Orientadores: Dagmar Ruth Stach-Machado, Gisele Abigail Montan Torres / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T19:49:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lorenzi_MarcelSalmeron_M.pdf: 4641112 bytes, checksum: 98293f35d81cf7287376bbbf8a203993 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: No Brasil a batata é considerada uma das principais hortaliças produzidas, tanto em área plantada quanto em consumo. A produção anual é em torno de 2 milhões de toneladas, ocupando uma área superior a 130 mil hectares, gerando cerca de 500 mil empregos. Nos últimos anos, a bataticultura brasileira vem sofrendo perdas significativas devido ao aumento da incidência de viroses, principalmente provocadas pelo vírus Y da batata (Potato virus Y - PVY). Mundialmente, são conhecidas pelo menos três linhagens distintas do vírus Y: PVYO, PVYC e PVYN, cujos sintomas variam de acordo com o ambiente e a planta hospedeira. A linhagem PVYN apresenta uma variante denominada PVYNTN, que provoca sintomas de mosaico foliar mais intenso e a indução de formação de anéis necróticos nos tubérculos. A presença de focos de infecção de PVY em índices acima de 4% (limite de tolerância regulamentada pelo Ministério de Agricultura, Pecuária e Abastecimento) é suficiente para condenar o uso de determinadas lavouras para a produção de batata-semente, além de representar grandes danos em cultivos comerciais de batata para consumo. Já o PVX pode representar um grande problema quando em associação com o PVY. É um vírus cosmopolita, sendo transmitido mecanicamente e caracterizado por mosaico leve nas folhas, mais visíveis na metade inferior da planta. Atualmente, a análise de fitossanidade e a indexação viral da batata-semente destinada à multiplicação comercial no Brasil são efetuadas através da combinação da utilização de plantas indicadoras, que demanda tempo, e por testes sorológicos como ELISA, os quais representam custos adicionais à cadeia produtiva, uma vez que o Brasil é dependente da importação dos antisoros de detecção. Deste modo, considerando a relevância do estabelecimento de testes de diagnóstico nacionais que permitam a identificação específica dos vírus Y e X, em virtude da grande incidência de infecções do PVY e da grande necessidade de proteção contra o aumento da introdução do PVX, com oagravante de grandes prejuízos na co-infecção, os objetivos específicos deste projeto foram produzir soros policlonais específicos para o PVX e PVY, estabelecer ELISA indireto e desenvolver diagnóstico molecular dos vírus através de primers específicos e do IC-RTPCR. Esse trabalho conseguiu isolar e purificar os vírus X e Y através da indexação biológica e protocolos de extração. Com isso, foi possível produzir e caracterizar os anticorpos policlonais para o PVY e o PVX, com grande especificidade e poder de detecção. Após essas etapas, foi realizado a construção de primers específicos, e o desenvolvimento de técnicas moleculares de detecção baseadas na extração de material genético de folhas infectadas e PCR com os respectivos primers, obtendo-se os respectivos fragmentos esperados, concluindo com sucesso o estabelecimento do teste. Por fim, tentouse estabelecer o IC-RT-PCR, todavia o tamanho reduzido das partículas virais inviabilizou a realização do teste, mas a execução da detecção por ELISA e molecular separadamente foi estabelecido com sucesso, permitindo agregar novas tecnologias nacionais e contribuindo com a redução dos custos para a execução dos testes de fitossanidade, importantes e imprescindíveis para o controle das viroses predominantes na bataticultura nacional. / Abstract: The potato culture (Solanum tuberosum L.) represents the fourth major vegetal production in the world, reaching productivity indexes which overcome that of cerals in 5 times. Potato crop may be affected by several disease. Actually, some references point out near 40 in a total of 70 disorders are caused by viral agents. Among the most important viruses of potato, virus X and Y usually cause major concern, due to their harmfull effects in productivity and comercialization of potato. Nowadays, the viral infecctions have found their way into Brazil's potato production reagions in a very fast maner. The state of São Paulo is the most afeccted. Althought potato crop is among the stocks 10 major crops in the country, its production relies on virus-free imported potato-seeds to mantain its production. This is not only responsable by a considerable part of the production costs, but also represents a dangerous entrance door for a number of exotic pathogens inexistent in our territory. Thus, a fitosanity control of imported seed-potato lots, which enter Brazil via Santos harbor in the State of São Paulo, has fundamental importance. The usage of imunodiagnosis like ELISA, althought being efficient and widely applied, results in an additional cost due to the dependency of Brazil on the importation of policlonal antisera and monoclonal antibodys necessaries for the proper detection of the most important virus afeccting the national potato plantations. It has becoming a must for the seed-potato production a program in Brazil to have our independence of the diagnoses antiserum reagents for ELISA to at least the most important seed-potato viruses. The independence on importation of these biotecnological products and the modernization of imunodiagnosis by applying molecular techniques with specifics primers and like IC-RT-PCR (ImmoCapture - Reverse Transcriptase - Polimerase Chain Reaction), which makes possible to detect the major potato's virus in a fast, efficient and cheap way in order to screen the sanity of the material produced in the country, leading to a increase in production and stating the quality of it. This work isolated and purified the virus X and Y by biological indexing and extraction protocols. Therefore, it was possible to produce and to characterize the polyclonals antiserum to PVX and to PVY, with great specificity and power of detection. After these steps, it was made specifics primers and the development of molecular detection techniques based on extraction of genetic material from infected leaves and PCR with the primers. The expected fragments was obtained, concluding with successful the establishment of the test. Finally, there was the attempt to establish the IC-RT-PCR, however the small size of viral particles prevented the test, but the implementation of detection by ELISA and molecular separately was successful, add new national technologies allowing and contributing to the reduction of costs for implementing of the fitosanitty tests, importants and essentials for the control of viruses prevailing in the national potato culture. / Mestrado / Imunologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular