A paracoccidioidomicose (PCM) é caracterizada como uma micose profunda e que acomete, principalmente, indivíduos do sexo masculino e de regiões agrícolas. A infecção ocorre através da inalação de propágulos fúngicos presentes no ambiente, atingindo inicialmente os pulmões e podendo se disseminar para outros órgãos. O diagnóstico precoce da doença previne a formação de sequelas e garante que o trabalhador dê continuidade a sua atividade de vida diária. Os testes de intradermorreação, imunodifusão dupla e ELISA são os mais utilizados no diagnóstico da PCM, no entanto, podem apresentar reatividade cruzada com outras doenças, como Histoplasmose, Candidíase e Criptococose. Em ensaios de Dot Blot com gp43 purificada, foi comprovada a eficiência deste teste para o sorodiagnóstico da PCM em pacientes durante terapia antimicótica, apresentando alta sensibilidade e especificidade. Portanto, objetiva-se com este trabalho utilizar a técnica do ensaio de Dot Blot com a glicoproteína de 43 KDa como um método de diagnóstico para a PCM infecção em indivíduos expostos ao Paracoccidioides brasiliensis na área rural de Alfenas. A prevalência de positividade nos testes Dot Blot, ELISA e IDR foi 57,57% 56,71% 68,83% respectivamente. A proporção de positivos no teste de Dot Blot foi maior no gênero masculino. A maioria dos indivíduos positivos situa-se na faixa etária acima dos 30 anos. Os resultados mostram uma maior concordância entre o teste Dot Blot e ELISA. Devido à dificuldade na padronização no teste Dot Blot e a uma melhor reprodutibilidade e rapidez do teste de ELISA, os resultados sugerem que o teste de ELISA seja mais adequado para levantamento da prevalência da PCM em áreas rurais. / The paracoccidioidomycosis (PCM) is characterized as a deep mycosis and that affects mainly males and agricultural regions. Infection occurs by inhalation of fungal propagules in the environment, initially reaching the lungs and may spread to other organs. Early diagnosis of the disease prevents the formation of sequels and ensures that the worker gives continuity to their activities of daily living. The intradermal tests, immunodiffusion and ELISA are the most used in the diagnosis of PCM, however, may show cross-reactivity with other diseases such as histoplasmosis, candidiasis and cryptococcosis. Therefore, the objective of this study was to use the technique of Dot Blot assay glycoprotein of 43 kDa as a diagnostic method for PCM infection in individuals exposed to P. brasiliensis in rural Alfenas. Different variables were tested in the standardization of Dot Blot assay using sera samples from patient’s positive and negative individuals. The prevalence of positivity in Dot Blot, ELISA and IDR tests was 57.57%, 56.71% and 68.83% respectively. Seropositivity in the Dot Blot test was higher in males. Most positive individuals lie in the age group above 30 years. The results show a better agreement between the Dot Blot and ELISA. Due to the difficulty in standardizing the Dot blot test a better reproducibility and speed of ELISA, the results suggest that ELISA is more suitable for survey of the prevalence of PCM in rural areas.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:17:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1998 - Jose Luis de Carvalho.pdf: 155465 bytes, checksum: 7d8adfe2d500eb89d6de012ebb6c3718 (MD5) Previous issue date: 1998-09-22 / The present thesis was concerned to imnunoassays, carried out in order to evaluate the aflatoxin interference on the inflammatory mechanisms. Experiments were done by in vivo procedures. In the in vivo experiments, chickens (Hubard x Hubard) received 100 μg / g de aflatoxin, 2 hours before infection with Escherichia coli. The blood clearance of Escherichia coli, was determined by haemoculture and quantification of the bacteria colonies in tryptose agar medium at different intervals ( 5, 10, 15, 30, 45, 60, 120 minutes). A significant decrease of the number of colonies recovering was observed at the 15 minutes period, of aflatoxin-trated chikens. From there on, animals intoxicated with aflatoxin were not able to eliminate the circulating bacterias. Aflatoxin-trated chikens, there were detectable a significant decrease of number of bacteria colonies on the organ, than in the control group. The per cent of bacterias were found in the spleen and liver, with the rate of 91.9 % and 7.6 %, respectively. The results have been shown, aflatoxin to be a micotoxin hepatotoxic and nephrotoxic. / O presente trabalho foi realizado com o intuito de determinar a extens?o dos preju?zos causados ao sistema imunit?rio pela aflatoxina. A modula??o inflamat?ria foi avaliada atrav?s de ensaios in vivo, realizados em aves Hubard x Hubard, previamente expostos ? aflatoxina (100 μg / g de peso vivo - 2 horas antes da infec??o). Os experimentos in vivo basearam-se na elimina??o ( clearance ) de Escherichia coli (amostra k-12 - FIOCRUZ), apartir de infec??es experimentais, seguidas de sangria, hemocultivo e contagem do n?mero de bact?rias circulantes em diferentes intervalos de tempo. Observou-se uma acentuada diminui??o do n?mero de bact?rias circulantes durante os 15 minutos de avalia??o no grupo tratado. Apartir de ent?o, os animais intoxicados mostraram-se incapazes de eliminar bact?rias circulantes, evidenciando ter havido uma supress?o da resposta inflamat?ria. Nos animais intoxicados, foi dectado uma acentuada diminui??o do n?mero de bact?rias nos ?rg?os em compara??o com os n?o tratados . O percentual de bact?rias foi maior no ba?o e f?gado, com uma taxa de 91,9% e 7,6% respectivamente. Os resultados mostraram a hepatoxicidade e nefrotoxicidade das aflatoxinas.