Skin cancer is the most widely diagnosed form of cancer and it is split in to non-melanoma skin cancer (NMSC) and cutaneous malignant melanoma (CMM). Cutaneous melanoma has a high propensity for malignancy and it has the highest mortality rate of all skin cancers (de Gruijl, 1999:2004). The first line of treatment for most skin cancers is surgical excision but instances do arise in which surgery is not feasible due to the health of the patient or the location of the lesion. Therefore, viable alternatives are necessary in cases where surgery is not possible (Telfer et al., 2008:36). The skin is readily available for delivery of cytotoxic drugs to treat carcinomas and melanomas so the topical delivery of 5-fluorouracil was investigated in this study. 5-Fluorouracil is a pyrimidine anti-metabolite which interferes with deoxyribonucleic acid (DNA) and ribonucleic acid (RNA) synthesis by inhibiting the nucleotide synthetic enzyme thymidylate synthase (TS) and by becoming misincorporated into RNA and DNA. Thymidylate is essential for replication as well as repair of DNA, in the event of TS inhibition thymidylate is not formed and “thymineless deaths” of cells occur (Chu & Sartorelli, 2009:935; Longley et al., 2003:330). This active pharmaceutical ingredient (API) causes death of atypical and rapidly dividing cells (Tsuji & Karasek, 1986:474). The intravenous and topical routes are approved for 5-fluorouracil and in the case of skin cancer the obvious choice would be topical application (Chu & Sartorelli, 2009:935). Topical application of 5-fluorouracil results in the occurrence of terrible side effects such as severe inflammation, stomatitis, photosensitivity and dermatitis. A reduction in side effects would reduce the stigma associated with topical 5-fluorouracil and in turn increase patient compliance. Topical drug delivery entails the delivery of an API onto or into the various layers of the skin (Flynn & Weiner, 1993:33) in order to treat conditions on or within the skin. Topical application of APIs is non-invasive, painless and simple plus the target site is readily accessible for topical therapy, thus the API is delivered directly to the site of action (Naik et al., 2000:318). In the case of skin cancer, 5-fluorouracil should be able to reach the epidermis because NMSC originates from the keratinocytes (Marks & Hanson, 2010:305) and CMM from melanocytes (de Gruijl, 1999:2004) which are both found in the epidermis. The barrier function of the skin limits the penetration of molecules into the skin and the rate-limiting step is usually penetration into the stratum corneum (Foldvari, 2000:418). The aim of this study was to investigate the diffusion of 5-fluorouracil from formulations into and through the skin. Two physico-chemical properties of 5-fluorouracil that influence skin permeation were determined (aqueous solubility and n-octanol-buffer partition coefficient (log D)). The Pheroid™ drug delivery system was used to enhance the delivery of 5-fluorouracil (Grobler et al., 2008:284). Pheroid™ is a novel technology that is used in the delivery of APIs in pharmaceutical products. It enhances the efficacy of delivered compounds while allowing for the reduction of unwanted adverse effects (Grobler et al., 2008:284). Franz cell skin diffusion studies and tape-stripping were conducted with Pheroid™ and non-Pheroid™ formulations to allow for comparison and determination of the effect of Pheroid™. The in vitro efficacy of 5-fluorouracil in inducing apoptosis of human melanoma cells was investigated using a flow cytometric apoptosis assay. Different concentrations of 5-fluorouracil in formulation were utilised in the experiments so as to observe the cytotoxic effect of 5-fluorouracil. The effect of the drug delivery vehicle on the efficacy of 5-fluorouracil was investigated by utilising API solutions in addition to Pheroid™ and non-Pheroid™ formulations in the experiments. Relatively high concentrations of 5-fluorouracil diffused into and through the skin with Pheroid™ formulations resulting in a greatly enhanced in vitro skin permeation of 5-fluorouracil. The tape-stripping revealed that the Pheroid™ lotions resulted in higher concentrations of 5-fluorouracil in the epidermis and dermis after 12 h as compared to the lotions. There was no deducible trend with respect to the distribution of 5-fluorouracil between the epidermis and dermis. Subsequent to the apoptosis assay it was found that 5-fluorouracil was able to induce apoptosis in A375 cells after a 24 h incubation period. The Pheroid™ treatment of cells resulted in a greater response (mean fluorescence intensity) as compared to treatments with the other drug delivery vehicles at three of the four concentrations. This showed that the drug delivery vehicle played a role in the in vitro efficacy of 5-fluorouracil. Further research must be done in order to combine these results. Optimum and highly effective topical formulations with low doses of 5-fluorouracil must be formulated for the purpose of treating cutaneous cancers with a reduced incidence of side effects. / Thesis (MSc (Pharmaceutics))--North-West University, Potchefstroom Campus, 2013.

