Hannover, Universiẗat, Diss., 2004.

Los objetivos iniciales de este trabajo de tesis consistieron en la extracción de los polisacáridos de la feofita Dictyota dichotoma, el fraccionamiento y la elucidación estructural de los polisacáridos purificados, y la evaluación de sus actividades antivirales contra los virus CVB3 y HHV1. El primer polisacárido extraído fue el fucoidano. El alga seca y molida se extrajo con etanol a temperatura ambiente y a 70 °C; seguidamente se extrajo con HCl diluido a temperatura ambiente y a 70 °C, por nueve veces consecutivamente. Sobre el residuo se extrajo el alginato con Na₂CO₃ al 3% a 50 °C. Los polisacáridos provenientes de la extracción con HCl se fraccionaron a través de la precipitación con Cetrimide y posterior redisolución con concentraciones crecientes de 0,5, 1, 1,5, 2, 4 y en algunos casos de 5 M de NaCl. El estudio estructural se basó en la metilación de los polisacáridos fraccionados y en la espectroscopía de resonancia magnética nuclear bidimensional, particularmente HSQC. Además, se realizaron análisis de las fracciones purificadas sobre los virus de CVB3 y HHV1. El fucoidano extraído a temperatura ambiente (EAR) mostró características de un polisacárido heterodisperso con respecto a la composición de monosacáridos, siendo la fucosa el principal monosacárido (36%), seguido de galactosa (23%), y proporciones más chicas de xilosa y manosa (≤ 18%). Además, dicho extracto mostró altas proporciones de hidratos de carbono (48%), ácidos urónicos (21%), medianas proporciones de grupos sulfato (15%) y un bajo peso molecular (6,5 KDa). Los extractos obtenidos a mayor temperatura también mostraron heterodispersión con respecto a la composición de monosacáridos, observando que conforme incrementaba la secuencia extractiva la cantidad de fucosa y galactosa disminuían, mientras que la cantidad de xilosa y manosa se incrementaban. Los análisis generales nos mostraron en todos los extractos altas proporciones de hidratos de carbono excepto en EAH9. Además, la cantidad de proteínas solubles y peso molecular y grupos sulfato disminuyeron, mientras que los ácidos urónicos incrementaban conforme se incrementaba la secuencia extractiva. El alginato extraído exhibió una preponderancia del ácido manurónico por sobre el ácido gulurónico. Además, los análisis mostraron que parecen triadas de dihos ácidos urónicos. El fraccionamiento con Cetrimide mostró que EAR y EAH1 tienen características de un típico galactofucano sulfatado, con cantidades muy pequeñas de otras estructuras. Conforme el fraccionamiento continúaba, a bajas redisoluciones, la cantidad de fucosa disminuía y la xilosa, manosa y ácidos urónicos se incrementaban. A medida que el fraccionamiento continúó esta tendencia predominó, la fucosa dejó de ser el monosacárido principal en la mayoría de las subfracciones en los siguientes extractos, mientras, que los manosa, xilosa y ácidos urónicos se incrementaron. El análisis estructural de las fracciones purificadas mostraron un core basado en residuos de →2)-Man-(1→ con sustituciones en O-3 o en O-6 y →6)-Gal-(1→, sulfatada en O-3. Además, se observó que los residuos de fucosa se encontraron enlazados en proporciones variables en C-2, C-3 y C-4, y en buena medida terminales, así como altas proporciones de ramificaciones de β-D-xilosa. La acción antiviral contra el virus HHV1 en las diferentes fracciones tanto a temperatura ambiente como a 70 °C, mostró que la fracciones -0,5, con características de uronofucoidanos, presentaron la más alta actividad antiviral, seguida de las fracciones EAR-2 y EAR-4. Por otro lado, a pesar que la actividad de las fracciones obtenidas a temperatura poseían menor actividad antiviral, las fracciones EAH2-0,5, EAH4-0,5 y EAH9-0 presentaron actividades moderadas. Con respecto al virus CVB3, los extractos de la feofita D. dichotoma mostraron actividades moderadas frente este virus, siendo las fracciones EAR-1,5, EAR-4 y EAH1-4, las que presentaron la mejor actividad antiviral. Cabe señalar que la fracción EAR-4, caracterizada por presentar un fucogalactano sulfatado, mostró ser la de mayor actividad frente a ambos virus, mientras que los altos valores obtenidos de CC₅₀ en todas las fracciones indican una baja citotoxicidad para los fucoidanos extraídos de Dictyota dichotoma.