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-05-03T12:33:08Z No. of bitstreams: 1 luancristiandasilva.pdf: 1815758 bytes, checksum: 791b50741ba8fa9606a7586b32ad6f4b (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-06-07T15:12:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 luancristiandasilva.pdf: 1815758 bytes, checksum: 791b50741ba8fa9606a7586b32ad6f4b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-07T15:12:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 luancristiandasilva.pdf: 1815758 bytes, checksum: 791b50741ba8fa9606a7586b32ad6f4b (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A Esclerose Múltipla (EM) é uma doença inflamatória autoimune desmielinizante que afeta o sistema nervoso central (SNC). A Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE) é um modelo animal para o estudo da EM. A Mitoxantrona (MIT) é um agente usado para o tratamento da EM, entretanto, a cardiotoxicidade é um dos efeitos adversos do tratamento acumulativo. O presente estudo investigou o efeito do novo derivado antraquinônico,1-Metoxi-4-((2-hidroxitetradecil)amino)-antraceno-9,10-diona, denominado MTA, em modelo de EAE. Camundongos C57BL/6 foram imunizados com o peptídio da Glicoproteína Mielínica de Oligodendrócitos (MOG35-55) em adjuvante completo de Freund, suplementado com Mycobacterium tuberculosis H37RA e tratados com 1mg/Kg de MIT ou MTA do dia 14 ao dia 20 pós-imunização. Os efeitos tóxicos provenientes dos tratamentos com a MIT e o MTA, após 7 dias de tratamento em camundongos C57BL/6 imunizados, foram analisados a partir de curvas de sobrevivência, massa corporal e dosagem sérica da proteína CK-MB. No 21º dia após a imunização, as medulas espinhais foram removidas e submetidas a análises como dosagem de citocinas pró-inflamatórias IFN-γ, IL-17, IL-6, regulatórias, IL-10 e TGF-β e quimiocinas CCL5 e CCL20 através de ELISA. Foi feita a fenotipagem celular através da expressão dos marcadores CD4, CD8, CD19, CD11b, CD11c e F4/80 por citometria de fluxo e avaliação da presença de infiltrados inflamatórios e desmielinização em amostras de tecido. O tratamento com MTA reduziu o escore clínico da doença em camundongos C57BL/6 imunizados com o MOG35-55, o que foi associado com a redução da desmielinização e de células pró-inflamatórias, secreção das citocinas IL-17, IFN-γ, IL-6 e aumento de IL-10 e TGF-β na medula espinhal, de forma similar à MIT. Porém, o tratamento com MIT reduziu a capacidade de sobrevivência, massa corporal dos animais e ainda elevou a secreção da proteína CK-MB no soro, sugerindo estresse muscular cardíaco durante o período de tratamento, o que não foi observado no grupo MTA. Os resultados sugerem um importante papel do MTA na modulação da resposta imune envolvida na EM. A atenuação da inflamação e consequentemente a redução do escore clínico envolvendo a redução de citocinas pró- inflamatórias, indicam esse composto como um tratamento alternativo para doenças autoimunes no sistema nervoso central. / Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune demyelinating inflammatory disease that affects the central nervous system (CNS). The experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an animal model for the study of MS. Mitoxantrone (MIT) is an agent used for treatment of MS, however, the cardiotoxicity is a cumulative adverse effects of treatment. This study investigated the effect of the new derivative anthraquinone, 1-methoxy-4 - ((2-hydroxytetradecyl) amino) anthracene-9,10-dione, called MTA in EAE model. C57BL/6 mice were immunized with the peptide of myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG35-55) in complete Freund's adjuvant supplemented with Mycobacterium tuberculosis H37RA and treated with 1 mg/kg of MIT or MTA the day 14 to day 20 post-immunization. The toxic effects arising from treatment with MTA and MIT after 7 days of treatment in C57BL/6 mice immunized were analyzed using survival curves, body weight and serum protein CK-MB. At day 21 after immunization, the spinal cords were removed and subjected to analysis such as determination of pro-inflammatory cytokines IFN-γ, IL-17, IL-6 and regulatory cytokines IL-10 and TGF-β and CCL5, CCL20 chemokines using ELISA, cellular phenotype through expression of markers CD4, CD8, CD19, CD11b, CD11c, F4/80 by flow cytometry and the presence of inflammatory infiltrates and demyelination by histopathology. Treatment with MTA reduced the clinical score of the disease in C57BL /6 mice immunized with MOG35-55, which was associated with the reduction of demyelination, presence of pro-inflammatory cells, release of cytokines IL-17, IFN-γ, IL-6 and increased of IL-10 and TGF-β in the spinal cord, as well as the MIT. However, treatment with MIT reduced survivability, the body weight and further increased the production of CK-MB in serum protein, suggesting cardiac muscle stress during the treatment, which was not observed in the MTA group. The results suggest an important role of MTA in modulating the immune response involved in MS. The attenuation of inflammation and thereby reduce the clinical score involving the reduction of pro-inflammatory cytokines indicate this compound as an alternative treatment for autoimmune diseases in the central nervous system.

A esporotricose é uma micose causada pela inoculação traumática na pele com material contaminado com o fungo dimórfico Sporothrix schenckii. As formas clínicas mais comuns são a linfocutânea e a cutânea fixa. A prevalência é maior em área tropical e em zona temperada. No entanto, a prevalência real da esporotricose em áreas urbanas e rurais é desconhecida, pois não há notificação compulsória. O aumento do número de casos, nos últimos anos, está relacionado à transmissão feita por animais de estimação. Os métodos de diagnóstico diretos disponíveis demoram dias para serem concluídos. Por sua vez, métodos sorológicos podem gerar resultados falsos positivos ou negativos devido a reações cruzadas entre antígenos do S. schenckii com de outros fungos. Por esse motivo, é necessário o desenvolvimento de testes sorológicos, com alta sensibilidade e especificidade, que garantam um diagnóstico confiável. Este estudo teve por objetivo padronizar um ensaio imunoenzimático (ELISA), com maior sensibilidade e especificidade, para diagnóstico sorológico da esporotricose. Nesse trabalho, placas de poliestireno foram sensibilizadas com exoantígenos de cultura da forma leveduriforme de S. schenckii e testadas utilizando soros de pacientes com esporotricose, soros de pacientes com paracoccidioidomicose (PCM), assim como de indivíduos esporotriquina negativos. Duas estratégias foram utilizadas, uma tratando o antígeno com metaperiodato de sódio e outra tratando os soros com uréia 6M em diferentes tempos de incubação. Os resultados mostraram que a estratégia utilizando metaperiodato de sódio não melhorou o poder do ensaio em discriminar os soros dos pacientes com esporotricose daqueles sem esporotricose ou com PCM. No entanto, a estratégia utilizando uréia 6M melhorou significativamente o poder de discriminação do método. As melhores condições do teste foram tratamento com uréia por 5, 10 e 20 minutos e diluição dos soros a 1\800 e 1\1600. / Sporotrichosis is a fungal infection caused by traumatic inoculation in the skin with contaminated material with the dimorphic fungus Sporothrix schenckii. The most common clinical forms are fixed cutaneous and lymphocutaneous. Its prevalence is higher in the tropical and temperate zone. However, the actual prevalence of sporotrichosis in urban and rural areas is unknown because there is no mandatory reporting. The number of cases is increasing in the last years mainly due to transmission made by pets. The results of direct diagnostic methods take days to be released. In turn, serological methods may lead to false positive or negative results due to cross-reactions between antigens from S. schenckii with others fungi. Therefore, it is necessary to develop serological tests with high sensitivity and specificity to ensure a reliable diagnosis. This study aimed to standardize an enzyme immunoassay (ELISA) with higher sensitivity and specificity for serological diagnosis of sporotrichosis. In this work, polystyrene plates were sensitized with exoantigens obtained from yeast form of S. schenckii and tested using sera from patients with sporotrichosis, sera from patients with paracoccidioidomycosis (PCM), as well as individuals with sporotrichinin negative tests. Two strategies were used, one treating the antigen with sodium metaperiodate and another treating the serum with 6M urea at different incubation times. The results showed that the strategy using sodium metaperiodate not improved the discriminating power of the test sera from patients with sporotrichosis from those without sporotrichosis or with PCM. However, the strategy using 6M urea significantly improved discrimination power of the method. The best conditions of the test were the dilution of the sera to 1\800 and 1\1600 and treatment with urea for 5, 10 and 20 minutes.

A paracoccidioidomicose (PCM) micose sistêmica granulomatosa crônica, endêmica em países da América Latina, causada pelo fungo termo-dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. A endemicidade está relacionada com regiões agrícolas, onde o fungo encontra condições ecológicas favoráveis para seu desenvolvimento. Se não diagnosticada e tratada a tempo, pode levar a formas disseminadas graves e letais, com rápido envolvimento dos pulmões, tegumento, gânglios, baço, fígado e órgãos linfóides do tubo digestivo. O surgimento da doença depende da interação entre o fungo e a resposta imune do hospedeiro, o qual pode evoluir à cura espontânea ou disseminar-se pelo organismo causando reação granulomatosa crônica. O diagnóstico da PCM é feito por exame clínico e laboratorial. Os exames laboratoriais são auxiliares no diagnóstico. Entres estes destacam a biopsia e a cultura, que visam identificar o fungo em amostras biológicas. No entanto, existe a possibilidade da ocorrência de resultado falso-positivo. Por sua vez, os testes sorológicos como imunodifusão dupla (IDD), contraimunoeletroforese (CIE), imunofluorescência indireta (IFI), ensaio imunoenzimático (ELISA) e imunoblot (IB) são auxiliares no diagnóstico e, permitem avaliar de forma indireta a presença de anticorpos do hospedeiro contra antígenos do fungo. A IDD, o teste de referência, apresenta alta sensibilidade e especificidade, no entanto, requer que o paciente apresente altos títulos de anticorpos, período onde a doença já esta instalada. O teste de ELISA é um método sensível, rápido e apropriado para análise de grande amostragem, porém, apresenta como desvantagem a reatividade cruzada entre diferentes espécies de fungos. O projeto tem como objetivo a realização de ensaios de ELISA utilizando amostras de soros de moradores da zona rural de Alfenas, Minas Gerais, na presença ou