Skin cancer is the most widely diagnosed form of cancer and it is split in to non-melanoma skin cancer (NMSC) and cutaneous malignant melanoma (CMM). Cutaneous melanoma has a high propensity for malignancy and it has the highest mortality rate of all skin cancers (de Gruijl, 1999:2004). The first line of treatment for most skin cancers is surgical excision but instances do arise in which surgery is not feasible due to the health of the patient or the location of the lesion. Therefore, viable alternatives are necessary in cases where surgery is not possible (Telfer et al., 2008:36). The skin is readily available for delivery of cytotoxic drugs to treat carcinomas and melanomas so the topical delivery of 5-fluorouracil was investigated in this study. 5-Fluorouracil is a pyrimidine anti-metabolite which interferes with deoxyribonucleic acid (DNA) and ribonucleic acid (RNA) synthesis by inhibiting the nucleotide synthetic enzyme thymidylate synthase (TS) and by becoming misincorporated into RNA and DNA. Thymidylate is essential for replication as well as repair of DNA, in the event of TS inhibition thymidylate is not formed and “thymineless deaths” of cells occur (Chu & Sartorelli, 2009:935; Longley et al., 2003:330). This active pharmaceutical ingredient (API) causes death of atypical and rapidly dividing cells (Tsuji & Karasek, 1986:474). The intravenous and topical routes are approved for 5-fluorouracil and in the case of skin cancer the obvious choice would be topical application (Chu & Sartorelli, 2009:935). Topical application of 5-fluorouracil results in the occurrence of terrible side effects such as severe inflammation, stomatitis, photosensitivity and dermatitis. A reduction in side effects would reduce the stigma associated with topical 5-fluorouracil and in turn increase patient compliance. Topical drug delivery entails the delivery of an API onto or into the various layers of the skin (Flynn & Weiner, 1993:33) in order to treat conditions on or within the skin. Topical application of APIs is non-invasive, painless and simple plus the target site is readily accessible for topical therapy, thus the API is delivered directly to the site of action (Naik et al., 2000:318). In the case of skin cancer, 5-fluorouracil should be able to reach the epidermis because NMSC originates from the keratinocytes (Marks & Hanson, 2010:305) and CMM from melanocytes (de Gruijl, 1999:2004) which are both found in the epidermis. The barrier function of the skin limits the penetration of molecules into the skin and the rate-limiting step is usually penetration into the stratum corneum (Foldvari, 2000:418). The aim of this study was to investigate the diffusion of 5-fluorouracil from formulations into and through the skin. Two physico-chemical properties of 5-fluorouracil that influence skin permeation were determined (aqueous solubility and n-octanol-buffer partition coefficient (log D)). The Pheroid™ drug delivery system was used to enhance the delivery of 5-fluorouracil (Grobler et al., 2008:284). Pheroid™ is a novel technology that is used in the delivery of APIs in pharmaceutical products. It enhances the efficacy of delivered compounds while allowing for the reduction of unwanted adverse effects (Grobler et al., 2008:284). Franz cell skin diffusion studies and tape-stripping were conducted with Pheroid™ and non-Pheroid™ formulations to allow for comparison and determination of the effect of Pheroid™. The in vitro efficacy of 5-fluorouracil in inducing apoptosis of human melanoma cells was investigated using a flow cytometric apoptosis assay. Different concentrations of 5-fluorouracil in formulation were utilised in the experiments so as to observe the cytotoxic effect of 5-fluorouracil. The effect of the drug delivery vehicle on the efficacy of 5-fluorouracil was investigated by utilising API solutions in addition to Pheroid™ and non-Pheroid™ formulations in the experiments. Relatively high concentrations of 5-fluorouracil diffused into and through the skin with Pheroid™ formulations resulting in a greatly enhanced in vitro skin permeation of 5-fluorouracil. The tape-stripping revealed that the Pheroid™ lotions resulted in higher concentrations of 5-fluorouracil in the epidermis and dermis after 12 h as compared to the lotions. There was no deducible trend with respect to the distribution of 5-fluorouracil between the epidermis and dermis. Subsequent to the apoptosis assay it was found that 5-fluorouracil was able to induce apoptosis in A375 cells after a 24 h incubation period. The Pheroid™ treatment of cells resulted in a greater response (mean fluorescence intensity) as compared to treatments with the other drug delivery vehicles at three of the four concentrations. This showed that the drug delivery vehicle played a role in the in vitro efficacy of 5-fluorouracil. Further research must be done in order to combine these results. Optimum and highly effective topical formulations with low doses of 5-fluorouracil must be formulated for the purpose of treating cutaneous cancers with a reduced incidence of side effects. / Thesis (MSc (Pharmaceutics))--North-West University, Potchefstroom Campus, 2013.

