Thèse doctorat : Médecine. Parasitologie : Université de Nantes : 2003. / Bibliogr. f. 197-217.

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Thesis (M.S.)--University of Wisconsin-Madison, 2001. / Typescript. eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references (leaves 81-86).

Os probióticos são produtos ou preparações que contém microrganismos viáveis, com concentrações definidas, capazes de alterar a microbiota intestinal do hospedeiro, exercendo efeitos benéficos a sua saúde. Os microrganismos mais usados para esta finalidade são as bactérias lácticas, destacando-se espécies de Lactobacillus. Apesar do avanço científico nesta área, poucos estudos são encontrados a respeito da ação probiótica sobre protozoários, como Cryptosporidium parvum, um parasito intestinal importante por causar uma das principais infecções oportunistas em indivíduos imunodebilitados, como aidéticos e transplantados. Os produtos probióticos podem ser uma alternativa para o tratamento da criptosporidiose, uma vez que, ainda, não há um tratamento eficaz contra esta parasitose. Sendo assim, o presente estudo visou avaliar a ação de cepas de Lactobacillus plantarum, L. acidophillus e L. delbruekii, na forma de pool, sobre Cryptosporidium parvum em camundongos imunossuprimidos. Os experimentos foram desenvolvidos utilizando-se 42 animais divididos em seis grupos: Controle - não imunossuprimidos, não infectados e não tratados; Imuno - imunossuprimidos, não infectados e não tratados; Não tratado - imunossuprimidos, infectados e não tratado; NTZ - imunossuprimidos, infectados e tratados com o antiprozotoário nitazoxanida (150mg/kg); PRO - imunossuprimidos, infectados e tratados com a preparação probiótica (3x10¹²UFC/mL); e, Preventivo - imunossuprimidos, tratados com a preparação probiótica e posteriormente infectados. Após 12 dias de imunossupressão os animais foram infectados com 1,6x106 oocistos e, os respectivos tratamentos iniciados após cinco dias da inoculação dos oocistos. A infecção foi analisada pela contagem de oocistos nas fezes, purificados pela técnica de sedimentação de formol-éter. A colonização intestinal pelos lactobacilos foi analisada pela técnica de \"pour plate\" em ágar MRS com antibiótico Rifampcina. O desempenho nutricional dos camundongos foi analisado por meio da conversão alimentar, uma relação entre a quantidade de ração consumida e o ganho de peso dos animais. Os resultados demonstraram que os animais que receberam o tratamento preventivo com os probióticos apresentaram uma eliminação de oocistos significativamente menor (P<=0,05) que os demais grupos infectados. O tratamento com a preparação probiótica, pós-infecção, também se mostrou eficaz, pois todos os animais eliminaram a infecção. Estes resultados podem ser explicados por meio do mecanismo de ação conhecido como exclusão competitiva, devido a colonização do trato gastrointestinal ou, pela produção de substância antimicrobiana, produzida por Lactobacillus, que apresentou ação sobre os oocistos. Observou-se, também, que os animais tratados com probióticos tiveram um melhor desempenho nutricional. Estes resultados confirmam a hipótese que microrganismos com propriedades probióticas representam uma forma alternativa, e promissora, na prevenção e tratamento da criptosporidiose. / The probiotics are products or preparation containing viable microorganisms, in defined concentrations, capable of change the host\'s microbiota, exerting beneficial effects on the host\'s health. The most important microorganisms which present these properties belong to the group of lactic acid bacterium, mainly species of Lactobacillus. Even though technological advances in this area, few studies are found concerning the action probiotics on protozoan, as Cryptosporidium parvum, an important intestinal parasite which causes one of the main opportunist infection in immunodeficient individuals, such as AIDS and transplanted patients. The probiotics products can be an alternative to treatment against cryptosporidiosis, since, so far an effective treatment against this infection has not been found. Therefore, the present study aimed to evaluate the action of strains of Lactobacillus plantarum, L. acidophillus and L. delbruekii, as a pool, on Cryptosporidium parvum in immunosuppressed mice. The experiments were developed using 42 animals separated in six groups: Control - the mices were not immunosuppressed, no infected and no treated; Immuno - immunosuppressed, no infected and no treated; No treated - immunosuppressed, infected and no treated; NTZ - immunosuppressed, infected and treated with a Nitazoxanide antimicrobial (150mg/kg); PRO - immunosuppressed, infected and treated with a preparation probiotic (3x10¹²UFC/mL); and, Preventive - immunosuppressed, treated with the probiotic preparation and then infected. After 12 days of immunosuppression procedure the animals were infected with 1,6x106 oocysts and, the respective treatments were started after five days of the inoculation of the oocysts. The infection was analyzed by counting of purified oocysts by tecnic of formol ether sedimentation of the feces. The intestinal colonization by lactobacilli was analyzed by pour plate technique on MRS agar containing Rifampicin antibiotic. The nutritional performance of the animals was calculated based on the rate of feed conversion, which is a relation between the amount of food consumed and the body weight gained by each animal. The results showed that the animals that received a preventive treatment with the probiotic preparation presented an elimination of oocysts lower than (P<=0,05) the other infected groups. The treatment with the probiotic preparation, post-infection also showed to be effective, once all the animals eliminated the infection. These results can be explained by competitive exclusion due to the colonization of gastrointestinal tract of the animals or by production of antimicrobial substances produced by Lactobacillus, which presented somehow any action on oocysts. It was also observed that the treated animals with the probiotic preparation presented better nutritional performance. These results confirm the hypothesis that the microorganisms which present probiotic properties represent an alternative way and promising, in the preventing and treatment of cryptosporidiosis.

Os probióticos são produtos ou preparações que contém microrganismos viáveis, com concentrações definidas, capazes de alterar a microbiota intestinal do hospedeiro, exercendo efeitos benéficos a sua saúde. Os microrganismos mais usados para esta finalidade são as bactérias lácticas, destacando-se espécies de Lactobacillus. Apesar do avanço científico nesta área, poucos estudos são encontrados a respeito da ação probiótica sobre protozoários, como Cryptosporidium parvum, um parasito intestinal importante por causar uma das principais infecções oportunistas em indivíduos imunodebilitados, como aidéticos e transplantados. Os produtos probióticos podem ser uma alternativa para o tratamento da criptosporidiose, uma vez que, ainda, não há um tratamento eficaz contra esta parasitose. Sendo assim, o presente estudo visou avaliar a ação de cepas de Lactobacillus plantarum, L. acidophillus e L. delbruekii, na forma de pool, sobre Cryptosporidium parvum em camundongos imunossuprimidos. Os experimentos foram desenvolvidos utilizando-se 42 animais divididos em seis grupos: Controle - não imunossuprimidos, não infectados e não tratados; Imuno - imunossuprimidos, não infectados e não tratados; Não tratado - imunossuprimidos, infectados e não tratado; NTZ - imunossuprimidos, infectados e tratados com o antiprozotoário nitazoxanida (150mg/kg); PRO - imunossuprimidos, infectados e tratados com a preparação probiótica (3x10¹²UFC/mL); e, Preventivo - imunossuprimidos, tratados com a preparação probiótica e posteriormente infectados. Após 12 dias de imunossupressão os animais foram infectados com 1,6x106 oocistos e, os respectivos tratamentos iniciados após cinco dias da inoculação dos oocistos. A infecção foi analisada pela contagem de oocistos nas fezes, purificados pela técnica de sedimentação de formol-éter. A colonização intestinal pelos lactobacilos foi analisada pela técnica de \"pour plate\" em ágar MRS com antibiótico Rifampcina. O desempenho nutricional dos camundongos foi analisado por meio da conversão alimentar, uma relação entre a quantidade de ração consumida e o ganho de peso dos animais. Os resultados demonstraram que os animais que receberam o tratamento preventivo com os probióticos apresentaram uma eliminação de oocistos significativamente menor (P<=0,05) que os demais grupos infectados. O tratamento com a preparação probiótica, pós-infecção, também se mostrou eficaz, pois todos os animais eliminaram a infecção. Estes resultados podem ser explicados por meio do mecanismo de ação conhecido como exclusão competitiva, devido a colonização do trato gastrointestinal ou, pela produção de substância antimicrobiana, produzida por Lactobacillus, que apresentou ação sobre os oocistos. Observou-se, também, que os animais tratados com probióticos tiveram um melhor desempenho nutricional. Estes resultados confirmam a hipótese que microrganismos com propriedades probióticas representam uma forma alternativa, e promissora, na prevenção e tratamento da criptosporidiose. / The probiotics are products or preparation containing viable microorganisms, in defined concentrations, capable of change the host\'s microbiota, exerting beneficial effects on the host\'s health. The most important microorganisms which present these properties belong to the group of lactic acid bacterium, mainly species of Lactobacillus. Even though technological advances in this area, few studies are found concerning the action probiotics on protozoan, as Cryptosporidium parvum, an important intestinal parasite which causes one of the main opportunist infection in immunodeficient individuals, such as AIDS and transplanted patients. The probiotics products can be an alternative to treatment against cryptosporidiosis, since, so far an effective treatment against this infection has not been found. Therefore, the present study aimed to evaluate the action of strains of Lactobacillus plantarum, L. acidophillus and L. delbruekii, as a pool, on Cryptosporidium parvum in immunosuppressed mice. The experiments were developed using 42 animals separated in six groups: Control - the mices were not immunosuppressed, no infected and no treated; Immuno - immunosuppressed, no infected and no treated; No treated - immunosuppressed, infected and no treated; NTZ - immunosuppressed, infected and treated with a Nitazoxanide antimicrobial (150mg/kg); PRO - immunosuppressed, infected and treated with a preparation probiotic (3x10¹²UFC/mL); and, Preventive - immunosuppressed, treated with the probiotic preparation and then infected. After 12 days of immunosuppression procedure the animals were infected with 1,6x106 oocysts and, the respective treatments were started after five days of the inoculation of the oocysts. The infection was analyzed by counting of purified oocysts by tecnic of formol ether sedimentation of the feces. The intestinal colonization by lactobacilli was analyzed by pour plate technique on MRS agar containing Rifampicin antibiotic. The nutritional performance of the animals was calculated based on the rate of feed conversion, which is a relation between the amount of food consumed and the body weight gained by each animal. The results showed that the animals that received a preventive treatment with the probiotic preparation presented an elimination of oocysts lower than (P<=0,05) the other infected groups. The treatment with the probiotic preparation, post-infection also showed to be effective, once all the animals eliminated the infection. These results can be explained by competitive exclusion due to the colonization of gastrointestinal tract of the animals or by production of antimicrobial substances produced by Lactobacillus, which presented somehow any action on oocysts. It was also observed that the treated animals with the probiotic preparation presented better nutritional performance. These results confirm the hypothesis that the microorganisms which present probiotic properties represent an alternative way and promising, in the preventing and treatment of cryptosporidiosis.

