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Bacillus cereus: Caracterização genômica na cadeia produtiva de leite e influência da pasteurização na expressão de genes relacionados a toxinas diarreicas / Bacillus cereus: Genomical characterization on dairy production chain and influence of pasteurization on expression of genes related to diarrheic toxins

Rossi, Gabriel Augusto Marques 06 December 2017 (has links)
Submitted by Gabriel Augusto Marques Rossi null (gabrielrossiveterinario@hotmail.com) on 2018-01-10T19:18:16Z No. of bitstreams: 1 Tese_Gabriel_Augusto_Marques_Rossi.pdf: 3246904 bytes, checksum: 2ed62292bd3bfa8f9ec88fe41c5bbaa2 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-01-11T10:23:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rossi_gam_dr_jabo.pdf: 3246904 bytes, checksum: 2ed62292bd3bfa8f9ec88fe41c5bbaa2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-11T10:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rossi_gam_dr_jabo.pdf: 3246904 bytes, checksum: 2ed62292bd3bfa8f9ec88fe41c5bbaa2 (MD5) Previous issue date: 2017-12-06 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As bactérias pertencentes ao grupo do Bacillus cereus são importantes para indústrias processadoras de leite e produtos lácteos devido à capacidade de sobrevivência aos tratamentos térmicos utilizados durante os processamentos, e consequente deterioração dos produtos e risco à saúde pública. Assim, inicialmente, objetivou-se compreender a estrutura populacional de isolados pertencentes ao grupo do B. cereus na cadeia produtiva do leite e produtos lácteos. Por meio da utilização de amostragem estruturada e técnicas genômicas comparativas, investigou-se quais linhagens específicas e genes estão significativamente associados a estágios de produção específicos e produtos. Os genomas de 69 isolados obtidos de equipamentos, leite cru e produtos lácteos foram comparados com outros 193 disponíveis de diversas origens. A estrutura populacional incluiu os conhecidos grupos filogenéticos II, III, IV, V e VI, e quase todos os isolados dos produtos lácteos pertenceram ao grupo III. A investigação de genes específicos revelou um grande número de isolados carreando aqueles relacionados à produção de toxinas, como o cytK (53,62%), hblA (59,42%), hblC (44,93%), hblD (53,62%), nheA (84,06%), nheB (89,86%), nheC (84,06%), cesA (2,90%) e cesB (2,90%). Os isolados pertencentes aos grupos IV e V possuíram uma prevalência significativamente maior dos genes hblACD e o grupo IV do gene cytK. Os isolados obtidos de produtos lácteos tiveram uma prevalência significativamente menor dos genes cytK e hblACD comparados aos de equipamentos e leite cru/tanques de refrigeração. A análise genômica populacional demonstrou a diversidade dos isolados e a variedade de funções dentro do grupo do B. cereus da cadeia produtiva leiteira, com grande número de isolados potencialmente capazes de causar doenças alimentares. Posteriormente, objetivou-se avaliar a viabilidade do processo de tindalização de leite cru refrigerado e determinar se o processo de pasteurização do leite influencia na expressão dos genes relacionados à produção das toxinas diarreicas pelo B. cereus s.s. em leite experimentalmente contaminado. Para isso, realizou-se um processo de tindalização de leite cru refrigerado e então foi realizada a contaminação com um isolado potencialmente toxigênico, e, posteriormente, o mesmo foi pasteurizado, envasado e mantido em refrigeração durante 10 dias. Em momentos determinados, foram coletadas amostras do produto afim de avaliar a expressão de genes codificadores de toxinas (hblACD, nheABC e cytK). O protocolo de tindalização utilizado permitiu redução logarítmica da população de bactérias do grupo do B. cereus e foi possível detectar a expressão do gene hblA em amostras de leite 5 e 10 dias após a pasteurização. Conclui-se que o modelo proposto foi adequado e que a expressão do gene hblA não foi inibida após a realização da pasteurização do leite, demonstrando o potencial risco aos consumidores decorrentes do consumo de leite pasteurizado contaminado. / The bacteria belonging to Bacillus cereus group are important to dairy industries due their ability to survive to thermal treatments used during processing, and consequently cause food spoilage and risk to public health. Thus, firstly, this study aimed to better understand the population structure of B. cereus group isolates in dairy production chain. Using structured sampling of B. cereus in dairy production chain and comparative genomics techniques, we investigated if specific lineages and genes are significantly overrepresented in particular production stages. The genomes of 69 isolates obtained from equipments, raw milk and dairy products were compared with others 193 avaiable from several origins. The populational structure included the known phylogenetic groups II, III, IV, V and V, and almost all isolates from dairy products belonged to group III. The genes investigation showed a high number of isolates carrying genes related to toxins production, such as cytK (53.62%), hblA (59.42%), hblC (44.93%), hblD (53.62%), nheA (84.06%), nheB (89.86%), nheC (84.06%), cesA (2.90%) and cesB (2.90%). The isolates belonging to groups IV and V had a significant higher prevalence of genes hblACD an group VI of cytK. The isolates obtained from dairy products had a significant lower prevalence of genes cytK and hblACD compared to those from equipments and raw milk/bulk tanks. The populational genomic analyses showed the diversity of isolates and variability of functions in