, analyses performed in public databases (PRECOG), and using our own microarray gene expression dataset of lung cancer and non-tumor lung parenchyma. The selected genes were measured by quantitative real-time PCR (qPCR) in the tumors of 233 patients with stage 1 adenocarcinoma. Kaplan-Meier analyses were performed to establish the discriminatory performance of these biomarkers. The expression of two of these genes was then tested in an independent cohort of 210 stage 1 adenocarcinomas. RESULTS: Based on literature, we have selected 11 candidate genes that showed promising prognostic value. Complementary analyses with PRECOG and our own microarray dataset enabled us to choose three genes associated with poor outcome (RRM1, EZH2 and FOXM1) and three genes associated with favourable outcome (BTG2, SELENBP1 and NFIB). Results for EZH2 and RRM1 revealed significant difference in survival curves between patients with low compared to high gene expression (EZH2 Kaplan-Meier logrank p=3.2e-02, RRM1 Kaplan-Meier logrank p=5.9e-04). The prognostic values of EZH2 and RRM1 were not replicated in the second set of patients. CONCLUSION: OBJECTIVE: Lung cancer is the leading cause of cancer-related death. The objective of this study is to identify tumor-based gene expression biomarkers associated with survival after curative resection for stage 1 adenocarcinoma.

Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est un des cancers les plus importants en termes de mortalité. D'ici à 2020, les prévisions indiquent une multiplication par trois du nombre de nouveaux cas à travers le monde. De nos jours, la grande majorité des cas diagnostiqués sont à un stade avancé, et les seuls traitements existants ont montré quelques limites (efficacité modérée, coût élevé...). D'autres alternatives ont été développées, notamment pour les métastases intrahépatiques (chimio-embolisation trans-artérielle ou radio-embolisation). Mais lorsque cela est associé à une dissémination extrahépatique, comme dans la plupart des cas, très peu de possibilités peuvent être proposées. De nombreuses études ont montré que les récepteurs de la somatostatine étaient sur-exprimés dans les tissus tumoraux, et en particulier dans les cas de CHC. Par conséquent, ces récepteurs semblent assez prometteurs pour le ciblage tumoral, que ce soit pour l'imagerie ou pour la thérapie. Basé sur leur propriété de reconnaissance (magic bullet concept), une alternative pourrait être de développer des radiotraceurs, aussi appelés radiopharmaceutiques, pour localiser ou détruire sélectivement les cellules cancéreuses. Cela consiste à concevoir un système en trois parties avec une biomolécule (analogue de la somatostatine), une agent bifonctionnel chélatant (BCA) et un radioélément qui émet un rayonnement gamma ou ß-. Pour être réellement efficace, ce système doit être stable in vivo afin de pouvoir imager et/ou irradier spécifiquement la masse tumorale visée. Parmi les radioisotopes utilisés pour les applications en imagerie/thérapie, le couple technétium-99m/rhénium-188 est très intéressant. Le technétium-99m est l'isotope de choix en médecine nucléaire pour l'imagerie, et le rhénium-188 est très prometteur pour la thérapie. Ce travail rapporte nos premiers résultats relatifs à chacune des étapes dans le développement de radiopharmaceutiques vectorisés. De la synthèse des ligands bifonctionnels chélatants, aux premières études in vitro, en passant par toute la partie de bioconjugaison et le radiomarquage au 99mTc et au 188Re. / Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most important cancer in terms of mortality. By 2020, forecasts indicate a threefold increase of new HCC cases worldwide. Nowadays the large majority of diagnosed cases are advanced and the only existing treatments showed some drawbacks (expensive costs, low efficiency...). Different alternatives have been developed, especially for intrahepatic metastasis (radioembolization). But when there is also an extrahepatic dissemination, as in many cases, very few possibilities are available. Many studies showed that somatostatin receptors were over-expressed in tumor tissue, especially in the case of HCC, in contrast to healthy cells. Therefore, these receptors are promising for tumor targeting, either for imaging or for therapy. Based the recognition properties of these receptors, an alternative would be to develop radiotracers, so-called radiopharmaceuticals, to localize or destroy cancer cells selectively. This challenge consists in a three-parts system including a biomolecule (somatostatin analogue), a bifunctional chelating agent (BCA) and a radioactive isotope which delivers gamma or ß- emission. To be efficient, this system must be stable in vivo in order to imaging and/or irradiate selectively the targeted tumour mass. Among radioisotopes for targeted imaging/therapeutic applications, technetium-99m/rhenium-188 pair is very interesting, technetium-99m being the radioisotope of choice in nuclear medicine for imaging purposes (suitable physical properties), rhenium-188 being promising for therapeutic purposes. This work reports our first results related to each step of the development of the targeting radiopharmaceutical. From the synthesis of the chelating cavity, to the first in vitro studies, by way of all the bioconjugation work and the radiolabelling with 99mTc and 188Re.

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine : Nancy 1 : 2003. / Titre provenant de l'écran-titre.