ausência de solução de ureia 6M. Comparando-se o teste de ELISA sem ureia e com ureia, pode-se observar uma redução do número de resultados positivos em todas as faixas etárias tanto no sexo feminino, quanto no sexo masculino e um aumento no número de resultados negativos em ambos os sexos, e também em todas as faixas etárias. Ao se avaliar a região rural de Alfenas, MG utilizando o teste de ELISA tratado com ureia 6M, a soroprevalência obtida foi de 55,75%. / Paracoccidioidomycosis (PCM), a chronic granulomatous systemic mycosis, endemic in Latin America, is caused by the thermo-dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. The endemicity is associated with agricultural areas where the fungus has favorable ecological conditions for its development. If the disease is not diagnosed and treated in time, it can lead to severe and lethal dissemination with rapid involvement of the lung, integument, lymph nodes, spleen, liver and lymphoid organs of the digestive tract. The emergence of the disease depends on the interaction between the fungus and the host immune response, which may progress to spontaneous cure or it may spread through the body causing chronic granulomatous reaction. The diagnosis of PCM is made by clinical examination and laboratory tests. The latter are used as a diagnostic aid. Among these stand out biopsy and culture, aimed at identifying the fungus in biological samples. However, the occurrence of false negative is high. In turn, these serological tests as double immunodiffusion (DID), counterimmunoelectrophoresis (CIE), indirect immunofluorescence (IIF), enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and immunoblotting (IB) are auxiliary in the diagnosis and allows to indirectly assessing the presence of antibodies against the host fungus antigens. DID, the reference test has high sensitivity and specificity, but requires that the patient has high levels of antibodies, a period when the disease is already installed. The ELISA assay is sensitive, fast, and suitable for large sample analysis. It has the disadvantage of crossreactivity between different species of fungi. The project aims to carry out ELISA assays using sera samples from residents of rural areas in Alfenas, Minas Gerais, in the presence or absence of 6M urea solution. Comparing the results of ELISA in the presence or absence of urea we can observe a reduction in the number of positives cases in all age groups, both female as male and an increasing number of negative outcomes in both sexes, and in all age groups. When evaluating the rural of Alfenas, MG using the ELISA treated with 6M urea, the seraprevalence obtained was 55.75%.

Dentre os microrganismos que a compõem a microbiota intestinal, sobressai Escherichia coli, que possui como principal nicho ecológico o intestino grosso de humanos. Sua importância destaca-se em fazer parte dos microrganismos comensais pioneiros na colonização da mucosa intestinal e também o seu papel patogênico causando doenças intra e extra intestinais. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta imune contra antígenos totais de Escherichia coli. Os resultados desse estudo podem servir como subsídio para o entendimento da resposta imune sistêmica a um microrganismo presente na mucosa. Os antígenos totais de E. coli foram obtidos após lise com solução de guanidina a 8M. Realizou-se a diálise e a dosagem de proteínas. Foi realizado a caracterização eletroforética em gel de poliacrilamida e perfil antigênico por Western Blotting. Avaliou-se a presença de anticorpos IgG total e IgA sérica específicos em 30 soros de humanos e também a resposta de células mononucleares de sangue periférico humano (PBMC) através da metabolização de MTT. Os resultados obtidos demonstraram que a suspenção de antígenos obtida era composta por várias proteínas e o teste de Western Blotting revelou que estas foram reconhecidas por anticorpos presentes nos soros de humanos. Foi possível detectar a presença de anticorpos IgG total e IgA sérica contra os antígenos de E. coli por ELISA. No ensaio de viabilidade e proliferação celular pelo MTT, observou-se que houve proliferação celular em diferentes concentrações do antígeno e a viabilidade não foi inferior a 70%. Os resultados sugerem que os antígenos oriundos de E. coli podem induzir respostas imunes locais e sistêmicas. / Among the microorganisms that make it up the intestinal microbiota, stands out Escherichia coli, which has as main ecological niche, the large human intestine. Its importance stands out in being part of the pioneers commensal microorganisms on the colonization of the intestinal mucosa also his pathogenic role causing extra intra and intestinal diseases. The objective of this study was to evaluate the immune response against total antigens of Escherichia coli. The results of this study could aid to understanding systemic immune response to a commensal microorganism that lives in the mucosa. Total E. coli antigens were obtained after lysis with 8M guanidine solution. After dialysis, protein assay was carried out. It was performed electrophoretic characterization of the antigens using polyacrylamide gel electrophoresis and the antigenic profile by Western blotting. We evaluated the presence of total IgG and IgA specific antibodies in 30 human sera. It also assessed the human response of peripheral blood mononuclear cell (PBMC) by MTT metabolization. The results obtained demonstrated that the antigens were composed of various proteins and Western Blotting showed that antigen proteins were recognized by antibodies present in human serum. It was possible to detect the presence of total IgG and IgA antibodies against E. coli antigens by ELISA. In viability assay evaluated by the MTT metabolization by PBMC, it found that cell proliferation occurred at different antigen concentrations, and viability was not less than 70 %. The results suggest that the antigens from E. coli can induce local and systemic responses. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:26:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Alexsander A da Silveira.pdf: 1353788 bytes, checksum: cc5086322eeed096d004e0a95e5ae244 (MD5) Previous issue date: 2011-03-15 / Introdução: Estudos locais sobre prevalência de mutações de resistência transmitida, secundária e diversidade genética do HIV-1 em diferentes populações, especialmente em um país continental como o Brasil que oferece tratamento gratuito com os antirretrovirais (ARVs), pode contribuir para uma melhor prevenção contra a infecção pelo HIV-1. Objetivos: Investigar as mutações de resistência transmitida e secundária associadas aos ARVs e a diversidade genética do HIV-1 no Centro Oeste Brasileiro. Métodos: Pacientes sem tratamento ARV foram recrutados em Campo Grande/MS em 2008 e 2010 (n=49) e 27 presidiários infectados com HIV-1 em terapia ARV foram envolvidos no estudo de Campo Grande/MS e Goiânia/Goiás recrutados nos anos de 2008/2009. Fragmentos dos genes da protease (PR), transcripatase reversa (TR) e env gp41 foram retrotranscritos a partir do RNA HIV-1 do plasma, sequenciados e genotipados após a reação de cadeia da polimerase (PCR). As mutações de resistência transmitida e secundária foram identificadas empregando a ferramenta de Calibração de Resistência Populacional (CPR) disponibilizada no site da Universidade de Stanford e pelo banco de dados do IAS-USA (The International AIDS Society). Os subtipos do vírus HIV-1 foram determinados e identificados empregando análises no banco de dados do REGA, pelo software jpHMM-HIV e por inferência filogenética. Resultados: As análises filogenéticas dos fragmentos da PR e TR apresentaram que dois homens que fazem sexo com homens (4,1%; 2/49) apresentaram isolado do HIV-1 com a mutação de resistência V75M, um paciente apresentou um isolado com a mutação de reversão T215S e 4 apresentaram a mutação V179D/E. A maioria dos isolados de HIV-1 (65.3%, 32/49) foram identificados como subtipo BPRBRT, 10.2% subtipo CPRCRT e 8.2% subtipo F1PRF1RT. A recombinação intersubtipo foi de 16.3%. Sequências de isolados de HIV-1 na região env gp41 de 32/49 pacientes indicaram resistência transmitida para o T-20 em 3 pacientes: mutação L44M (n=2), mutação V38A (n=1). A prevalência do HIV-1 B foi de 84%, F1 foi de 12.5% (4/32) e do subtipo C foi de 3%. As mutações de resistência secundárias tiveram uma prevalência de 37% (10/27) entre os pacientes prisioneiros: 5/10 apresentaram mutações para os ITRNs+ITRNNs, 3/10 tinham mutações para os ITRNs, 2/10 eram multiresistentes aos ARVs. A prevalência do HIV-1 foi de 48% para o subtipo B e 11% de subtipo C. Padrões de recombinação complexos foram observados em 41% dos pacientes. Análises filogenéticas utilizando sequências locais indicaram isolados com altos valores sugestivos de transmissão intra-presídio no MS: duas mulheres usuárias de drogas injetáveis com subtipo C, 2 grupos de homens que fazem sexo com homens presidiários: um representado pelo subtipo B do HIV-1, outro pelo recombinante BF1. Conclusão: Este estudo apresentou uma baixa prevalência de resistência transmitida associada com a mutação V75M para os ITRNs e uma moderada prevalência (9%) de resistência transmitida associada ao T-20. Investigações do monitoramento das taxas de transmissão de resistência transmitida nos genes pol são necessárias no Centro Oeste e estudos subseqüentes podem indicar o impacto das mutações para o T-20 no risco da falha terapêutica. A alta prevalência de resistência secundária associada aos ARVs (37%) nos pacientes presidiários dos estados do MS e GO, as complexas formas recombinantes do HIV-1 e a possível transmissão intra-presídio observadas sugerem uma falta de boa adesão ao tratamento com os ARVs e acentuam a necessidade de estratégias de aconselhamento, prevenção e tratamento para a população presidiária por parte das instituições de saúde pública.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-02-13T10:24:59Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rosidete Pereira de Bastos - 2008.pdf: 938423 bytes, checksum: 1e65715cda59aae81ec161a84d517cb6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-02-20T11:34:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rosidete Pereira de Bastos - 2008.pdf: 938423 bytes, checksum: 1e65715cda59aae81ec161a84d517cb6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-20T11:34:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rosidete Pereira de Bastos - 2008.pdf: 938423 bytes, checksum: 1e65715cda59aae81ec161a84d517cb6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2008-03-14 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The knowledge about immunology of Leishmania (Viannia) braziliensis-murine infection is poorly known, especially concerning innate immune response and the involvement of leukotrienes in the resistance mechanisms. Leukotrienes are lipid mediators of inflammation that activate microbicidal mechanisms in leukocytes. The present study aimed to evaluate the BALB/c and C57Bl/6 murine infection with two L. (V.) braziliensis isolates obtained from cutaneous leishmaniasis patients and the involvement of leukotrienes in the resistance of infection. Thus, IMG3 and RPL5 isolates were identified as L. (V.) braziliensis by using molecular techniques and the in vitro growth of parasites in Grace´s medium (26°C) was evaluated. The time course of lesion after footpad infection was followed in BALB/c and C57Bl/6 mice. C57Bl/6 mice genetically deficient in interferon gamma (IFNγ) were infected to evaluate the relevance of this cytokine in resistance. The parasite burden in draining lymph nodes and spleens was detected by limiting dilution assay. BALB/c- and C57Bl/6-infected footpads were processed after 12 weeks of infection and those from IFNγ-defecient mice after 4 weeks for histopathological analyses. Tissue sections were stained by hematoxylin-eosin. Parasite capacity to induce nitric oxide (NO) was analyzed in RAW 264.7 cell cultures treated or not with IFNγ and lipopolysaccharide (LPS). Nitrites were detected by using Griess reaction. The NO modulation by endogenous leukotrienes was evaluated through treatment of the cultures with a 5-lipoxygenase (5-LO) inhibitor and a leukotriene B4 (LTB4) antagonist. Macrophage leishmanicidal activity against IMG3 isolate was evaluated in thioglycolateelicited peritoneal macrophages of C57Bl/6 mice. In these cultures, NO was inhibited by aminoguanidine. In vivo leukotriene inhibition was achieved by using a 5-LO inhibitor. In vitro-parasite growth profiles were similar and parasites at the 5th day of culture were used to infection. The lesion course was also similar between isolates in both two mouse stains used, but C57Bl/6 mice presented healing after 12 weeks of infection whereas in BALB/c mice the lesion was persistent. In IFNγ-deficient mice there progressive lesions and visceralization in IMG3- as well as in RPL5-infected mice. Corroborating these data, the parasite burden in draining lymph nodes of BALB/c mice was higher than in C57Bl/6 mice after 12 weeks of infection with IMG3, and parasites (IMG3 and RPL5) were identified in about 50% of the IFNγ-deficient mouse spleens. The histopathological analyses showed an intense dermal infiltrate with vacuolated macrophages heavily parasitized in BALB/c mice (12 weeks) an in IFNγ-deficient mice (4 weeks), but not in C57Bl/6 mice (12 weeks), similarly for IMG3 and RPL5. Both isolates IMG3 an RPL5 induced NO production in RAW 264.7 celll cultures presenting synergism with IFNγ. Endogenous leukotrienes did not affect NO production in these cultures. C57Bl/6 peritoneal macrophages activated with IFNγ/LPS killed IMG3 parasites depending on NO release. In vivo inhibition of leukotriene synthesis did not change the course of infection in C57Bl/6 mice infected with IMG3 isolate. The relevant findings are: BALB/c mouse is susceptible to infection with IMG3 an RPL5 isolates whereas C57Bl/6 is resistant; IFNγ is crucial to the control of the infection; the isolates induce NO and this molecule contributes to macrophage leishmanicidal activity; and also the data suggest that endogenous leukotrienes are not involved in the control of L. (V.) braziliensis in C576Bl/6 mouse. / A imunologia da infecção murina por Leishmaia (Viannia) braziliensis é pouco conhecida, especialmente considerando a imunidade inata e a participação dos leucotrienos nos mecanismos de resistência à infecção. Os leucotrienos são mediadores lipídicos da inflamação que ativam mecanismos microbicidas dos leucócitos. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o perfil da infecção de camundongos BALB/c e C57Bl/6 por dois isolados de L. (V.) braziliensis obtidos de pacientes com leishmaniose cutânea e o envolvimento dos leucotrienos endógenos na resistência à infecção. Para isto, os isolados denominados IMG3 e RPL5 foram identificados como L. (V.) braziliensis por meio de técnicas moleculares e foram avaliados quanto ao crescimento in vitro em meio Grace (26°C), e quanto ao curso da evolução da lesão, em camundongos BALB/c e em C57Bl/6. Camundongos C57Bl/6 geneticamente deficientes em interferon gama (IFNγ) foram infectados para avaliar a importância desta citocina no controle da infecção. A carga parasitária foi obtida pelo ensaio da diluição limitante em linfonodos drenantes da lesão e nos baços. As patas dos camundongos BALB/c e C57Bl/6 foram colhidas após 12 semanas de infecção, e dos camundongos deficientes em IFNγ, na 4ª semana, e foram processadas para análises hitopatológicas. A capacidade de indução de óxido nítrico (NO) pelos isolados foi avaliada em culturas de células RAW 264.7 tratadas ou não com IFNγ e lipopolissacarídeo (LPS), sendo os nitritos detectados por reação de Griess. A regulação da produção de NO pelos leucotrienos endógenos foi avaliada por tratamento das culturas de macrófagos com um inibidor de 5-lipoxigenase (5-LO) e um antagonista de receptor de leucotrieno B4 (LTB4). A atividade microbicida dos macrófagos foi avaliada em macrófagos peritoneais (C57Bl/6) infectados com o isolado IMG3, sendo o NO inibido por aminoguanidina. O efeito da inibição de leucotrienos, in vivo, foi avaliado em camundongos C57Bl/6 infectados com o isolado IMG3 e tratados com um inibidor de 5- LO. As curvas de crescimento in vitro foram similares para os dois isolados e os parasitos no 5° dia de cultivo foram usados nos experimentos de infecção. O curso da lesão foi similar entre os dois isolados nos camundongos BALB/c e C57Bl/6, porém enquanto a lesão regrediu nos C57Bl/6, nos camundongos BALB/c, a lesão foi persistente até a 12ª semana de infecção. Em camundongos deficientes em IFNγ houve crescimento progressivo das lesões e visceralização, tanto com o isolado IMG3 quanto com o RPL5. Confirmando estes dados, a carga parasitária nos linfonodos drenantes da lesão nos camundongos BALB/c foi maior do que a encontrada nos C57Bl/6 após 12 semanas de infecção com IMG3 e os parasitos (IMG3 e RPL5) foram encontrados em cerca de 50% dos baços dos camundongos deficientes em IFNγ. As análises histopatológicas mostraram um acentuado infiltrado inflamatório na derme, com macrófagos vacuolizados repletos de parasitos nos camundongos BALB/c (12 semanas), e nos deficientes de IFNγ (4 semanas), mas não nos camundongos C57Bl/6 (12 semanas), similarmente para IMG3 e RPL5. Os isolados IMG3 e RPL5 induziram NO em células RAW 264.7 em sinergismo com IFNγ e os leucotrienos endógenos não alteraram a produção de NO destas células. Macrófagos peritoneais murinos mostraram atividade microbicida de maneira dependente de NO. A inibição in vivo da síntese de leucotrienos não alterou o curso da infecção pelo isolado IMG3 em camundongos C57Bl/6. Coletivamente, os dados mostram que o camundongo BALB/c é suscetível à infecção pelos dois isolados, enquanto o C57Bl/6 é resistente; o IFNγ é essencial para o controle da infecção; os isolados induzem a produção de NO, o qual contribui para a eliminação dos parasitos; e os dados sugerem que os leucotrienos endógenos não estão envolvidos nos mecanismos de resistência dos camundongos C57Bl/6 a L. (V.) braziliensis.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4808.pdf: 1657962 bytes, checksum: abb30e9c4dc48bb4625a333ce6600cb8 (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / Eosinophils are a hematopoietic cell originated from precursor cells found in bone marrow, whose differentiation and proliferation is regulated by cytokines such as GM-CSF, IL-3 and IL-5. When activated, eosinophils are capable of phagocytosis of small particles and bacteria, but their main form of activity in the inflammatory process is the release of toxic proteins, cytokines, enzymes, lipid mediators and reactive oxygen products. The increase in eosinophil is an important feature in many diseases such as allergy and parasitic infections. Provided APC (Antigen-Presenting Cells), eosinophils are considered similar to the CD (Dendritic Cells) in its potential to activate naïve T cells and may have potential as efficient as the CD in stimulating lung T cells in the upper airways in the model inflammation. The APC are defined by being able to take, processing and presenting antigen such as CD, macrophages, B lymphocytes and possibly eosinophils. The surface expression of APC is characterized by coestimatórias molecules CD80 (B7-1) and CD86 (B7-2) and also by MHCII. The proposed model for this evaluation was to Visceral Larva Migrans syndrome (VLMS) caused by Toxocara canis, one of the most frequent helminth in young dogs. One of the main consequences of this infection is the marked increase in circulating and tissue eosinophils. Eosinophilia has been associated with parasitic diseases particularly when the parasite invades or promotes tissue damage at mucosal surfaces In the present study we evaluated the expression of MHC II and CD80 and CD86 molecules coestimulatórias in eosinophils in VLMS. Our results showed that the molecules studied were expressed in eosinophils in the blood of mice infected with Toxocara canis compared with the control group. Correlating an intense eosinophil still during the course of the disease with increased IL-5 in the infected group. Suggests that during the course of Toxocara canis, eosinophils can exhibit behavior of an APC, increasing the expression of MHCII molecules coestimulatorias and possibily amplifyng the immune response in this model. / O eosinófilo é uma célula hematopoiética, originada a partir de células precursoras presentes na medula óssea, cuja diferenciação e proliferação são reguladas por citocinas como GMCSF, IL-3 e IL-5. Quando ativados, os eosinófilos são capazes de realizar fagocitose de pequenas partículas e bactérias, mas sua principal forma de atuação no processo inflamatório consiste na liberação de proteínas tóxicas, citocinas, enzimas, mediadores lipídicos e produtos reativos de oxigênio. O aumento no número de eosinófilos é uma característica importante em diversas doenças como a alergia e as infecções parasitárias. Na condição de APC (Células Apresentadoras de Antígenos), os eosinófilos são considerados similares as CD (Células Dendríticas) em seu potencial para ativar células T naïve, podendo ter potencial tão eficiente quanto as CD pulmonares em estimular células T nas vias aéreas superiores no modelo da inflamação. As APC são definidas por serem capazes de ingerir, processar e apresentar o antígeno como: CD, macrófagos, linfócitos B e possivelmente os eosinófilos. A expressão na superfície da APC é caracterizada por moléculas coestimatórias CD80 (B7-1) e CD86 (B7-2) e ainda pelo MHCII. O modelo proposto para esta avaliação foi a Síndrome da Larva Migrans Visceral (SLMV) causada pelo Toxocara canis, um dos helmintos mais freqüentes em cães jovens. Uma das principais consequências desta infecção é o aumento marcante de eosinófilos circulantes e teciduais. A eosinofilia tem sido associada com doenças parasitárias particularmente quando o parasita invade os tecidos ou promove danos na superfície das mucosas. No presente estudo avaliamos a expressão de MHC II e moléculas coestimulatórias CD80 e CD86 em eosinófilos na SLMV. Nossos resultados mostraram que as moléculas analisadas foram expressas em eosinófilos no sangue de camundongos infectados com Toxocara canis quando comparado com o grupo controle. Correlacionando ainda uma intensa eosinofilia durante o curso da doença com o aumento de IL-5 no grupo infectado. Sugere que, durante o curso da infecção pelo Toxocara canis, eosinófilos podem apresentar comportamento de uma APC, aumentando a expressão de moléculas coestimulatórias e MHCII e possivelmente amplificando a resposta imune nesse modelo.

