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O papel da microbiota intestinal na competência vetorial do Lutzomyia longipalpis para a Leishmania (Leishmnia) infantum chagasi e a transmissão do parasito ao vertebrado pela da picada.

Monteiro, Carolina Cunha January 2012 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-09-11T14:49:08Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Carolina Cunha Monteiro.pdf: 2690341 bytes, checksum: c13f5fff0318498b18aff1d8e3e2f76e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-11T14:49:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Carolina Cunha Monteiro.pdf: 2690341 bytes, checksum: c13f5fff0318498b18aff1d8e3e2f76e (MD5) / FAPEMIG CNPq CAPES Fundação Oswaldo Cruz / As Leishmanioses são doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania e transmitidas pela picada dos flebotomíneos. A doença apresenta diferentes manifestações clínicas, como a leishmaniose visceral (LV). No Brasil a LV é causada pela subespécie Leishmania (L.) infantum chagasi e transmitida principalmente pelo vetor Lutzomyia longipalpis e nos últimos dez anos, a média anual de novos casos foi de 3.379. O flebotomíneo, durante o repasto sanguíneo, pode ingerir o parasito que é direcionado ao intestino médio do inseto, onde entra em contato com a microbiota. In vitro a ação dessa microbiota sobre o parasito foi avaliada demonstrando a lise na parede celular de Leishmania (L.)infantum chagasi e Leishmania (V.) braziliensis causada por Serratia marcescens, porém ainda não esta claro o seu papel no vetor. Neste trabalho foi feita a identificação por sequenciamento de DNA de isolados bacterianos do intestino médio de L. longipalpis de duas localidades brasileiras. Nas fêmeas de flebotomíeneos da Gruta da Lapinha foi encontrada pela primeira vez a bactéria da família Enterobactereaceae, Providencia sp. Nas fêmeas de Jacobina a bactéria encontrada foi a espécie Acinetobacter soli. As duas localidades apresentaram maior número de bactérias do tipo bacilos Gram negativos. Os machos de Jacobina não apresentaram crescimento bacteriano, diferentemente dos machos da Gruta da Lapinha. Para análise da influência das bactérias no desenvolvimento do parasito, Fêmeas de L. longipalpis foram infectadas com Leishmania (L.) infantum chagasi e tratadas com dois antibióticos de ação principal sobre bactérias Gram negativas, carbenicilina e gentamicina. Os parasitos do grupo tratado com carbenicilina, além de serem capazes de se estabelecer no flebotomíneos após a digestão, tiveram um aumento no seu número. O grupo tratado com gentamicina apresentou uma queda já no segundo dia pós-infecção, tendo um aumento no quinto dia. Ao incubar as bactérias identificadas no intestino médio com L. (L.) infantum chagasi in vitro, foi possível ver que as bactérias interferem no crescimento do parasito. Analisamos também a expressão de peptídeos antimicrobianos. Gambicina e defensina apresentaram diferença de expressão entre os grupos Não alimentados e Pós Digestão, sendo que a expressão foi maior em Não alimentados. No processo de interação, estabelecemos no laboratório a transmissão de L.(L.) infantum chagasi diretamente via picada do flebotomíneo a hamsters e camundongos. Os dois modelos apresentaram uma variação de 4 a 15 mil parasitos inoculados na orelha dos vertebrados. / Leishmaniasis are diseases caused by protozoa of the genus Leishmania and they are transmitted by the bite of sandflies. The disease presents different clinical manifestations, such as visceral leishmaniasis (VL). In Brazil, VL is caused by Leishmania (L.) infantum chagasi and it is transmitted by the vector bite Lutzomyia longipalpis and during the last ten years the annual new cases average of VL was 3.379. The sandfly is able to ingest the parasite during the blood meal which is directed to the insect midgut where it gets in contacts with the microbiota. The microbiota activity over the parasite was evaluated in vitro demonstrating cell walls lysis of Leishmania (L.) infantum chagasi and L. braziliensis caused by Serratia marcescens but their role in the vector is not clear yet. This work identified bacterial isolates from the L. longipalpis midgut from two deferent places in Brazil by sequencing DNA. Lapinha Cave females showed for the first time in sandflies a bacteria from the Enterobactereaceae family, Providence sp. Jacobina females’ insects presented Acinetobacter soli as a midgut bacteria. The insects from both sites showed a majority of Gram negative rods. Males from Jacobina showed no bacterial growth, unlike the Lapinha Cave ones. In order to analyze the influence of bacteria on the development of the parasite, L. longipalpis females were infected with L. (L.) infantum chagasi and treated with two difenrets antibiotics for Gram negative bacterias, carbenicillin and gentamicin. Carbenicillin treated group parasites were able to establish infection in sand flies after digestion increasing the number of parasites. The gentamicin treated group featured a parasite drop since the second day postinfection, having an increasing on the fifth day. Incubating in vitro those bacterias identified in the midgut with L. (L.) infantum chagasi, could be seen that bacteria interfere on parasite growth. We also analyzed the antimicrobial peptides expression in the insects. Gambicina and defensin expression differ between groups; Not Fed and Post Digestion. The expression was higher in Not Fed one. In the interaction process, we established the laboratory transmission of L. (L.) infantum chagasi directly by the sandfly bite on hamsters and mice. Both models showed a range 4 to 15 million parasites inoculated into the vertebrates’ ear.

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