Thesis--Catholic University of America. / Bibliography: p. 58-60.

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In the present study, Swiss mice were challenged with bothropic venom and treated with Bellucia dichotoma, using the same extract concentration and native population preparation conditions, in order to investigate the action of venom and the possible antiofidic effect of EaBd in the period of 24 h. Thus, five experimental treatments (n = 4) were established: saline, VBa (Bothrops atrox venom), EaBd, EaBd/SAB and SAB. After the experimental period, the animals were sacrificed and the spleens removed and fixed in buffered formalin for further processing in histological resin. Each organ was serially sectioned (9-12 sections/organ) that allowed the determination of the total volume of the spleen and its microstructure according to modern stereological techniques. B. atrox venom reduced the volume of the erythropoietic region of the red pulp and the volume of the periarteriolar lymphoid sheath (PALS), a region rich in T lymphocytes of the white pulp. In addition, the population of follicular macrophages was significantly increased in the VBa group in relation to the other groups. The treatment EaBd and EaBd/SAB did not present significant changes, except for the capsule component that was increased in EaBd/SAB. The treatments involving the extract were also similar to saline and SAB treatments. In conclusion, the aqueous extract of B. dichotoma administered orally shortly after B. atrox poisoning is effective in inhibiting the quantitative morphological changes in the spleen of mice poisoned when evaluated after 24 hours. / O extrato aquoso da casca de Bellucia dichotoma (EaBd) é utilizado tradicionalmente em casos de acidentes ofídicos e tem se mostrado como promissor contra o envenenamento por Bothrops atrox (VBa). O soro antibotrópico (SAB) é a terapia convencional após o acidente com B. atrox. Há evidencias da ação bloqueadora local de EaBd em camundongos envenenados, contudo faltam estudos da ação sistêmica dessa planta contra VBa. A associação entre EaBd e SAB também poderia ser uma alternativa para o acidentado. O baço é o sítio responsável pela filtração, resposta imune do sangue, como também local da hematopoiese extramedular. No presente estudo, camundongos Swiss foram desafiados com o veneno botrópico e tratados com Bellucia dichotoma, utilizando a mesma concentração do extrato e condições de preparo da população nativa, a fim de investigar a ação do veneno e o possível efeito antiofídico do EaBd no período de 24 h. Assim, cinco tratamentos experimentais (n=4) foram estabelecidos: salina, (veneno de Bothrops atrox) VBa, VBa/EaBd, VBa/EaBd/SAB (soro antibotrópico) e VBa/SAB. Após o período experimental, os animais foram sacrificados e os baços removidos e fixados em formalina tamponada para posterior processamento em resina histológica. Cada órgão foi serialmente seccionado (9-12 seções/órgão) que permitiram a determinação do volume total do baço e de sua microestrutura segundo as modernas técnicas estereológicas. O veneno de B. atrox reduziu o volume da região eritropoiética da polpa vermelha e o volume da bainha linfoide periarteriolar (PALS), região rica em linfócitos T da polpa branca. Além disso, a população de macrófagos foliculares esteve significativamente aumentada no grupo VBa em relação aos demais grupos. O tratamento EaBd e EaBd/SAB não apresentaram alterações significativas, com exceção do componente cápsula que esteve aumentado em EaBd/SAB. Os tratamentos envolvendo o extrato também mostraram-se similares aos tratamentos salina e SAB. Em conclusão, o extrato aquoso de B. dichotoma administrado por via oral logo após o envenenamento por B. atrox é efetivo na inibição das alterações morfológicas quantitativas no baço de camundongos envenenado quando avaliados após 24 horas.