Submitted by Valquíria Barbieri (kikibarbi@hotmail.com) on 2018-04-17T19:55:14Z No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Claodete Hasselstrom Neves.pdf: 1544628 bytes, checksum: c8448adc35211604eee744606435547c (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2018-04-27T17:11:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Claodete Hasselstrom Neves.pdf: 1544628 bytes, checksum: c8448adc35211604eee744606435547c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-27T17:11:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2015_Claodete Hasselstrom Neves.pdf: 1544628 bytes, checksum: c8448adc35211604eee744606435547c (MD5) Previous issue date: 2015-03-06 / O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos da administração crônica de digoxina e do verapamil durante treinamento físico intervalado de alta intensidade (TFI) sobre o desempenho físico, capacidade funcional e morfologia cardíaca de ratos. Para tanto, 48 ratos Wistar, com 60 dias de idade, foram aleatoriamente distribuídos em 6 grupos(N=8/grupo): controle, não treinado (C), treinado, sem administração de droga (T), digoxina sem treinamento (DIGO), verapamil sem treinamento (VERA), treinado, com administração de digoxina (TDIGO) e treinado, com administração de verapamil (TVERA). A digoxina e o verapamil foram administrados via gavagem, na dose de 30μg/kg/dia e 5,0 mg/kg/dia respectivamente, durante todo o período experimental. Os grupos T, TDIGO e TVERA foram submetidos a um programa de TFI em esteira rolante durante 60 dias. Foi aplicado o teste de esforço progressivo máximo (TEM) e determinada a concentração sérica de lactato (LAC) sanguíneo. O TFI consistiu de sessões de corrida em esteira rolante 1 h/dia, 5 dias/semana por 60 dias. A intensidade de treino foi 80% da velocidade máxima (Vmáx) atingida no teste de esforço antes do TFI por 8 min e 20% da Vmáx por 2 min. A função cardíaca foi avaliada por ecocardiograma. Foi coletado o músculo esquelético, o músculo cardíaco e a gordura corporal total (GOR) para os dados anatômicos, o ventrículo esquerdo (VE) para análise histológica e o sangue para a análise bioquímica. A comparação entre os grupos foi realizada por meio da análise de variância (ANOVA) e Kruskal Wallis para o esquema de dois fatores independentes, complementada com o teste de Bonferroni, Tukey ou Dunn. O índice de significância considerado foi de 5%. A relação VE/peso corporal final (PCF), o diâmetro diastólico do VE (DDVE) e diâmetro sistólico do VE (DSVE) foram maiores no grupo TDIGO do que o grupo T e DIGO. Os parâmetros do TEM foram maiores e a concentração de LAC foi menor em ratos treinados em relação aos não treinados. A relação GOR/PCF foi menor no TDIGO e TVERA em relação ao DIGO e VERA, respectivamente. A relação VE/PCF foi maior no TVERA em relação ao VERA. O diâmetro interno do VE (DIVE) do grupo T, TDIGO e TVERA foram maiores em relação ao C, o TDIGO teve aumento em relação ao DIGO. O colesterol total e o LDL foram maiores no TDIGO comparado ao DIGO. A área do cardiomiócito foi maior nos grupos VERA e T comparados ao grupo C. Conclusão: O Treinamento intervalado promoveu hipertrofia cardíaca do tipo excêntrica. Entretanto, a administração concomitante de digoxina ou de verapamil não afetaram a morfologia cardíaca, a função cardíaca e o desempenho físico em ratos submetidos ao treinamento. / The aim of this study was to investigate the effects of chronic administration of cardiotonic (digoxin) and the calcium channel blocker (verapamil) during high-intensity interval exercise training (IET) on physical performance, functional capacity and cardiac morphology of rats. For this study, 48 Wistar rats, 60 days old, were randomly distributed into 6 groups (N = 8 / group): control, untrained (C), trained without drug administration (T), digoxin untrained (DIGO), verapamil without training (VERA), trained with digoxin administration (TDIGO) and trained with verapamil administration (TVERA). Digoxin and verapamil were administered by gavage at a dose of 30μg/kg/day and 5.0 mg.kg-1, respectively, throughout the experimental period. The groups T, TDIGO and TVERA underwent a IET program on a treadmill for 60 days. The progressive maximal exercise test was applied (TPM) and determined the serum concentration of lactate (LAC) blood. The IET consisted of sessions running on a treadmill 1 h/day, 5 days/week for 60 days. The training intensity was 80% of the maximum velocity (Vmax) achieved in the stress test before the TAI for 8 min and 20% of Vmax for 2 min. Cardiac function was assessed by echocardiography. Was collected skeletal muscle, cardiac muscle and total body fat (TBF) for anatomical data, the left ventricle (LV) for histological analysis and blood for biochemical analysis. The comparison between groups was performed using analysis of variance (ANOVA) or Kruskal Wallis for the two independent factors, complemented by the Bonferroni test, Tukey or Dunn. The significance level considered was 5%. The ratio VE final body weight (FBW), LV diastolic diameter (LVDD) and LV systolic diameter (LVSD) were higher in TDIGO group than the group T and DIGO. The parameters MET were higher and the concentration of LAC was lower in rats training in relation to the untrained. The relationship GOR/FBW was lower in TDIGO and TVERA compared to DIGO and VERA respectively. The ratio VE/FBW was higher in TVERA compared to VERA. The of the LV inside diameter (LVID) T group, TDIGO and TVERA were higher compared to C, TDIGO had increased compared to DIGO. Total cholesterol and LDL were higher in TDIGO compared to DIGO. The area of cardiomyocytes was higher in VERA and T compared to group C. Conclusion: TAI induced cardiac hypertrophy of the eccentric type. However, concomitant administration of digoxin or verapamil did not affect the cardiac morphology, cardiac function and physical performance in rats submitted to training.

A digoxina é um dos medicamentos indicados para o tratamento de falência cardíaca. Possui janela terapêutica estreita, sendo responsável por casos de intoxicação. O único antídoto disponível para a desintoxicação é o anticorpo policlonal DigiFab®, no formato Fab. O seu uso é eficaz, porém de custo elevado. Clones bacterianos produtores de fragmento Fab monoclonal anti-digoxina foram obtidos previamente pelo nosso grupo, pela técnica de phage display. Neste trabalho as variantes Fab dos 4 clones foram expressas em E.coli para estabelecer o método para a purificação. Com a obtenção dos fragmentos Fab purificados, foi caracterizada a sua afinidade ao antígeno e especificidade, em ensaios de inibição por digoxina, digitoxina, digoxigenina e ouabaina. Os parâmetros cinéticos da ligação dos fragmentos Fab dos 4 clones e do DigiFab® foram avaliados por SPR. Nas condições experimentais, não foram verificadas diferenças significativas entre os produtos dos 4 clones e o comercial, demonstrando o potencial dos fragmentos Fab monoclonais obtidos como antídoto à digoxina. / Digoxin is a medication indicated for heart failure treatment. Its therapeutic window is narrow, being responsible for intoxication cases. The only antidote available for the detoxification is a polyclonal antibody - DigiFab® in Fab format. Its use is effective, but costly. Bacterial clones producing anti-digoxin monoclonal Fab fragments were previously obtained by our group using phage display technology. In this work the Fab variants of the 4 clones were expressed in E.coli to establish the purification method. The purified fragments were characterized regarding the affinity to the antigen and the specificity through inhibition assays with digoxin, digitoxin, digoxigenin and ouabain. The binding kinetic parameters of Fab fragments of the 4 clones and the commercial product to Dig-BSA conjugate were assessed by SPR. Under the experimental conditions no significant differences were observed among the 4 clones and the commercial product, demonstrating the potential of monoclonal Fab fragments as an antidote to digoxin.