Orientador: Semiramis Guimarães Ferraz Viana / Banca: Teresa Cristina Goulart de Oliveira Sequeira / Banca: Regina Maura Bueno Franco / Resumo: O presente estudo foi desenvolvido com o objetivo de identificar e caracterizar os produtos de excreção/ secreção (PE/S) de trofozoítos de Giardia duodenalis de uma cepa axênica isolada no Brasil (BTU-11), tendo por referência a cepa padrão Portland 1 (P-1) isolada nos Estados Unidos. Os PE/S foram obtidos a partir dos sobrenadantes de cultura de trofozoítos mantidos em meio RPMI por 6 horas a 37oC. Os PE/S de cada cepa foram analisados quanto ao perfil eletroforético em géis de poliacrilamida (SDSPAGE) e a atividade proteolítica foi avaliada em géis contendo gelatina e colágeno tipo I a 0,2% e em ensaios empregando hemoglobina a 0,1%. A caracterização das proteases dos PE/S foi realizada em ensaios para avaliar o efeito de inibidores sintéticos de cisteína, serina, metalo e aspartil proteases sobre a degradação de cada substrato testado. A análise dos perfis protéicos revelou padrões simples, porém distintos quanto ao número de bandas de proteínas, visualizando nos PE/S das cepas P-1 e BTU-11, respectivamente, seis e quatro bandas com massas moleculares distribuídas na faixa de 123 a 28 kDa. Quanto à atividade proteolítica, todos os substratos foram degradados por enzimas presentes nos PE/S. A atividade gelatinolítica foi observada na faixa de 77 a 18 kDa, destacando-se seis bandas evidentes de aproximadamente 77, 66, 54, 52, 21 e 18 kDa. A degradação do colágeno foi detectada na faixa de 145 a 18 kDa, sendo que as zonas de proteólise de maior evidência foram observada nas faixas de 145 a 82 kDa e de 56 a 34 kDa, onde destacam-se as bandas de 145, 96, 82 e 34 kDa. A análise dos padrões de hidrólise da hemoglobina demonstrou similaridade entre as cepas e revelou degradação total da cadeia dimérica e lise parcial da cadeia monomérica. A atividade gelatinolítica e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present investigation was undertaken to examine the protease activity in excretory/secretory (E/S) products of Giardia duodenalis trophozoites of an axenic Brazilian strain (BTU-11) and the reference strain Portland 1 (P1). E/S products in conditioned medium by trophozoites of each strain were tested in SDS-polyacrylamide gel electrophoresis for the protein profiles, and the proteases activity was analyzed using substrate gelatin and collagen impregnated SDS-PAGE and haemoglobin assay. The proteases characterization was based on inhibition assays including synthetic inhibitors for cysteine, serine, metallo and aspartic proteases. Electrophoresis analysis of E/S products revealed a banding pattern composed by few bands (4-6 bands) in the migration region of 123 to 28 kDa. Proteolytic products were detected in the conditioned medium by trophozoites of both assayed strains. In the gels containing copolymerized gelatin and collagen, E/S products promoted degradation of both substrates and the most evident proteolysis zones were distributed in the migration regions of 77 to 18 kDa and 145 to 18 kDa, respectively, in the patterns of gelatinolytic and collagenolytic activities. Degradation of haemoglobin was also observed, and the pattern of hydrolysis was similar in both E/S products assayed. Inhibiton assays showed that the main proteolytic activity in E/S products is due to cysteine proteases although the presence of serine proteases was also indicated, mainly in the hydrolysis of haemoglobin. These observations are relevants, especially ...