La diffraction des rayons X a été développée depuis près d'un siècle pour la détermination de structures cristallographiques. Mais la détermination des structures les plus complexes (protéines, structures incommensurables...) nécessite l'utilisation de la diffraction anomale, i.e. la mesure des intensités de diffraction à plusieurs longueurs d'onde au voisinage du seuil d'absorption d'un élément du cristal. Cette technique permet d'obtenir une information sur la phase du facteur de structure, ainsi que sur les positions des atomes anomaux. Dans cette thèse, nous présentons la Diffraction Anomale Dispersive (DAD), qui permet de mesurer simultanément les intensités diffractées à plusieurs longueurs d'onde, pour de nombreuses réflexions. Nous présentons deux modes de collecte, continu (DDAFS-Dispersive Diffraction Anomalous fine Structure), et discret (SMAD-Simultaneous Multiwavelength Anomalous Diffraction). Nous avons développé une procédure et un programme (DAD) pour l'analyse quantitative des images de diffraction dispersive. Ce programme permet également l'analyse d'images de diffraction monochromatique présentant des réflexions satellites proches des pics principaux. Nous présentons les deux premières expériences quantitatives de diffraction dispersive sur des cristaux biologiques. Nos résultats montrent que la détermination de structure par la méthode SMAD est possible. Des améliorations aux protocoles de collecte et d'analyse sont encore nécessaires pour ces cristaux. Une partie importante de cette thèse a été consacrée à l'étude de (TaSe4)2I : ce cristal quasi-1D présente une transition de Peierls, la condensation des atomes de tantale étant recherchée depuis 15 ans. Notre étude a d'abord caractérisé la structure en domaines de ce matériau, et la diffraction anomale a mis en évidence de manière spécifique la tétramérisation des atomes de tantale, accompagnant la modulation acoustique déjà connue.