MILEO, M. C. A. Saxitoxinas GTX 2,3, dc-GTX 2,3 EC 1,2 em água de abastecimento público: estabilidade e validação de método analítico. 2014. 71 f. Dissertação (Mestrado em Engenharia Civil: Recursos Hídricos) – Centro de Tecnologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br) on 2015-04-08T18:22:00Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_mcamileo.pdf: 1283316 bytes, checksum: 0a2f75926bda8188865ddfbbf7384253 (MD5) / Approved for entry into archive by Marlene Sousa(mmarlene@ufc.br) on 2015-04-23T14:56:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_mcamileo.pdf: 1283316 bytes, checksum: 0a2f75926bda8188865ddfbbf7384253 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-23T14:56:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_mcamileo.pdf: 1283316 bytes, checksum: 0a2f75926bda8188865ddfbbf7384253 (MD5) Previous issue date: 2014-05-29 / The water quality of reservoirs for water supply has been compromised due to eutrophication. Eutrophication favors the proliferation of cyanobacteria, and therefore cyanotoxins that can be produced and released at any stage of cell growth of cyanobacteria. When these are in excess toxins in reservoirs and fountains, represent a hazard to public health and may cause poisoning in humans and animals. Due to several published reports that indicate fatal poisoning caused by cyanotoxins in Brazil and the world, the Brazilian health authorities have given more attention to the issue of intoxication by cyanotoxins, culminating with the inclusion of concentration limits for microcystin and saxitoxin to the concierge potability of the Ministry of Health 2914/2011. The methods described in the literature for the determination of saxitoxins, no reports of validation of the method for analyzing Goniautoxina 2.3 (GTX 2.3) were found Decarbamoil Goniautoxina 2,3-(2,3 dc-GTX) and N -sulfocarbamoil-Goniautoxina 2.3 (1.2 C) in water samples from reservoirs for public water supply. Within this context, this work aims to validate analytical methodology to identify and quantify 2.3 GTX, GTX-dc 2.3 and 1.2 C, using high-efficiency liquid chromatography with fluorescence detection (HPLC-FLD). Validation was performed in accordance with Resolution 889/2003 of ANVISA. The toxin C 1.2 has not remained stable and deteriorated rapidly, preventing its detection and completion of validation. For the 2.3 GTX and GTX-2.3 dc toxins, selectivity and linearity shown to be satisfactory. The values ​​obtained for the precision, accuracy, limits of detection and quantification of the instrument and the method presented is suitable values ​​allowed by Brazilian law, with the exception of accuracy in small concentrations. The method proved to be robust as the analysis of peak area and show sensitivity to temperature variation and the analysis of the retention time. From the final analysis of the results of each parameter, the method proved to be valid for the determination of 2.3 GTX and GTX-dc 2.3. / A qualidade da água dos reservatórios para abastecimento vem sendo comprometida devido ao processo de eutrofização. A eutrofização propicia a proliferação das cianobactérias, e consequentemente, cianotoxinas que podem ser produzidas e liberadas em qualquer estágio de crescimento celular das cianobactérias. Quando estas toxinas estão em excesso em reservatórios e mananciais, apresentam perigo à saúde pública, podendo causar intoxicações em seres humanos e em animais. Devido a vários relatos da literatura que indicam intoxicações fatais causadas por cianotoxinas no Brasil e no mundo, as autoridades sanitárias brasileiras deram mais atenção à questão de intoxicações por cianotoxinas, culminando com a inclusão de limites de concentração para a microcistina e para a saxitoxina na portaria de potabilidade do Ministério da Saúde 2914/2011. Entre os métodos descritos na literatura para a determinação de saxitoxinas, não foram encontrados relatos de validação do método para análise de Goniautoxina 2,3 (GTX 2,3), Decarbamoil-Goniautoxina 2,3 (dc-GTX 2,3) e N-sulfocarbamoil-Goniautoxina 2,3 (C 1,2) em amostras de água de reservatórios para abastecimento público. Dentro deste contexto, este trabalho tem como objetivo validar uma metodologia analítica para identificar e quantificar GTX 2,3, dc-GTX 2,3 e C 1,2, utilizando cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por fluorescência (CLAE-FLD). A validação foi executada de acordo com a Resolução 889/2003 da ANVISA. A toxina C 1,2 não se manteve estável e degradou-se rapidamente, impedindo a sua detecção e conclusão da sua validação. Para as toxinas GTX 2,3 e dc-GTX 2,3, a seletividade e a linearidade mostraram-se satisfatórias. Os valores obtidos para a precisão, exatidão, limites de detecção e quantificação do instrumento e do método apresentaram-se adequados aos valores permitidos pela legislação brasileira, com exceção da exatidão em pequenas concentrações. O método mostrou-se robusto quanto a análise de área do pico e apresentou sensibilidade a variação de temperatura quanto a análise do tempo de retenção. A partir da análise final dos resultados obtidos por cada parâmetro, o método mostrou-se valido para a determinação de GTX 2,3 e dc-GTX 2,3.

SILVINO, L. S. Validação da metodologia para análise de saxitoxina e dc-saxitoxina em água via derivatização pré-coluna. 2014. 75 f. Dissertação (Mestrado em Engenharia Civil: Saneamento Ambiental ) – Centro de Tecnologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014 / Submitted by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br) on 2015-04-08T18:53:04Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_lssilvino.pdf: 662669 bytes, checksum: cd0788efe65fda98ee5ce90bd0b1808c (MD5) / Approved for entry into archive by Marlene Sousa(mmarlene@ufc.br) on 2015-04-14T14:45:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_lssilvino.pdf: 662669 bytes, checksum: cd0788efe65fda98ee5ce90bd0b1808c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-14T14:45:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_lssilvino.pdf: 662669 bytes, checksum: cd0788efe65fda98ee5ce90bd0b1808c (MD5) Previous issue date: 2014-05-21 / The intensification of eutrophication in the watershed is caused by human actions and is the predominant cyanobacteria. In turn, these blooms affecting the quality of the water supply for the population, and, when disrupted, can release toxins (cyanotoxins) causing intoxication. The first in situ confirmation of the death by poisoning of humans with cyanotoxins in Brazil led the WHO to quickly publish new Ordinance on monitoring of raw water quality that incorporate new indicators, as the concentration of the cyanobacteria and their toxins in water sources used for drinking water supply. Thus, technologies for water treatment and for the identification and quantification of cyanotoxins have been going through a process of improvement. In this context, this study aimed to validate the method of reverse phase liquid chromatography with fluorescence detection (HPLC-FLD) and pre-column derivatization for detection and quantification of cyanotoxins saxitoxin (STX) and decarbamoil-saxitoxin (dc-STX) from the cyanobacterium Cylindrospermopsis raciborskii cultivation. This validation was performed to give credibility to the analytical method and the selected parameters were: selectivity, linearity, limit of detection (LOD) and quantification (LOQ), accuracy, precision and robustness. The results showed good selectivity, confirming that the method had the ability to measure the toxins in a Post Extraction matrix in the presence of other components. The analytical curves were constructed with nine points from the patterns of STX and dc-STX. The method showed linearity in the range of 4.5 to 150 mg L-1 for STX and 3.0 to 132 mg L-1 to dc-STX, and the correlation coefficient (r) greater than 0.99 for both toxins, showing that the method has the capacity to deliver results directly proportional to the concentration of analyte detected. The sensitivity was measured by the LD and LQ, obtaining satisfactory for the purposes of work results. The method achieved good precision and accuracy, whereas for STX and dc-STX different concentration levels were with values ​​within the ranges allowed by Brazilian standards for validation, and showed to be robust because it was insensitive to small variations possible to occur during analysis. In summary, one can consider that the method used for the detection and quantification of cyanotoxins STX and dc-STX showed satisfactory results, since the parameters analyzed to validate it were in conformity with the accepted values ​​in Brazilian standards. / A intensificação da eutrofização nos mananciais é provocada pelas ações antrópicas e tem como predominância as florações de cianobactérias. Por sua vez, estas florações alteram a qualidade da água para o abastecimento da população, e, ao serem lisadas, podem liberar toxinas (cianotoxinas) causando intoxicação. A primeira confirmação in loco da morte de seres humanos por intoxicação com cianotoxinas no Brasil levou à OMS a publicar rapidamente novas Portarias sobre o monitoramento da qualidade da água bruta que incorporaram novos indicadores, como a concentração das cianobactérias e de suas toxinas nos mananciais utilizados para abastecimento de água potável. Com isso, as tecnologias para o tratamento da água e para a identificação e quantificação das cianotoxinas vêm passando por um processo de aperfeiçoamento. Neste contexto, o presente trabalho objetivou validar o método de cromatografia líquida de fase reversa com detector de fluorescência (CLAE-FLD) e derivatização pré-coluna para detecção e quantificação das cianotoxinas saxitoxina (STX) e decarbamoil-saxitoxina (dc-STX) proveniente do cultivo da cianobactéria Cylindrospermopsis raciborskii. Esta validação foi realizada para dar credibilidade ao método analítico e os parâmetros selecionados foram: seletividade, linearidade, limite de detecção (LD) e quantificação (LQ), exatidão, precisão e robustez. Os resultados obtidos apresentaram boa seletividade, comprovando que o método possuía capacidade de medir as toxinas em uma matriz Pós Extração na presença de outros componentes. As curvas analíticas foram construídas com nove pontos a partir dos padrões de STX e dc-STX. O método apresentou uma linearidade no intervalo de 4,5 à 150 µg L-1 para STX e 3,0 à 132 µg L-1 para dc-STX, e o coeficiente de correlação (r) maior que 0,99 para as duas toxinas, mostrando que o método tem a capacidade de fornecer resultados diretamente proporcionais à concentração dos analitos detectados. A sensibilidade foi medida através do LD e LQ, obtendo resultados satisfatórios para os objetivos do trabalho. O método obteve boa precisão e exatidão, visto que para STX e dc-STX os diferentes níveis de concentração estavam com valores dentro dos intervalos permitidos pelas normas brasileiras de validação, e apresentou-se robusto, pois foi insensível a pequenas variações possíveis de ocorrer durante a análise. Em resumo, pode-se considerar que o método utilizado para a detecção e quantificação das cianotoxinas STX e dc-STX apresentou resultados satisfatórios, uma vez que os parâmetros analisados para validá-lo estavam em conformidade aos valores aceitos nas normas brasileiras.