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Semíramis Guimarães Ferraz Viana / Banca: Ana Julia Urias / Banca: Regina Maura Bueno Franco / Banca: Paulo Câmara Marques Pereira / Banca: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Resumo: O presente estudo foi realizado para investigar a epidemiologia de parasitas intestinais em uma população de escolares do município de Pratânia, Estado de São Paulo, e caracterizar geneticamente os isolados de Giardia duodenalis obtidos dos indivíduos desse grupo. Amostras de fezes de 431 escolares da rede municipal com idade de três a 10 anos e formalmente autorizados a participar do estudo foram colhidas e processadas pelo método de centrífugo-flutuação e pelo kit TF-test®. Além do exame coproparasitológico, as crianças foram submetidas a avaliações clínica e antropométrica e aos pais e/ou responsáveis foi aplicado um questionário para a obtenção de dados epidemiológicos. As crianças parasitadas foram encaminhadas para tratamento de acordo com a prescrição médica e, após 15 a 21 dias do tratamento, novas amostras de fezes foram analisadas para o controle de cura. Para a caracterização genotípica, o DNA extraído de 131 (39 extraídas de amostras positivas e 92 de amostras negativas para Giardia) foi amplificado utilizando técnicas baseadas em PCR para a amplificação das seqüências correspondentes aos genes gdh (glutamato desidrogenase) e tpi (triose-fosfato-isomerase) e os fragmentos amplificados foram seqüenciados. Os seguintes enteroparasitas detectados e suas respectivas freqüências foram: Entamoeba coli (14,2%), Cryptosporidium (11,2%), Giardia duodenalis (9,3%), Endolimax nana (3,3%), Blastocystis hominis (1,62%), Enterobius vermicularis (2,3%), Trichuris trichiura (1,62%), Ascaris lumbricoides (0,7%), e Hymenolepis nana (0,2%). Nas crianças com enteroparasitas, crianças portadoras de infecções por Cryptosporidium, por helmintos e por protozoários comensais, as frequências de infecções foram significativamente mais elevadas quando nas famílias os responsáveis não eram alfabetizados ou se o tempo de escolaridade... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study was conducted to investigate the epidemiology of intestinal parasites in a population of school children of Pratânia, Estado de Sao Paulo, and genetically characterize isolates of Giardia duodenalis obtained from individuals in this group. Stool samples from 431 schoolchildren aged three to 10 years and formally authorized to participate in the study were collected and processed by means of flotation and the TF-test kit ®. In addition to fecal examination, the children underwent clinical and anthropometric evaluation and parents or guardians received a questionnaire to get additional data. Children positive for intestinal parasites were referred for treatment in accordance with the prescriptions and, after 15 to 21 days of treatment, new samples were analyzed for the control of cure. To genetic characterization, DNA extracted from 131 (39 extracted from positive samples and 92 samples negative for Giardia) was amplified using techniques based on PCR amplification of sequences corresponding to genes gdh (glutamate dehydrogenase) and tpi (triosephosphate isomerase) and amplified fragments were sequenced. The intestinal parasites were detected following frequencies: Entamoeba coli (14.2%), Cryptosporidium (11.2%), Giardia duodenalis (9.3%), Endolimax nana (3.3%), Blastocystis hominis (1, 62%), Enterobius vermicularis (2.3%), Trichuris trichiura (1.62%), Ascaris lumbricoides (0.7%), and Hymenolepis nana (0.2%). In children with intestinal parasites, children with Cryptosporidium infection, helminth and protozoan, the frequencies of infections were significantly higher in families where those responsible were illiterate or if the level of education was no more than five years (P < 0.05). With regard to anthropometric measurements, most children presented to the height / age index, weight / age and weight / height values of z-scores within the normal range... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-26Bitstream added on 2014-06-13T20:22:14Z : No. of bitstreams: 1 coradi_st_dr_botfm.pdf: 625344 bytes, checksum: 6449eeacb0db26adc19ebeca9818d24f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O presente estudo foi realizado para investigar a epidemiologia de parasitas intestinais em uma população de escolares do município de Pratânia, Estado de São Paulo, e caracterizar geneticamente os isolados de Giardia duodenalis obtidos dos indivíduos desse grupo. Amostras de fezes de 431 escolares da rede municipal com idade de três a 10 anos e formalmente autorizados a participar do estudo foram colhidas e processadas pelo método de centrífugo-flutuação e pelo kit TF-test®. Além do exame coproparasitológico, as crianças foram submetidas a avaliações clínica e antropométrica e aos pais e/ou responsáveis foi aplicado um questionário para a obtenção de dados epidemiológicos. As crianças parasitadas foram encaminhadas para tratamento de acordo com a prescrição médica e, após 15 a 21 dias do tratamento, novas amostras de fezes foram analisadas para o controle de cura. Para a caracterização genotípica, o DNA extraído de 131 (39 extraídas de amostras positivas e 92 de amostras negativas para Giardia) foi amplificado utilizando técnicas baseadas em PCR para a amplificação das seqüências correspondentes aos genes gdh (glutamato desidrogenase) e tpi (triose-fosfato-isomerase) e os fragmentos amplificados foram seqüenciados. Os seguintes enteroparasitas detectados e suas respectivas freqüências foram: Entamoeba coli (14,2%), Cryptosporidium (11,2%), Giardia duodenalis (9,3%), Endolimax nana (3,3%), Blastocystis hominis (1,62%), Enterobius vermicularis (2,3%), Trichuris trichiura (1,62%), Ascaris lumbricoides (0,7%), e Hymenolepis nana (0,2%). Nas crianças com enteroparasitas, crianças portadoras de infecções por Cryptosporidium, por helmintos e por protozoários comensais, as frequências de infecções foram significativamente mais elevadas quando nas famílias os responsáveis não eram alfabetizados ou se o tempo de escolaridade... / This study was conducted to investigate the epidemiology of intestinal parasites in a population of school children of Pratânia, Estado de Sao Paulo, and genetically characterize isolates of Giardia duodenalis obtained from individuals in this group. Stool samples from 431 schoolchildren aged three to 10 years and formally authorized to participate in the study were collected and processed by means of flotation and the TF-test kit ®. In addition to fecal examination, the children underwent clinical and anthropometric evaluation and parents or guardians received a questionnaire to get additional data. Children positive for intestinal parasites were referred for treatment in accordance with the prescriptions and, after 15 to 21 days of treatment, new samples were analyzed for the control of cure. To genetic characterization, DNA extracted from 131 (39 extracted from positive samples and 92 samples negative for Giardia) was amplified using techniques based on PCR amplification of sequences corresponding to genes gdh (glutamate dehydrogenase) and tpi (triosephosphate isomerase) and amplified fragments were sequenced. The intestinal parasites were detected following frequencies: Entamoeba coli (14.2%), Cryptosporidium (11.2%), Giardia duodenalis (9.3%), Endolimax nana (3.3%), Blastocystis hominis (1, 62%), Enterobius vermicularis (2.3%), Trichuris trichiura (1.62%), Ascaris lumbricoides (0.7%), and Hymenolepis nana (0.2%). In children with intestinal parasites, children with Cryptosporidium infection, helminth and protozoan, the frequencies of infections were significantly higher in families where those responsible were illiterate or if the level of education was no more than five years (P < 0.05). With regard to anthropometric measurements, most children presented to the height / age index, weight / age and weight / height values of z-scores within the normal range... (Complete abstract click electronic access below)

Includes copies of other papers co-authored by the author at end of thesis. Includes bibliographical references (leaves 241-265) A rapid sampling technique has been adapted and used to measure nucleoside transport in a human-derived isolate of the intestinal protozoan parasite Giardia intestinalis (syn. G. lamblia)

Thesis (Ph.D.) -- University of Adelaide, Department of Microbiology and Immunology, 1994. / Includes copies of other papers co-authored by the author at end of thesis. Includes bibliographical references (leaves 241-265).

Also published as the author's Thesis (Ph. D.)--University of California, 1918. / Cover title. "Literature cited": p. 133.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-04-28Bitstream added on 2014-06-13T20:31:23Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_tb_me_botfm.pdf: 1860474 bytes, checksum: ed09ce9cf8d1807484fc0313de2945e1 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O presente estudo foi desenvolvido com o objetivo de identificar e caracterizar os produtos de excreção/ secreção (PE/S) de trofozoítos de Giardia duodenalis de uma cepa axênica isolada no Brasil (BTU-11), tendo por referência a cepa padrão Portland 1 (P-1) isolada nos Estados Unidos. Os PE/S foram obtidos a partir dos sobrenadantes de cultura de trofozoítos mantidos em meio RPMI por 6 horas a 37oC. Os PE/S de cada cepa foram analisados quanto ao perfil eletroforético em géis de poliacrilamida (SDSPAGE) e a atividade proteolítica foi avaliada em géis contendo gelatina e colágeno tipo I a 0,2% e em ensaios empregando hemoglobina a 0,1%. A caracterização das proteases dos PE/S foi realizada em ensaios para avaliar o efeito de inibidores sintéticos de cisteína, serina, metalo e aspartil proteases sobre a degradação de cada substrato testado. A análise dos perfis protéicos revelou padrões simples, porém distintos quanto ao número de bandas de proteínas, visualizando nos PE/S das cepas P-1 e BTU-11, respectivamente, seis e quatro bandas com massas moleculares distribuídas na faixa de 123 a 28 kDa. Quanto à atividade proteolítica, todos os substratos foram degradados por enzimas presentes nos PE/S. A atividade gelatinolítica foi observada na faixa de 77 a 18 kDa, destacando-se seis bandas evidentes de aproximadamente 77, 66, 54, 52, 21 e 18 kDa. A degradação do colágeno foi detectada na faixa de 145 a 18 kDa, sendo que as zonas de proteólise de maior evidência foram observada nas faixas de 145 a 82 kDa e de 56 a 34 kDa, onde destacam-se as bandas de 145, 96, 82 e 34 kDa. A análise dos padrões de hidrólise da hemoglobina demonstrou similaridade entre as cepas e revelou degradação total da cadeia dimérica e lise parcial da cadeia monomérica. A atividade gelatinolítica e... / The present investigation was undertaken to examine the protease activity in excretory/secretory (E/S) products of Giardia duodenalis trophozoites of an axenic Brazilian strain (BTU-11) and the reference strain Portland 1 (P1). E/S products in conditioned medium by trophozoites of each strain were tested in SDS-polyacrylamide gel electrophoresis for the protein profiles, and the proteases activity was analyzed using substrate gelatin and collagen impregnated SDS-PAGE and haemoglobin assay. The proteases characterization was based on inhibition assays including synthetic inhibitors for cysteine, serine, metallo and aspartic proteases. Electrophoresis analysis of E/S products revealed a banding pattern composed by few bands (4-6 bands) in the migration region of 123 to 28 kDa. Proteolytic products were detected in the conditioned medium by trophozoites of both assayed strains. In the gels containing copolymerized gelatin and collagen, E/S products promoted degradation of both substrates and the most evident proteolysis zones were distributed in the migration regions of 77 to 18 kDa and 145 to 18 kDa, respectively, in the patterns of gelatinolytic and collagenolytic activities. Degradation of haemoglobin was also observed, and the pattern of hydrolysis was similar in both E/S products assayed. Inhibiton assays showed that the main proteolytic activity in E/S products is due to cysteine proteases although the presence of serine proteases was also indicated, mainly in the hydrolysis of haemoglobin. These observations are relevants, especially ...(Complete abstract click electronic access below)

Thèse de doctorat : Biologie Santé Environnement. Chimie et microbiologie de l'eau : Nancy 1 : 2005. / Titre provenant de l'écran-titre.

Orientador: Semiramis Guimarâes Ferraz Viana / Banca: Carlos Magno Castelo Branco Fortaleza / Banca: Jose Ricardo Jensen / Resumo: As enteroparasitoses ainda persistem como problema de saúde pública, sobretudo nos países em desenvolvimento, onde o protozoário Giardia duodenalis (sin. Giardia intestinalis, Giardia lamblia) destaca-se como uma das causas mais frequentes de diarreia em crianças. Assim, no presente estudo investigou-se a prevalência de das infecções causadas por Giardia e outros parasitas intestinais e funcionários da Creche e Escola Municipal de Educlação Infantil (CEMEI) do distrito de Vitoriana, Botucatu-SP, incluindo-se também os familiares e cães das crianças cujos exames de fezes foram positivos para Giardia. Paralelamente, por meio de análise multilocular empregando os genes-alvo beta-giardina (bg), triose fosfato isomerase (tpi) e glutamato desiderogenase (gdh), caracterizou-se geneticamente os isolados de G. duodenalis detectados nessa população. Para isso, foram analisadas três amostras de fezes de 123 crianças (0 a 6 anos), 14 funcionários, 44 familiares e 20 cães. As amostras foram processadas por centrífugo-sedimentação e centrífugo-flutuação e examinadas em microscópio óptico. Parasitas intestinais foram identificados em 50 das 123 amostras de fezes de crianças (41,6%), e parasitismo por Giardia foi detectado em 21,9% das crianças (27/123). Das 27 famílias que tinham crianças parasitadas por Giardia, apenas 16 (44 indivíduos) forneceram amostras de fezes. Nestas, cistos de Giardia não foram detectados em nenhuma das amostras dos funcionários e dos cães examinadas. Com respeito ao parasitismo por Giardia nas crianças que frequentam a creche, as análises revelaram que as crianças mais jovens estão em maior risco de contrair a infecção por Giardia (OR = 0,69; IC95% = 00.49-0.97; p = 0,03). Além disso, verificou-se que o risco de infecção aumenta quanto maior for o número de indivíduos no domicílio (OR = 1,8; IC95% = 1,07-3,07; p = 0,03). Para a caracterização molecular dos isolados de Giardia, o DNA... / Abstract: The intestinal parasites persist as a public health problem, especially in developing countries, where the protozoan Giardia duodenalis (syn. Giardia intestinalis, Giardia lamblia) stands out as one of the most common causes of diarrhea in children. The present study was conducted to investigate the prevalence of Giardia and other intestinal parasites in children and workers of a daycare center of Vitoriana, a district of Botucatu municipality, São Paulo State, including also the household members and dogs of the children tested positive for Giardia. In addition, we proposed to investigate the genetic diversity of G. duodenalis infection in these population using three gene loci beta-giardin (bg), triose phosphate isomerase (tpi) and glutamate dehydrogenase (gdh). For this, three samples were analyzed from 123 children feces (0-6 years), 14 workers, 44 families members and 20 dogs. Samples were processed by centrifugal sedimentation and flotation and examined under a light microscope. Intestinal parasites were identified in 50 of 123 fecal samples from children (41.6%), and Giardia was the most frequent parasite detecte (21.9%). Out of the 27 families of children tested positive for Giardia, only 16 (44 individuals) provided stool samples. In these samples, cysts were detected in two samples. Focusing on Giardia infection among children attending day care, the analysis showed that younger children are at higher risk of acquiring Giardia infection (OR = 0.69; 95% CI = 00.49-0.97; p = 0.03). In addition, children living in families with a higher household density were more likely to be infected (OR = 1.8; 95% IC = 1.07-3.07; p = 0.03). DNA extracted from 186 stool samples (35 negative and 151 positive samples for microscopic examination) were amplified and the products sequenced generating 59 sequences as follow: 15 for bg, 25 for tpi and 19 for gdh. Out of the 29 isolates assessed, the sequencing analysis ... / Mestre

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