B. cereus group in dairy production chain, with a high number of isolates potentially able to cause foodborne disease. Posteriorly, this study aimed to evaluate the viability of tyndallizating raw milk and to establish if milk’s pasteurization influences on the expression of genes related to the production of diarrheal toxins by B. cereus s.s. using a milk contamined experimentally. For this purpose, the tyndallization of raw milk was performed and later it was contaminated with a potentially toxigenic isolate, and, posteriorly, it was pasteurized, packaged and kept under refrigeration during 10 days. In established periods, samples of this product were collected in order to evaluate the expression of genes related to toxins production (hblACD, nheABC and cytK). The protocol used for tyndallization allowed a logarithmic reduction of population of B. cereus group and the expression of hblA gene was detected in samples from milk after 5 and 10 days after pasteurization. It was concluded that the proposed model was appropriate and the expression of hblA gene was not inihibited after milk pasteurization, highlighting the potential risk for consumers through consumption of contamined pasteurized milk. / 2016/19214-9 / 2014/13104-1
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Avaliação da implementação da resolução rdc 218/05, da Anvisa, e sua eficácia perante as unidades de comercialização de alimentos e bebidas, em Salvador - Ba

Ferreira, Tereza Cristina Braga 17 May 2013 (has links)
Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-05-17T17:12:56Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Nut_ Teresa Ferreira.pdf: 762393 bytes, checksum: 6115465cbea8a34a5076a091756c1af4 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-05-17T17:19:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Nut_ Teresa Ferreira.pdf: 762393 bytes, checksum: 6115465cbea8a34a5076a091756c1af4 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-17T17:19:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Nut_ Teresa Ferreira.pdf: 762393 bytes, checksum: 6115465cbea8a34a5076a091756c1af4 (MD5) / Atualmente, através dos meios de comunicação, são divulgadas inúmeras notícias sobre alimentos contaminados que causam prejuízos à saúde do homem. No Brasil, o termo vigilância sanitária foi empregado para demarcar o campo da saúde pública, que tem como finalidade maior a proteção da saúde por meio da eliminação ou da redução do risco. Dentre os casos mais recentes de doença relacionada ao consumo de produtos alimentícios, destaca-se a transmissão da doença de Chagas por meio da ingestão de caldo de cana ocorrido no estado de Santa Catarina, além do consumo do suco de açaí, e caldo de cana, no estado do Amapá. Diante dessa problemática, e considerando a importância de serem adotados controles de forma a prevenir doenças transmitidas por alimentos, a ANVISA elaborou a Resolução RDC 218, de 29/07/2005, que contém normas e procedimentos para a manipulação higiênico-sanitária de produtos de origem vegetal. A referida Resolução estabelece, também, as principais características das unidades de comercialização. Esta pesquisa teve como objetivo avaliar a implantação e a eficácia da citada resolução, em unidades de comercialização de produtos de origem vegetal em Salvador – BA. A amostra foi constituída por 217 unidades de comercialização, localizadas em 5 (cinco) Distritos Sanitários, onde foi realizada aplicação de um formulário semi-estruturado respondido pelos responsáveis ou manipuladores de alimentos das unidades identificadas como: quiosques, barracas, isopores, carrinhos, carrinhos com refrigeração, moenda e ambulantes. Os produtos selecionados foram: água de coco, caldo de cana, sucos de frutas e sucos de polpa de frutas. Para análise dos resultados obtidos foi empregada a estatística descritiva e análise bi-variada, que auxiliaram na exploração do objeto. Para a determinação da eficácia das unidades, foi construída uma classificação e, consideradas eficazes aquelas que apresentaram índice mínimo de 95% do total das questões formuladas, numa classificação estabelecida de 0 a 25% (Crítico); de 25 a 50% (Regular); de 50 a 75% (Bom); e de 75 a 100% (Ótima). A partir dos resultados obtidos, pôde-se concluir que o grupo de comerciantes de alimentos e bebidas de origem vegetal foi formado, em sua maioria, por homens, com escolaridade predominante do ensino fundamental incompleto e apresentando poucos casos de comerciantes com curso superior. Observou-se uma significativa participação de comerciantes imigrantes de outras cidades do interior da Bahia. Pôde-se observar que a maioria dos comerciantes não participou de treinamento a respeito das boas práticas de manipulação, o que levava a inadequação dos procedimentos higiênico-sanitários, além do que o procedimento de lavagem de mãos se realizava de forma inadequada. O Distrito com maior porcentagem de unidades licenciadas foi o do Centro Histórico e o produto com maior porcentagem de licença foi o coco. Quase a totalidade das unidades de comercialização desconhecia a norma e a existência de licença não interferiu nos conhecimentos da mesma, como também a visita da Vigilância Sanitária não se associou ao fato deste conhecimento. As visitas de fiscalização ocorreram de modo esporádico. A existência da norma não foi eficaz para cristalizar o conhecimento dos procedimentos higiênico-sanitários adequados. Observou-se que parte das unidades (23,04%) mantinham os seus produtos prontos protegidos e refrigerados, sem contato com ambiente externo, em caixas de isopor ou garrafas