Orientador: Anthony César de Souza Castilho / Resumo: A fim de mimetizar melhores condições do sistema in vivo, um meio de cultura mais proximo à composição do fluido do oviduto foi criado, denominado fluido ovidutal sintético (SOF), este foi formulado com base na análise bioquímica do oviduto das ovelhas. In vivo os momentos finais de maturação oocitária ocorrem em contato com o FO, já in vitro a maturação oocitária é realizada com protocolos de maturação 24h sem nenhuma alteração no meio de maturação. Portanto, o presente estudo investigou o impacto do meio de cultivo SOF durante as últimas quatro horas da maturação in vitro (MIV) e seus efeitos sobre a progressão meiótica e taxa de produção embrionária. Para tanto, os CCOs foram recuperados de ovário de vacas abatidas e maturados in vitro, nos seguintes grupos: SFB/ SFB; SFB/ SFB+SOF; BSA/BSA; BSA/BSA+SOF, todos submetidos há uma troca total de meio nas últimas quatro horas de maturação, adicionando o meio SOF de acordo com os grupos citados anteriormante. Os CCOs maturados foram fertilizados e cultivados em atmosfera e umidade controlada até o estágio de blastocisto (7 e 8 dias após a fertilização). A análise estatística foi realizada transformando os dados em arcoseno e as médias foram comparadas pelo teste T usando JMP (software JMP, SAS Institute Cary, NC). Diferenças significativas foram consideradas quando p≤ 0,05. O resultado obtido mostrou que o tratamento com SOF não tem efeito na progressão da meiose (p= 0,5944). Entretanto, quando analisamos as taxas embrionárias e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The oviduct and its secretion, the ovidutal fluid (OF), promote an adequate environment for the final maturation of the oocyte, sperm training, fertilization, transport and initial development of the embryo. In this context, in order to mimic better conditions of in vivo mechanisms, a culture medium similar to the composition of the oviduct fluid, called synthetic ovidutal fluid (SOF), was formulated based on biochemical analysis of the oviduct of sheep. Specifically, regarding the importance of OF for the final maturation of the oocyte in cattle, only the last four hours of oocyte maturation occur in the oviduct, which therefore pemits a new strategy of oocyte maturation in vitro (MIV) in the bovine species. Therefore, the present study aimed to investigate the impact of SOF culture medium during the last four hours of IVM and its effects on the meiotic progression and embryonic production rate. Therefore, the COCs were recovered from ovaries of slaughtered and matured cows in vitro, in base medium (composed of 199 MCT with Earles salts supplemented with pyruvate, amicacin, BSA, follicle stimulating hormone and luteinizing hormone, and another group in 199 MCT medium with Earles salts supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS), pyruvate, both in moist atmosphere at 5% CO2 for 20 hours (4 replicates with 20 COCs/group). In the last four hours of maturation, the medium was completely changed by adding the SOF medium. Matured COCs were fertilized and cultivated in a control... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Michele Mologni (mologni@unoeste.br) on 2018-08-30T12:23:36Z No. of bitstreams: 1 Alan Brunholi Giroto.pdf: 1342184 bytes, checksum: eec4738d5199b553c1a6ae446589328b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-30T12:23:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alan Brunholi Giroto.pdf: 1342184 bytes, checksum: eec4738d5199b553c1a6ae446589328b (MD5) Previous issue date: 2018-05-25 / In this study we aimed to evaluate how PAPP-A addition during in vitro maturation affected the IGF-1 quantification, transcript abundance related to cumulus oocyte complexes (COCs) and blastocysts quality, embryonic yield, as well as post-warming survival. We matured COCs through a 24 h treatment of TCM199 serum-free medium, either with PAPP-A supplementation (100 ng/mL; PAPP-A group) or without (control). Maturation medium was collected for IGF-1 quantification, and matured COCs were used for in vitro fertilization and culturing. The PAPP-A group exhibited 1.27 times higher IGF-1 concentrations than control. A comparison of in vitro embryo production across the groups found no difference in cleavage rate, embryonic yield, and survival, 3 and 24 h post-cryopreservation. In PAPP-A oocytes, only TXNRD1 was up-regulated. However, in PAPP-A cumulus cells, VNN1 and HDAC2 were up-regulated, while AGPAT1, AGPAT9, FASN, CASP3, EGFR, HAS2, IMPDH1, and MTIF3 were down-regulated. Finally, in PAPP-A blastocysts, CPT2, CASP9, DNMT3A, TFAM, and KRT8 were up-regulated, while ATF4, CASP3, and IFITM3 were down-regulated. We concluded that PAPP-A addition increased IGF-1 but did not influence embryonic yield and survival. Nevertheless, elevated IGF-1 could improve embryo competence through modulating expression of genes involved with lipid metabolism, oocyte competence and apoptosis in COCs and blastocysts. / A protéina sérica associada à prenhez (PAPP-A) é capaz de modular a biodisponibilidade do IGF-1 (fator de crescimento semelhante à insulina tipo 1) pela quebra das ligação com as proteínas de ligação do IGF (IGFBPs). O objetivo foi avaliar como a adição da PAPP-A durante a maturação in vitro (MIV) afetou a biodisponibilidade de IGF-1, a abundância de transcritos nos oócitos e células do cumulus e blastocistos, a produção embrionária e a sobrevivência pós aquecimento. Foi realizada a MIV de 24 h em complexos cumulus oócitos (CCOs – 20/grupo) oriundos de abatedouro, em meio TCM199 livre de soro, com adição de PAPP-A (100 ng/mL; grupo PAPP-A) ou sem (controle). O IGF-1 foi quantificado no meio de maturação e os CCOs maturados foram utilizados na fertilização e cultivo in vitro. Oócitos e células do cúmulus foram separados; e blastocistos foram congelados para a realização da expressão gênica. Taxa de clivagem e produção de blastocistos foram calculados como porcentagem e transformados para arco seno. Dados de expressão gênica foram normalizados com a média do grupo de controle. Os resultados foram analisados por test t, porém a criopreservação embrionária foi testada por Qui-quadrado (JMP software, SAS). Diferenças foram consideradas significativas quando p ≤ 0,05. O grupo PAPP-A apresentou 27% mais concentração de IGF-1 biodisponível. Na produção in vitro de embriões, não encontrou-se diferença na taxa de clivagem, produção e sobrevivência embrionária. Apenas o gene TXNRD1 mostrou maior expressão nos oócitos do grupo PAPP-A. No entanto, nas células do cumulus PAPP-A, o VNN1 e HDAC2 apresentaram maior expressão, enquanto os genes AGPAT1, AGPAT9, FASN, CASP3, EGFR, HAS2, IMPDH1 e MTIF3 apresentaram menor expressão. Nos blastocistos PAPP-A, os genes CPT2, CASP9, DNMT3A, TFAM e KRT8 apresentaram maior expressão, enquanto os genes ATF4, CASP3 e IFITM3 apresentaram menor expressão. Em conclusão, a adição de PAPP-A durante a MIV aumentou o IGF-1 biodisponível, mas não influenciou a produção e a sobrevivência embrionária após desvitrificação. No entanto, o aumento do IGF-1 biodisponível pode melhorar a competência embrionária através da modulação da expressão gênica em oócitos, células do cúmulus e blastocistos.