Le carcinome basocellulaire (CBC) est le cancer le plus fréquent chez l’homme et est à lui seulresponsable de plus de cas que l’incidence cumulée de tous les autres cancers réunis. Des travauxrécents qui se sont intéressés aux étapes précoces de la tumorigenèse ont fourni un supportprécieux pour l’analyse du développement tumoral précoce. Ils ont mis en évidence le rôlecentral de gènes impliqués dans les progéniteurs embryonnaires des cellules souches du folliculepileux. Dans ce travail, nous avons étudié le rôle du facteur de transcription Sox9, un gène connupour être crucial dans la spécification de ces progéniteurs et dans les cellules souches du folliculepileux. Nous avons montré que Sox9 est requis pour la progression des lésions paranéoplasiquesvers les CBC et qu’il était également requis pour la maintenance des cellules cancéreuses. Enutilisant des méthodes d’analyse génomique de pointe, nous avons montré que Sox9 agit tantcomme un activateur que comme un répresseur de la transcription. Nous avons montré qu’ilpromeut directement le renouvellement cellulaire, l’invasion ainsi que la quiescence des cellulescancéreuses.Dans la seconde partie de ce travail, nous avons découvert le mécanisme d’action de l’inhibiteurd’Hedgehog Vismodegib sur les cellules cancéreuses. En utilisant des modèles génétiques desouris, nous avons montré que l’inhibiteur empêche la reprogrammation embryonnaire qui anormalement lieu durant la formation du CBC et qu’il promeut la différentiation des cellulescancéreuses vers une identité interfolliculaire, d’infundibulum ou sébacée suivant l’origine de cescellules. Nous avons également observé qu’une population caractérisée par l’expression du gèneLgr5 ainsi que par une activation de la voie de signalisation Wnt est plus résistante au Vismodegibchez la souris et nous avons trouvé des indices suggérant qu’il pourrait en être de même chezl’humain. Enfin, nous avons pu montrer que l’inhibition combinée des voies de signalisation Wntet Hedgehog annihile cette résistance et résulte en la disparition complète des CBCs. / Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine) / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est le principal cancer primitif du foie et est associé à un très mauvais pronostic. Notre équipe a mis en évidence que la Reptine et la Pontine, des AAA+ ATPases homologues, sont surexprimées dans le CHC par rapport au foie non tumoral. Au cours de ce travail de thèse, j’ai contribué à démontrer que l’extinction de la Reptine par l’induction de shRNA suffit à arrêter la croissance de tumeurs déjà établies, et même à induire leur régression dans des xénogreffes chez la souris. Ces résultats encourageants suggèrent que la Reptine pourrait être une cible thérapeutique dans le CHC. L’utilisation de siRNA en thérapeutique n’étant pas envisageable actuellement, il parait plus pertinent de tenter de cibler la Reptine via son activité ATPase. Le principal objectif de ma thèse était donc de déterminer l’implication de l’activité ATPase de la Reptine pour ses propriétés oncogéniques dans le CHC. Nos résultats ont montré que des mutants inactifs de la Reptine (D299N et E300G) ont un effet dominant négatif et ne sont pas capables de complémenter l’absence de la Reptine endogène, ce qui conduit à une diminution significative de la croissance des cellules HuH7 et Hep3B, et à une induction de l’apoptose. Ceci indique que l’activité ATPase de la Reptine est nécessaire pour la croissance et la survie des cellules de CHC. Enfin, grâce à une étude transcriptomique, nous avons identifié de nouveaux gènes dont l’expression est régulée par la Reptine et/ou la Pontine. Parmi ces gènes, certains pourraient être impliqués dans les fonctions oncogéniques de la Reptine et/ou de la Pontine dans le CHC. Finalement, ce travail a permis de mettre en évidence l’implication de l’activité ATPase de la Reptine, et d’apporter des éléments permettant de mieux comprendre le mécanisme d’action de la Reptine dans le CHC. / Hepatocellular carcinoma (HCC) is the main primary cancer of the liver and is often associated with poor prognosis. Our team has demonstrated that Reptin and Pontin, two AA+ ATPases, are overexpressed in HCC compared to normal liver. Moreover this overexpression is also associated with poor prognosis. In the course of my PhD, I demonstrated that shRNA-mediated silencing of Reptin is sufficient to inhibit tumor growth and even can promote their regression in xenografted mice. These encouraging results suggest that Reptin might represent a novel therapeutic target in HCC. As the use of siRNA as therapeutic tools is still debated, the targeting of Reptin enzymatic activity might represent a more relevant approach to impair its functions. To this end I first proposed to determine the involvement of Reptin ATPase activity in HCC oncogenesis. My results show that ATPase inactive Reptin mutants (D299N and E300G) play dominant negative roles toward Reptin functions and are unable to complement for the depletion of endogenous Reptin, thereby leading to a significant decrease of cell growth and to a significant increase of apoptosis in HuH7 and Hep3B cells. These results show that Reptin’s ATPase activity is necessary for HCC cell growth and survival. Moreover, using a transcriptomic approach that compared gene expression upon siRNA-mediated Reptin or Pontin silencing, we identified specific genes whose expression is under the control of those proteins and whose functions might provide mechanistic explanation to Reptin’s involvement in HCC. Collectively, the results obtained during my PhD thesis have characterized the contribution of Reptin ATPase activity to HCC growth and development and might represent a founding step in the understanding of Reptin’s biology in cancer development.