térmicas. Nenhum produto ou Distrito Sanitário estava em conformidade com as normas estabelecidas pela Resolução RDC 218/05, subentendo-se que a referida norma não foi aplicada adequadamente com relação aos procedimentos higiênico-sanitários. Em relação à conformidade com a Resolução RDC 218/05, o produto que mais se destacou foi o suco de polpa, atendendo aos procedimentos higiênico-sanitários; estrutura física e proteção do produto, fornecedores e matéria-prima. Estas unidades foram classificadas como “Bom”. A Resolução RDC 218/05, de acordo com a pesquisa realizada,por si só não se basta. Há que se implementar ações educativas, mais coerentes e viáveis, por parte da ANVISA para o controle e fiscalização da atuação dos comerciantes de alimentos e bebidas de origem vegetal, para que estes possam, através do conhecimento do risco das suas atividades, garantir a segurança alimentar dos usuários, por meio de uma manipulação e comercialização seguras. / Salvador
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Manejo sanitário de aviário de pequeno porte de frangos de corte e sua relação com a presença de Salmonella spp / Sanitary management of small broiler house and the presence of Salmonella spp

Lima, Larissa de Assis 11 July 2018 (has links)
Submitted by Liliane Ferreira (ljuvencia30@gmail.com) on 2018-09-27T12:09:55Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Larissa de Assis Lima - 2018.pdf: 3058046 bytes, checksum: a5b939547ee386a987c881d0c897ef1c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-27T12:09:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Larissa de Assis Lima - 2018.pdf: 3058046 bytes, checksum: a5b939547ee386a987c881d0c897ef1c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-07-11 / Item withdrawn by Liliane Ferreira (ljuvencia30@gmail.com) on 2018-10-01T11:33:22Z Item was in collections: Mestrado em Biociência Animal (RJ) (ID: 126) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Larissa de Assis Lima - 2018.pdf: 3058046 bytes, checksum: a5b939547ee386a987c881d0c897ef1c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Item reinstated by Liliane Ferreira (ljuvencia30@gmail.com) on 2018-10-01T11:35:58Z Item was in collections: Mestrado em Biociência Animal (RJ) (ID: 126) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Larissa de Assis Lima - 2018.pdf: 3058046 bytes, checksum: a5b939547ee386a987c881d0c897ef1c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Foodborne Diseases (FVB) are public health problem with Salmonella spp., one of the main pathogens in poultry industry. The objective was to evaluate the sanitary management of a small aviary in Jataí-GO and its relation with the presence of Salmonella spp. The establishment was characterized as family run poultry businesses with small scale production and female management. In two plots were collected for microbiological analysis environmental samples at the entrance (D0); at 28° (D28) and at 60° (D60) days; carcasses, evisceration gutter and defeathering machine. The pH and chlorine of the water were also analyzed; ambient temperatures and carcasses were measured and a good production practices monitoring form was carried out. Data analysis was descriptive considering current legislation. There was absence of Salmonella spp. in all samples (bottoms of the chicks' transport boxes; residues of egg shells from the boxes; starter grower and fattening feed; and disposable overshoes of chicks reception sheds, feeders and drinking fountains, screens, area outside the shed and compost house) and adequate values of pH, chlorine and temperature. These results showed that implementation and rigor in the monitoring of the standards present in Good Manufacturing Practices (GMP) and Standard Operating Procedures in the process of creation and processing of chicken meat, besides controlling the propagation of this pathogen in the plants and in the carcasses, ensured a final quality product to the consumer. / As Doenças Veiculadas por Alimentos (DVA) são uma problemática de saúde pública, sendo a Salmonella spp. um dos principais patógenos na avicultura. Objetivou-se avaliar o manejo sanitário de um aviário de pequeno porte em Jataí-GO e sua relação com a presença de Salmonella spp. O estabelecimento era caracterizado como agricultura familiar com produção em pequena escala e gestão feminina. Em dois lotes foram coletas amostras para análises microbiológicas do ambiente na entrada (D0), no 28º (D28) e no 60º (D60) dia; das carcaças, da bancada de evisceração e da depenadeira. Também foram aferidos o pH e o cloro da água; aferido as temperaturas do ambiente e das carcaças e realizado formulário de acompanhamento das boas práticas de produção. A análise dos dados foi descritiva considerando a legislação vigente. Verificou-se ausência de Salmonella spp. em todas as amostras (fundos das caixas de transporte dos pintinhos; resíduos das cascas de ovos das caixas; rações das fases inicial e engorda; própés da cama do galpão de recepção dos pintinhos, comedouros e bebedouros, paredes e telas, área externa ao galpão e composteira; e carcaças) e valores adequados de pH, cloro e temperatura. Desta forma, a implementação e o rigor no monitoramento dos padrões presentes nos programas de Boas Práticas de Fabricação (BPF) e Procedimentos Padrão de Higiene Operacional (PPHO) no processo de criação e processamento da carne de frango, além de controlar a propagação desse patógeno nos plantéis e nas carcaças, asseguraram um produto final de qualidade ao consumidor

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