The skin is an amazingly resilient and relatively impermeable barrier that provides protective, perceptive and communication functions to the body (Ramachandran & Fleisher, 2000). The stratum corneum is widely accepted as the barrier of the skin - limiting the transport of molecules into and across the skin. One of the bottlenecks in the successful development of transdermal drug delivery devices is the fact that the skin (more accurately, the stratum corneum - SC) tends to control the rate of drug transport. This makes it very difficult to influence or regulate the transdermal drug absorption kinetics from outside, Le. by means of the vehicle. A possible, and even elegant, solution may be the use of so-called "penetration enhancers", thereby suppressing the dominant role of the stratum corneum penetration barrier (Bodde et al., 1990). For this study 5-fluorouracil (5-FU), a polar hydrophilic drug, was chosen as model drug to study its penetration through the stratum corneum. Terpenes used as possible penetration enhancers for 5-FU were menthol, isomenthol, menthone, l3-myrcene, limonene and 1,8-cineole. In previous studies, terpenes with low skin irritancy and low systemic toxicity, were found to be effective penetration enhancers for a number of hydrophilic and lipophillic drugs (Cornwell & Barry, 1994; Cornwell et a/., 1996; Godwin & Michniak, 1999). The objective of this study was to determine the different flux rates of 5-FU in the absence of any pre-treatment of the stratum corneum and also through ethanol and selected terpene pre-treated SC. The effect of each terpene on the penetration of 5-FU was determined. The penetration of the selected terpenes themselves through the human stratum corneum was also determined in vitro permeation studies were performed using vertical Franz diffusion cells with human skin (stratum corneum). A saturated aqueous solution of 5-fluorouracil in the absence and presence of pre-treatment of the SC was used as the donor phase. Pre-treatment was performed by applying a 5 % terpene solution or absolute ethanol to the SC half an hour before the saturated III solution was applied in the donor compartment. A 50/50 ethanol/water solution was used as the receptor phase. All the experiments were conducted over a 24 h period. The 37°C temperature was held constant by means of a water bath. For the analysis of 5-FU flux rates, samples from the receptor compartment were obtained and were analysed by means of high-pressure liquid chromatography (HPLC). In order to determine the cumulative percentage of terpenes penetrated through human stratum corneum, the samples were analysed by gas chromatography (GC). In this study, only menthol and isomenthol (both oxygen-containing terpenes) showed a statistically significant increase on the flux of 5-FU, with flux values of 1.13 +- 0.38 and 1.45 +- 0.68 ug/cm2/h, respectively, compared to untreated skin with a flux value of 0.54 +- 0.23 ug/cm2/h for 5-FU. It was also proved that ethanol itself had an enhancing effect on 5-FU and showed synergistic effects on the enhancement activities of all the terpenes. It was found that all the terpenes (applied as a 5 % solution in ethanol) penetrated through the stratum corneum in the absence of 5-fluorouracil. 5-Fluorouracil had either an increasing or decreasing effect on the penetration of the terpenes. From these findings, it could be concluded that oxygen-containing terpenes had the best penetration enhancing effect on 5-FU and that menthol and isomenthol were the most effective penetration enhancers, although the extend of penetration enhancement is not large enough for clinical application. All the terpenes have the ability to penetrate through human stratum corneum, and 5-FU either had an increasing or decreasing effect on their penetration. / Thesis (M.Sc.)--North-West University, Potchefstroom Campus, 2004.

