Orientador: Julio Lopes Sequeira / Banca: Ana Maria Reis Ferreira / Banca: Alessandre Hataka / Banca: Noeme Sousa Rocha / Marco Antônio Alvarenga / Resumo: A endometrite é a principal causa de subfertilidade em éguas sendo o processo fibrótico fator limitante no desempenho reprodutivo nesta espécie. Este trabalho teve por objetivos avaliar o colágeno presente nas endometrites crônicas das éguas, a expressão das enzimas que degradam o colágeno e de seus inibidores e as alterações vasculares. 82 biópsias uterinas recebidas na FMVZ, UNESP, Botucatu, SP foram classificadas histologicamente e a fibrose foi avaliada pelos métodos de tricrômico de Masson e picrosirius red. A avaliação vascular foi feita pelo VVG. Verificou-se a expressão das enzimas MMP-1, MMP-2, MMP-7, MMP-9 e TIMP-1 por método imunoistoquímico. A quantidade de colágeno na fibrose endometrial foi maior nas regiões periglandulares, perivasculares e no estrato esponjoso, predominando o colágeno tipo I. Quanto maior o grau de endometrite mais acentuada era a esclerose vascular e a fibroelastose. Não houve diferença na expressão das MMP-1, MMP-2, MMP-7, MMP-9 e TIMP-1 entre éguas normais e com endometrites. Porém houve diferença em relação à intensidade de marcação notando-se que esta aumentava em determinadas regiões do endométrio. As MMPs e o TIMP-1 estão envolvidos nos processos fibróticos endometriais das éguas uma vez que estas enzimas variam em expressão e intensidade de reação conforme o grau de endometrite / Abstract: Endometritis is the main cause of mare subfertility and the associated uterine fibrotic process is a limitant factor for the reproductive performance. The aim of this work was to evaluate the collagen distribution and type, the enzymes that are responsible for collagen degradation and its inhibitors, and vascular changes in the endometrium of normal and chronic endometritis carrying mares. So a prospective and comparative study was conducted at Veterinary Hospital of Veterinary College UNESP, Botucatu-SP. Eighty-two uterine biopsy were histologically classified in paraffin sections stained with hematoxylin and eosin, Masson's Trichrome and Verhoeff van Gieson (VVG) stains examined under the light microscope. Picrosirius red polarization was also used for collagen evaluation. The MMP-1, MMP-2, MMP-7, MMP-9, and TIMP-1 expressions was obtained by immunohistochemichal method. The collagen concentration in fibrotic endometrium was higher at periglandular, perivascular and stratum spongiosum regions with collagen type I predominance. In the most severe endometritis had more advanced grades of vascular sclerosis and fibroelastosis. No difference was found in MMP-1, MMP-2, MMP-7, MMP-9, and TIMP-1 expressions between normal and chronic endometritis samples, but the immunohistochemical reaction was more intense in some regions of fibrotic endometrium. In conclusion, the MMPs and TIMP-1 showed variation in expression and reaction intensity in the normal and chronic affected endometrium and may plays a hole in the endometrial fibrotic process / Doutor

Orientador: Julio Lopes Sequeira / Banca: Alessandre Hataka / Banca: Noeme Sousa Rocha / Resumo: O presente trabalho teve por objetivos avaliar os graus de fibrose endometrial das éguas, especificando por técnicas histoquímicas os tipos de colágeno e sua proporção nas lesões crônicas, além de verificar por método imunoistoquímico a expressão e distribuição das metaloproteinases (MMP) 2 e 9 e um dos seus inibidores - TIMP-1 - nos processos crônicos endometriais. Foram utilizadas 82 biópsias endometriais classificadas histologicamente de acordo com Kenney e Doig (1986) e segundo as definições de Ricketts & Alonso (1991) para endometrite crônica infiltrativa e endometrose. A avaliação do colágeno foi realizada pelos métodos histoquímicos Tricrômico de Masson, Reticulina e Picrosirius Red. Estudo morfométrico da fibrose periglandular foi realizado utilizando-se a técnica histoquímica do Picrosirius Red. Os resultados mostraram que nos endométrios portadores de endometrite severa há deposição de colágeno do tipo III e do tipo I, sendo este predominante. Não houve diferença significativa na extensão da fibrose periglandular entre as endometrites crônicas infiltrativas e endometroses. Tanto no endométrio hígido como nas endometrites crônicas foi observada imuno-reatividade para as enzimas estudadas. A reação imunoistoquímica para MMP-2 foi localizada no epitélio luminal, glandular, parede vascular e células estromais. MMP-9 e TIMP-1 mostraram marcação mais difusa, sendo também observadas nas células inflamatórias e endoteliais. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the degrees of endometrial fibrosis in mares, specifying the types of collagen in the chronical lesions and its ratio by histochemical analysis and, the expression and distribution of matrix metalloproteinases (MMP) 2, -9 and one of its inhibitors - TIMP-1 - in the endometrial chronic processes by means of immunohistochemistry. Eighty-two biopsies of chronic endometritis were classified according to Kenney and Doig (1986) and definitions of Ricketts & Alonso (1991) for chronic infiltrative endometritis and endometrosis. The collagen evaluation was made by Massonþs trichrome, Reticulin and Picrosirius Red staining methods. The endometrial periglandular fibrosis morfometric analysis was carried out by using Picrosirius Red stained slides. Deposition of type III collagen and type I collagen was seen in severe endometritis with type I predominance. The chronic infiltrative endometritis and endometrosis didn't show significant difference in the extension of periglandular fibrosis. Immunoreactivity of MMP-2, MMP-9 and TIMP-1 was detected in healthy endometrium as in severe chronic endometritis. The luminal epithelium, glandular epithelium, vascular wall and stromal cells expressed MMP-2. MMP-9 and TIMP-1 had shown diffuser marking, and were as well observed in the inflammatory cells and the endothelium. / Mestre

Orientador: Julio Lopes Sequeira / Banca: Lousiane de Carvalho Nunes / Banca: Noeme Sousa Rocha / Resumo: A biópsia uterina é uma ferramenta valiosa utilizada na avaliação da fertilidade da égua. 0 objetivo deste trabalho foi estudar a relação entre a presença de miofibroblastos, a expressão da MMP-2 e a intensidade do processo fibrótico nas endometrites crônicas das éguas. Foram utilizadas 60 biópsias uterinas de éguas provenientes da rotina do Hospital Veterinário da FMVZ - UNESP, Campus de Botucatu. Biópsias endometriais classificadas histologicamente de acordo com Kenney e Doig (1986) e segundo as definições de Ricketts e Alonso (1991) para endometrite cronica infiltrativa e endometrose. A avaliação dos graus de fibrose endometrial foi feita par meio dos métodos histoquímicos Tricrômico de Masson e Picrosirius Red. A expressão da MMP-2 assim como a expressão de actina de músculo liso α dos miofibroblastos foi avaliada utilizando-se tecnica imunoistoquímica. A quantidade de colágeno na fibrose endometrial foi maior nas regiões periglandulares, perivasculares e no estrato esponjoso, predominando o colágeno do tipo I. Tanto no endométrio hígido como nas endometrites crônicas foi observada imuno-reatividade para as enzimas estudadas. A α-SMA e a MMP-2 estão envolvidas nos processos fibróticos endometriais das éguas uma vez que estas enzimas aumentam em expressão e intensidade de reação conforme o grau de endometrite. / Abstract: Uterine biopsy is a valuable tool for evaluation of mare's fertility. The aim of this work was to study the relation between the presence of myofibroblasts, the expression of MMP-2 and the intensity of fibrotic process in chronic endometritis in mares. Sixty mare's uterine biopsies from the Veterinary Hospital routine of FMVZ-UNESP, Campus of Botucatu, were used. Biopsies of chronic endometrites were classified according to Kenney and Doig (1986) and definitions Ricketts & Alonso (1991) for chronic infiltrative endometrites and endometrosis. Evaluations of endometrial fibrotic levels were done by histochemical methods. Masson and Picrosirius Red Tricromio. The expression of MMP-2 as the expression of myofibroblasts straight α- smooth muscle actin was evaluated using immunohistochemical techniques. The collagen concentration in fibrotic endometrium was higher at periglandular, perivascular and stratum spongiosum regions with collagen type I predominance. Imnunoreactivity of α-SMA and MMP-2 was detected in healthy endometrium as in severe chronic endometritis. The a- SMA and MMP-2 showed variation in expression and reaction was more intense in the normal and chronic affected endometrium and may plays a hole in the endometrial fibrotic process. / Mestre