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Identificação de perfis diferenciais de metilação do DNA na endometriose /Zimbardi, Daniela. January 2010 (has links)
Orientador: Cláudia Aparecida Rainho / Banca: Maria Claudia Moura Campos / Banca: Ester Silveira Ramos / Resumo: A endometriose constitui uma doença de etiologia incerta, caracterizada pela presença de tecido endometriótico fora da cavidade uterina. E uma causa comum de morbidade, atingindo 5 a 10% das mulheres em idade reprodutiva. A metilção anormal na região promotora de genes especificos e os niveis de expressão alterados das DNA metiltransferases (DNMTs) compoem 0 conjunto de evidencias recentes indicando a endometriose como uma doença epigenetica. 0 presente estudo propos a investigaçao do perfil diferencial de metilaçao do DNA na endometriose, utilizando uma abordagem genomica de alta resoluçao baseada na metodologia de microarrays. Para isso, foram coletadas amostras pareadas de endometrio eutópico e de endometriose intestinal profunda de 18 pacientes. Foram selecionadas dez amostras pareadas para a hibridação do DNA: cinco casos foram submetidos ao enriquecimento das sequencias não metiladas (digerido com a enzima de restrição dependente de metilação McrBC ) e nove ao enriquecimento das sequencias metiladas (digerido com 0 coquetel de enzimas sensiveis a metilação do DNA Acil, HinP11, HpyCH41Ve Hpall). Os ensaios foram realizados em duplicatas totalizando 28 hibridações independentes na plataforma disponivel comercialmente Human CpG Island ChIP-on-Chip Set 244K (Agilent Technologies). Este protocolo foi previamente padronizada utilizando-se 0 DNA das linhagens derivadas de carcinomas de c610n HCT116 e DKO (celulas HCT116 duplo knockout para as DNMT1 e DNMT3b) usando marcação reversa (dye swap). Os dados foram avaliados nos software Agilent Technologies Genomic Workbench (DNA Analytics 5.0) e GeneSpring 7.3 (Agilent Technologies). Estre os 925 genes que apresentaram metila9ao diferencial, 55 foram recorrentes em dois ou mais casos. Varios destes genes mostram-se interessantes por exercerem funções relacionadas a fatores de transcrição (MSX1, EMX2, HOXB13, HOXD8 e HOXD9)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Endometriosis is a disease of unknown etiology characterized by the presence of endometrial tissue outside the uterine cavity. It is a common cause of morbidity, affecting 5-10% of women in reproductive ages. The aberrant methylation in the promoter region of specific genes and the higher expression levels of DNA methyltransferases (DNMTs) in comparison with normal endometrium have been reported as evidences indicating that endometriosis is an epigenetic disease. The present study investigated the differential profile of DNA methylation in endometriosis using a high-resolution microarray-based assay. There were collected paired samples of eutopic endometrium and deep intestinal endometriosis from 18 patients and, subsequently, it was selected ten pairs to the DNA hybridization: five matched samples were submitted to the enrichment of unmethylated sequences (digested with the methylation-dependent restriction enzyme McrBG) and ten to the enrichment of methylated sequences (digested with the cocktail of enzymes sensitive to DNA methylation AGII, HinP1/, HpyGH4/V and Hpa/I). The assays were performed in duplicates totalizing 28 independent hybridizations in the commercially available platform Human CpG Island ChIP-on-Chip Set 244K (Agilent Technologies). The protocol was previously standardized using the DNA from the colon carcinomas cell lines HCT116 and DKO (HCT116 cells double-knockout for DNMT1 and DNMT3b) using reverse labeling (dye swap). The data were evaluated using the software Genomic Workbench (DNA Analytics 5.0) and GeneSpring 7.3. Among the 925 genes showing differential methylation, 55 genes were detected in at least two cases. Several of these gene could be considered good candidates to molecular biomarkers of endometriosis since that they act as transcription factors (MSX1, EMX2, HOXB13, HOXDB e HOXD9) , chromatin remodeling (MAD1L 1, WDR5 e BGOR)... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Determinação de citocinas no diagnóstico laboratorial da endometriose peritoneal mínima e leve /Ihlenfeld, Mauro Fernando Kürten. January 2007 (has links)
Orientador: Rogério Dias / Banca: Jorge Nahás / Banca: Waldir Pereira Modotte / Banca: Reginaldo Guedes Coelho Lopes / Banca: Ilza Maria Urbano Monteiro / Resumo: As dosagens da leptina, da interleucina-6 (IL-6) e do fator de necrose tumoral alfa (TNF-a) foram avaliadas no diagnóstico da endometriose peritoneal mínima e leve (estádios I e 11 - American Society for Reproductive Medicine). Participaram, deste estudo prospectivo e casocontrole, 29 mulheres, em idade reprodutiva, submetidas a videolaparoscopia. O grupo de estudo foi composto por 15 pacientes em investigação de esterilidade conjugal ou dor pélvica crônica (grupo E) e o grupo controle por 14 mulheres assintomáticas encaminhadas para realização de ligadura tubária (grupo C). Foram coletadas amostras de sangue periférico e líquido peritoneal para a dosagem laboratorial das citocinas determinadas por meio de testes ELlSA. No soro, não se observou diferenças significantes nas amostras de leptina, de IL-6 e do TNF-Q entre os grupos estudados (p>O,05). No líquido peritoneal, houve diferenças significantes