The skin is the largest and most easily accessible organ of the human body thus making it the ideal route for systemic drug delivery. The transdermal route of drug delivery offers several advantages compared to the traditional routes including elimination of first pass metabolism and higher patient compliance. However, many drugs are topically and systemically ineffective when applied onto the skin, due to their almost complete failure to penetrate the skin. The main limitation lies in the stratum corneum, the barrier of the skin, which prevent the drug from reaching the deeper skin strata. 5-Fluorouracil is a polar hydrophilic drug and is therefore not a good penetrant through skin. A popular technique to increase transdermal permeation is to use a penetration enhancer, which reversibly reduce the permeability barrier of the stratum corneum. The primary aim of this study was to determine the effect of Brij 97 in the presence and absence of carrageenan on the transdermal delivery of 5-fluorouracil. The formulations were identified by means of confocal laser scanning microscopy and measurement of the particle size. The zeta-potential was measured to determine whether the formulations were stable and the pH was measured to determine if the internal structures of the formulations were affected by the drug. The drug released from the formulations was measured with a VanKel dissolution apparatus. In vitro transdermal diffusion studies were performed using vertical Franz diffusion cells with human epidermal skin. Histopathological studies were carried out on human epidermis skin to determine if the surfactant, Brij 97, had any effect on the skin. Through confocal laser scanning microscopy and particle size measurements, the 4 and 8% Brij 97 formulations without carrageenan could be identified as emulsions while the 15 and 25% Brij 97 formulations without carrageenan could be identified as microemulsions. The 4, 8, 15 and 25% Brij 97 formulations containing carrageenan could be identified as gels. The results obtained from the zeta-potential analysis indicated that the 4 and 8% Brij 97 formulations without carrageenan and 4% Brij 97 formulation with carrageenan are the most electronegative and thus the most stable. The pH measurements confirmed that the internal structure of the formulations was not influenced by the drug. 5-Fluorouracil was released from the formulations. The 4 and 8% Brij 97 formulations without carrageenan had an enhancing effect on the penetration of 5-fluorouracil while the 4, 8, 15 and 25% Brij 97 formulations with carrageenan and the 15 and 25% Brij 97 formulations without carrageenan had an hindering effect on the penetration of 5-fluorouracil. Although carrageenan led to good adhesiveness of the formulation on the skin, it did not lead to the enhancement of the penetration of 5-fluorouracil through the skin. When histopathological studies were carried out on female human abdominal skin, Brij 97, the surfactant, was found to have no damaging effect on the skin structure. / Thesis (M.Sc. (Pharmaceutics))--North-West University, Potchefstroom Campus, 2006.