Orientadores: José Euclides Stipp Paterniani, Cristiano de Mello Gallep / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Agrícola / Made available in DSpace on 2018-08-25T21:52:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_SamuelRicardodos_D.pdf: 51294263 bytes, checksum: 55a8bb93513a62aa29e85fe9467412c6 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Giardia spp. e Cryptosporidium spp. são organismos desafiadores em monitoramento ambiental, podendo afetar os seres humanos e os animais com grandes impactos na saúde pública. Métodos para detectar esses organismos são descritos na literatura ¿ p.ex.: o método EPA 1623.1. No entanto, muitos não são capazes de detectar a viabilidade destes parasitos. Este trabalho avaliou o uso de marcadores fluorescentes combinados com a técnica de detecção de fluorescência retardada na detecção de viabilidade de Giardia intestinalis e Cryptosporidium parvum. Testes de incubação com 6-carboxifluorceina-succinimidil-diacetato-éster (CFDA-SE), C12-resazurina e SYTOX Green foram desenvolvidos com cistos de G. intestinalis e oocistos de C. parvum. Medidas de fluorescência retardada em câmara escura projetada e em dispositivo comercial foram aplicados em amostras purificadas e concentradas de G. intestinalis após incubação com CFDA-SE. Grupos contendo cistos vivos e infecciosos, mortos a 100° C, estressados com luz UV-C e envelhecidos foram analisados via fluorescência retardada e microscopia de epifluorescência em oito séries experimentais. Os resultados demonstram que (oo)cistos vivos e infecciosos não são marcados com os marcadores fluorescentes. Dupla marcação em (oo)cistos mortos é observada após 30 minutos de incubação com C12-resazurina 5,0 ?M e SYTOX Green 100 nM. (Oo)cistos mortos apresentam marcação verde após incubação de CFDA-SE 5,0 ?M. O envelhecimento da amostra foi acompanhado pelo aumento da taxa de marcação celular com cistos apresentando ~50% de marcação aos 30 dias de idade e ~100% aos 50 dias de idade. Testes com fluorescência retardada demonstram que cistos vivos e com idade inferior a 20 dias apresentam intensidades superiores aos cistos mortos e estressados após excitação com 365 nm. A excitação com 365 nm apresentou correlação R2 > 95% após análise de cinética de decaimento com modelo exponencial de segunda ordem. Os dados indicam que o decaimento da fluorescência retardada é acompanhado por duas componentes k1 e k2 onde k2 = 5?k1, estando estas conectadas com as condições fisiológicas da Giardia. O procedimento pode ser efetuado em 10 passos laboratoriais em aproximadamente 60 minutos de análise. A fluorescência retardada apresenta futuro promissor na análise de viabilidade de parasitos em amostras purificadas / Abstract: Giardia spp. and Cryptosporidium spp. are challenging and important organisms in modern environmental monitoring. These protozoa can affect humans and animals seriously, as reflection of sanitation problems in water quality control, with huge impact over economics and public health. Methods to detect such organisms are well described in literature - i.e. the EPA Method 1623.1 and AWWA 2012. But those ones are not able to detect infectivity. For that, the usual procedures include infection of animal model leading to at least one week for confirming infectivity. Some research with dye probes are being developed in order to provide useful, reliable and low cost procedures for detection of protozoa viability, i.e. enabling to distinguish dead samples cells from living ones. This work describes the screening tests for viability detection of protozoa samples - Giardia intestinalis and Cryptosporidium parvum - using carboxifluorcein-succinimidyl-diacetate-ester (CFDA-SE), C12-resazurin and SYTOX Green. Living, heat-killed and UV-C stressed (oo)cysts were analyzed using these chemical probes. G. intestinalis in concentrated samples and stained with CFDA-SE were analysed by fluorescence imaging as well as by delayed fluorescence (DF) after UV-A and white-light excitation. The weak DF profiles were detected in photon-counting setups, in 8 series of tests for intact, for heat-killed and for UV-C-stressed samples are shown. Results show that fresh, i.e. living and viable (oo)cysts cannot be stained by the mentioned neither with CFDA-SE nor C12-resazurin and SYTOX Green dyes. Double-marked (oo)cysts are observed when C12-resazurin and SYTOX Green are applied to old cysts as well to dead ones. Aged samples show increasing number of stained organisms: 30-day-old with ~50% while samples older than 50 days with almost 100% marked. Intact samples present stronger fluorescence and DF than the stressed ones, with good replication after UV-A excitation. After excitation @365nm samples present DF better fitted by double exponential decay kinetics, with the decay constant k2 five times higher than the k1 constant. The procedure can be easily reproduced in 10 steps, taking around 1h of laboratorial work with purified samples / Doutorado / Agua e Solo / Doutor em Engenharia Agrícola

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Thesis (M.S.)--University of South Florida, 2007. / Title from PDF of title page. Document formatted into pages; contains 65 pages. Includes bibliographical references.

Mestre -- Escola Nacional de Saude Publica, Rio de Janeiro, 2003.

Made available in DSpace on 2012-09-06T01:12:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 542.pdf: 1674420 bytes, checksum: fbaa2fa72596ec741deb9339aba58df9 (MD5) Previous issue date: 2003 / A qualidade e segurança da água são questões que estão chamando a atenção das autoridades em saúde pública. Várias espécies do gênero Cryptosporidium foram descritas, mas somente o Cryptosporidium parvum têm sido associado às doenças gastrintestinais (...). A criptosporidiose pode ser fatal em imunocomprometidos e pode debilitar severamente indivíduos imunocompetentes. Outro agravante dá-se pelo fato de oocistos de Cryptosporidium serem resistentes às pressões ambientais, podendo sobreviver por vários meses no ambiente aquático e são também resistentes à desinfecção por cloro utilizada no tratamento convencional de água (MULLER, 2000). Atualmente existem diferentes métodos propostos, mais ainda não padronizados. A ausência de uma metodologia padronizada para detecção de oocistos de Cryptosporidium dificulta a viabilização de um monitoramento ou pesquisa deste patógeno emergente. No Brasil, os dados acerca da ocorrência deste parasito em água de abastecimento são limitados. A portaria 1469 de 2000, que em seu padrão microbiológico de poilidade da água para consumo humano recomenda inclusão de pesquisa de organismos patogênicos, com o objetivo de atingir, como meta, um padrão de ausência, dentre outros, oocistos de Cryptosporidium spp. Recomenda-se, mundialmente, o monitoramento de Cryptosporidium em sistema de água potável que abastecem cidades com população entre 10000 e 100000 pessoas. Entretanto, os métodos normalmente usados na determinação de oocisto na água são ineficientes e extremamente variáveis, citando como exemplos a identificação de falsos-positivos por interferências com algas e outras espécies de protozoários (FRANCO et al., 2001). Conclui-se que a inexistência ou inadequação do tratamento de dejetos pode gerar a contaminação dos mananciais de água, podendo veicular e disseminar C. parvum. Em face disso, torna-se fundamental o desenvolvimento e aprimoramento de métodos diagnósticos de detecção.