Human rhinoviruses (HRV) are commonly associated with mild respiratory symptoms of children. However, some studies have detected these viruses in lower respiratory tract illness (LRTI), often in coinfection with other respiratory agents. So, both investigated simultaneous infections of these agents with other respiratory viruses as a possible association with LRTI, in rhinovirus-positive samples of children attended at a public health service in Uberlândia, MG, Brazil. The presence of RNA of these viruses was researched by polymerase chain reaction (PCR), preceded by reverse transcription (RT), in 321 nasopharyngeal aspirates (NPAs) samples from children <5 yo. with acute respiratory disease (ARD), which presented negative or inconclusive results for seven respiratory viruses by immunofluorescence assay. Of these total, 90 specimens with positive results for HRV and presenting LRTI diagnose, were selected to be tested by PCR for presence of respiratory syncytial virus (RSV) types A and B, influenzaviruses (FLU) A and B, human metapneumovirus (hMPV) and parainfluenzaviruses (PIV) 1, 2 and 3. The LRTI were classified into: bronchiolitis, pneumonia and acute bronchitis. Bronchiolitis and pneumonia were considered more severe than acute bronchitis. In 64.4% of samples any other investigated viruses were detected. In the remaining of clinical specimens, a second virus were found, including RSV in 22.2%, followed by hMPV in 6.7%, and PIV in 6.7%. A higher incidence of bronchiolitis was observed in children that had HRV coinfection with hMPV or PIV, compared with those presenting only HRV (p = 0.0364). Younger children were the most frequently identified with dual infection, and also presented higher rates of hospitalization. The relation between HRV coinfection with certain viruses and a higher frequency of bronchiolitis suggests that HRV could cause more severe clinical syndromes, when associated with some other respiratory viral agents. The fact that younger children had been more often coinfected suggests that age has an important role in the simultaneous infection of HRV with other respiratory viruses. / Os rinovírus humanos (HRV) são comumente associados com sintomas respiratórios brandos de crianças. No entanto, alguns estudos têm detectado esses vírus em casos de doenças do trato respiratório inferior (DTRI), muitas vezes em co-infecção com outros agentes virais. Assim, tanto se investigou a infecção simultânea desses agentes com outros vírus respiratórios, como uma possível associação com DTRI, em amostras de crianças positivas para HRV atendidas em Serviços de Saúde Pública de Uberlândia, MG, Brasil. A presença de RNA desses vírus foi pesquisada por reação em cadeia pela polimerase (PCR), precedida por uma transcrição reversa (RT), em 321 amostras de aspirado de nasofaringe (ANFs) de crianças <5 anos de idade, com doença respiratória aguda, que apresentavam resultado negativo ou inconclusivo para sete vírus respiratórios, pela imunofluorescência indireta. Desse total, selecionou-se 90 espécimes que apresentaram resultado positivo para os HRV e diagnóstico de DTRI, e os mesmos foram testados por PCR para a presença de vírus respiratório sincicial (VRS) tipos A e B, influenzavírus (FLU) A e B, metapneumovírus humano (hMPV) e parainfluenzavírus (PIV) 1, 2 e 3. As DTRI foram classificadas em bronquiolite, pneumonia e bronquite aguda, sendo as duas primeiras consideradas síndromes clínicas de maior gravidade em relação a essa última. Em 64,4% das amostras nenhum dos outros vírus investigados foi detectado. No restante dos espécimes clínicos, um segundo vírus foi encontrado, sendo o VRS em 22,2%, os hMPV em 6,7% e os PIV em 6,7%. Uma maior incidência de casos de bronquiolite foi observada em crianças que tinham co-infecção de HRV com hMPV ou com PIV, comparado àquelas que apresentavam somente HRV (p = 0,0364). Crianças mais jovens foram as mais frequentemente identificadas com infecção dupla, e também as que apresentaram maior índice de hospitalização. A relação da coinfecção de HRV com determinados vírus respiratórios e uma maior freqüência de bronquiolite sugere que, os HRV quando associados a outros agentes respiratórios virais podem causar quadros clínicos mais graves. O fato de crianças de tenra idade terem sido mais frequentemente co-infectadas sugere que a idade parece ter um papel importante na infecção simultânea entre os HRV e outros vírus respiratórios. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas