Submitted by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2014-11-13T16:54:59Z No. of bitstreams: 1 Mestrado_Liliane.pdf: 3975589 bytes, checksum: b28cad812013dd5908acfaa1941f39a0 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-13T16:54:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mestrado_Liliane.pdf: 3975589 bytes, checksum: b28cad812013dd5908acfaa1941f39a0 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Programa de Pós-Graduação em Vigilância Sanitária. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Corynebacterium ulcerans têm sido cada vez mais responsáveis por quadros de difteria zoonótica, além de outras infecções de humanos e de animais de companhia, incluindo cães. Uma vez que animais de companhia assintomáticos são capazes de transmitir o patógeno para os humanos em áreas urbanas e que escassas são as investigações sobre o potencial de virulência e o relato de casos dessas zoonoses em países em desenvolvimento, nesse sentido o presente estudo teve como objetivo o isolamento, caracterização e avaliação do potencial de virulência de amostras de C. ulcerans oriundas de animais domésticos domiciliados na área metropolitana do Rio de Janeiro. Os dados indicaram a presença de C. ulcerans em diferentes municípios. Além de humanos e de animais de abrigo, foram isoladas amostras não produtoras de toxina diftérica de cães assintomáticos domiciliados. As amostras isoladas (BR-AD41 e BR-AD61) apresentaram moderada sensibilidade a penicilina G e resistência a clindamicina. Os sistemas de fenotipagem Api-Coryne e Vitek 2 não permitiram a correta identificação de C. ulcerans em algumas oportunidades. Os microrganismos foram inicialmente caracterizados quanto à espécie e a presença do gene tox pela técnica de PCR multiplex. A confirmação do diagnóstico foi feita pelo sequenciamento dos genes 16S rRNA e rpoB. A relação genética entre amostras isoladas de humanos e cães assintomáticos no Rio de Janeiro (Brasil) foram analisadas pela técnica de eletroforese de campo pulsado (PFGE). Dentre os cinco pulsotipos demonstrados, os perfis IV e V exibindo ≥85% de similaridade foram expressos pelas amostras BR-AD41 e BR-AD61 de cães residentes em um mesmo município. A heterogeneidade dos pulsotipos indicaram endemicidade de C. ulcerans no Rio de Janeiro. Independente da capacidade de produção de toxina diftérica, o potencial de virulência para humanos de amostras de C. ulcerans foi evidenciado pela habilidade de produzir biofilme em superfícies abióticas inclusive catéteres de poliuretano e a presença de gene rpb que codifica a toxina Shiga-like. C. ulcerans mostrou capacidade de aderir, invadir e sobreviver no interior de células epiteliais humanas em níveis variados, independente da presença de TD. Adicionalmente, a afinidade de C. ulcerans ao fibrinogênio (Fbg), fibronectina (Fn) e colágeno tipo I de humanos e a capacidade de causar rede de fibrina e lesões cutâneas em murinos foram também demonstradas. Concluindo, potencial patogênico de natureza multifatorial foi demonstrado para amostras de C. ulcerans que também podem ser encontradas colonizando a população de cães domiciliados e portanto em contato estreito com o homem na região metropolitana do Rio de Janeiro. / Corynebacterium ulcerans have been increasingly responsible for zoonotic diphtheria and other infections in humans and companion animals, including dogs. Since asymptomatic pets are able to transmit the pathogen to humans in urban areas and there are few investigations about virulence factors and case reports of this emerging zoonosis in development countries, this study aimed the isolation, identification and detection of candidate virulence factors of C. ulcerans isolates from domestic animals living in the metropolitan area of Rio de Janeiro. Data indicated the ocurrence of C. ulcerans in different cities. Besides humans and dog shelter, sample of non-toxigenic isolates were detected from asymptomatic companion dogs. The isolates (BR-AD41 e BR-AD61) showed moderate susceptibility to penicillin G and resistance to clindamycin. In some cases, a correct identification of C. ulcerans by the phenotypic assays API-Coryne and Vitek 2 was not conceivable. Species and toxigenicity of micro-organisms were initially characterized by a multiplex PCR assay. The diagnoses confirmation was made by 16S rRNA and rpoB genes sequencing. The genetic relationship between human and asymptomatic dogs isolates was analyzed by pulsed-fiel gel electrophoresis (PFGE) assay. Among the five types classified, the types IV and V exhibited similarity ≥85% and were expressed by BR-AD41 and BR-AD61 isolates of companion dogs living in the same neighborhood. Heterogeneity of PFGE types indicated endemicity of C. ulcerans in Rio de Janeiro metropolitan area. Despite the ability of diphtheria toxin (DT) production, the virulence potential of C. ulcerans to humans was demonstrated by biofilm formation over abiotic surfaces, including polyurethane catheter and by the presence of rpb gene coding Shiga-like. Moreover, C. ulcerans demonstrated the ability to adhere to and survive within human epithelial cells at various levels, despite DT production. C. ulcerans affinity to human fibrinogen (Fbg), fibronectin (Fn) and type I collagen and formation of fibrinous skin lesions in mice were also observed. In conclusion, a multifactorial nature of the pathogenic potential was also demonstrated for C. ulcerans colonizing companion dogs in close contact to humans in the Rio de Janeiro metropolitan area.