nas dosagens da leptina e do TNF-Q entre os grupos estudados (p<O,05);não havendo diferenças significantes para as amostras de IL-6 (p>O,05). No líquido peritoneal, há evidências da possibilidade da utilização da leptina e do TNF-Q no diagnóstico da endometriose mínima ou leve, na amostra estudada. / Abstract: The levels of leptin, interleukin-6 (IL-6) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-o) were evaluated as a diagnostic tool for minimal and mild peritoneal endometriosis (stages I and II - American Society for Reproductive Medicine). lhe subjects of this prospective, case-control study were 29 women of reproductive age, who underwent laparoscopy. Subjects of the study-group were 15 women under investigation of infertility or chronic pelvic pain (E-group) and controls were patients with no symptoms in which tubal ligation would be performed (C-group). In ali these patients were collected samples of peripheral blood and peritoneal f1uid, in order to determine cytokine levels employing ELlSA tests. There were no statistical differences of the sera on the studied groups concerning the levels of leptin, IL-6 and TNF-o (p> 0.05). There were statistical differences in the peritoneal fluid of the studied groups, concerning the levels of leptin and TNF-o (p< 0.05) but not for IL-6 (p> 0.05). There is an evidence of using leptin and TNF-o in the peritoneal f1uid as a diagnostic tool for minimal and mild endometriosis. / Doutor
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Avaliação do padrão de metilação de regiões promotoras dos genes ESR1, ESR2 e PGR na endometriose profunda intestinal /Meyer, Joana Ladeira. January 2011 (has links)
Orientador: Cláudia Aparecida Rainho / Banca: Roberta Guembarovisk / Banca: Celia Regina Nogueira / Resumo: A endometriose é uma doença inflamatória estrógeno-dependente que afeta de 5 a 10% das mulheres em idade reprodutiva. É caracterizada pela presença de tecido endometrial fora da cavidade uterina e está associada à dismenorreia, dor pélvica e infertilidade. Os níveis de expressão dos receptores nucleares SF1 (fator esteroidogênico 1), estrógeno e progesterona estão alterados no tecido endometriótico comparado ao endométrio normal. Estudos prévios relataram que os genes codificadores dos receptores dos hormônios esteróides ESR1 (receptor de estrógeno 1), ESR2 (receptor de estrógeno 2) e progesterona (PGR) apresentam promotores alternativos que são modulados epigeneticamente por alterações na metilação do DNA, que ocorre preferencialmente nas ilhas CpG presentes nestas regiões. Em células endometriais normais foi observada uma associação entre a presença de metilação e ausência de expressão dos genes SF1 e ESR2 (receptor de estrógeno â) enquanto a perda da metilação foi correlacionada com níveis aumentados de expressão gênica na endometriose peritoneal e ovariana. Com base nestas evidências, o presente trabalho investigou o padrão de metilação dos genes PGR (promotores A e B), ESR1 (promotores A e B) e uma região intragênica ao ESR2. O promotor B do gene PGR e a ilha CpG localizada na 5'UTR do gene ESR2 foram avaliadas em 44 amostras de endometriose profunda intestinal pela técnica de MSP (Methylation-Specific Polymerase Chain Reaction). Em sete destas, também foi possível a investigação na amostra pareada de endométrio eutópico. O padrão de metilação dos promotores A e B do gene ESR1 e o promotor A do gene PGR... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Endometriosis is an estrogen-dependent inflammatory disease which affects 5 to 10% of women of reproductive age. This disease is characterized by the presence of endometrial tissue outside the uterine cavity and is associated with dysmenorrhea, pelvic pain, and infertility. Abnormal expression levels of SF1 (steroidogenic factor 1), estrogen and progesterone nuclear receptors were detected in the endometriotic tissue compared to the normal endometrium. Previous studies have reported that genes encoding the steroid hormone receptors ESR1 (estrogen receptor 1), ESR2 (estrogen receptor 2) and progesterone (PGR) are characterized by alternative promoters epigenetically regulated by DNA methylation at CpG islands co-localized in these regions. In normal endometrial cells, it was observed an association between DNA methylation and absence of expression of the genes SF1 and ESR2 (estrogen receptor â), while loss of DNA methylation was correlated with increased expression levels of these genes in peritoneal and ovarian endometriosis. Based on these findings, this study investigated the methylation pattern of the PGR (promoters A and B), ESR1 (promoters A and B) genes and an intragenic region of the gene ESR2. The promoter B of PGR gene and the CpG island mapped at 5 'UTR of the ESR2 gene were evaluated in 44 samples of intestinal deep endometriosis by MSP (methylation-specific polymerase chain reaction). In seven cases, paired samples of eutopic endometrium from the same patients were also evaluated, the methylation patterns of the ESR1 gene (promoters A and B) and the promoter region A of the PGR gene were investigated in 37 samples of endometriosis. The MSP method is based on the DNA modification by sodium bisulfite, which converts unmethylated cytosines to uracil. Subsequently, the target region... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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