Submitted by DANIELA MARIA JANJACOMO MIESSI (danijanjacomo@hotmail.com) on 2018-11-22T19:37:25Z No. of bitstreams: 1 tese dani janjacomo ok ok.pdf: 3519925 bytes, checksum: 4ad5ab7ab8284f1446826bbbe51b3d6c (MD5) / Rejected by Ana Paula Rimoli de Oliveira null (anapaula@foa.unesp.br), reason: Ola Daniela, Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: Problema 1 : Acrescentar ficha catalográfica. Agradecemos a compreensão on 2018-11-23T11:07:52Z (GMT) / Submitted by DANIELA MARIA JANJACOMO MIESSI (danijanjacomo@hotmail.com) on 2018-11-23T16:41:47Z No. of bitstreams: 2 tese dani janjacomo ok ok.pdf: 3519925 bytes, checksum: 4ad5ab7ab8284f1446826bbbe51b3d6c (MD5) tese dani janjacomo ok 2.pdf: 3518949 bytes, checksum: c91dbdb34520858a3b8383c39b76d5d7 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Rimoli de Oliveira null (anapaula@foa.unesp.br) on 2018-11-23T17:11:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 miessi_dmj_dr_araca_int.pdf: 3518949 bytes, checksum: c91dbdb34520858a3b8383c39b76d5d7 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-23T17:11:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 miessi_dmj_dr_araca_int.pdf: 3518949 bytes, checksum: c91dbdb34520858a3b8383c39b76d5d7 (MD5) Previous issue date: 2018-10-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os probióticos (PROs) estão sendo intensamente avaliados na prevenção ou tratamento de doenças da cavidade oral, que estão associadas a uma mudança na composição e atividade microbiana do biofilme e resposta do hospedeiro. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do Lactobacillus reuteri aplicado localmente ou sistemicamente como coadjuvante ao tratamento periodontal não cirúrgico de raspagem e alisamento radicular (RAR), na periodontite experimentalmente induzida em animais submetidos à quimioterapia com 5-fluorouracil (5-FU). A indução da periodontite experimental (PE) foi realizada com a colocação de um fio de algodão ao redor dos molares inferiores esquerdos de 108 ratos, que permaneceu por 7 dias. Todos os animais receberam o quimioterápico no momento da indução da PE (60mg/kg) e 48 horas após (40mg/kg) e foram separados aleatoriamente em 6 grupos com 18 animais cada um, com os seguintes tratamentos: 5FU: animais tratados com 5-FU; 5FU/RAR: animais tratados com 5-FU, que receberam tratamento com RAR seguido de 1 aplicação de solução fisiológica salina (SS; 0,16mL); Grupo 5FU/SSL: animais tratados com 5-FU, que receberam tratamento com RAR e 4 aplicações locais de SS (0,16mL); 5FU/SSS: animais tratados com 5-FU, que receberam tratamento com RAR e 4 gavagens com SS (0,16mL); 5FU/PL: animais tratados com 5-FU, que receberam tratamento com RAR e 4 aplicações locais de PRO (0,16 mL); 5FU/PS: animais tratados com 5-FU, que receberam tratamento com RAR e 4 gavagens com PRO (0,16mL). 6 animais de cada grupo foram submetidos à eutanásia aos 7, 15 e 30 dias após os tratamentos. A área da furca dos molares foi submetida às análises histopatológica, histométrica e dos padrões de imunomarcação para TRAP, PCNA, RANKL, OPG, OCN e TGF-β1. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística (α=5%). O grupo 5FU/PS apresentou melhora no processo inflamatório em todos os períodos. Houve maior perda óssea alveolar (PO) nos espécimes do grupo 5FU/SSS comparado ao grupo 5FU/SSL (p˂0,01) no período de 7 dias de avaliação. No período de 15 dias os espécimes dos grupos 5FU/SSL e 5FU/SSS demonstraram maior PO comparado aos grupos 5FU (p˂0,05) e 5FU/PS (p˂0,05). Aos 30 dias a PO mostrou-se maior nos espécimes do grupo 5FU/PL comparado aos grupos 5FU/RAR (p˂0,05), 5FU/SSS (p˂0,05) e 5FU/PS (p˂0,05). Na análise intragrupo houve menor PO no grupo 5FU/RAR e 5FU/PS aos 30 dias em relação aos 7 dias (p˂0,05). Na imunomarcação de células TRAP-positivas não foi evidenciada diferença significante entre os grupos e períodos; houve maior imunomarcação de células PCNA-positivas aos 7 dias no grupo 5FU/RAR comparado ao 5FU/SSS. Prevaleceu baixo padrão de imunomarcação de TGF-β1 e OCN nos grupos 5FU, 5FU/RAR, 5FU/SSL e 5FU/SSS em todos os períodos. O grupo 5FU/PS apresentou aos 7 dias um moderado padrão de imunomarcação e aos 15 e 30 dias um alto padrão de imunomarcação de TGF-β1 e OCN; o grupo 5FU/PL apresentou um moderado padrão de imunomarcação de TGF-β1 e OCN aos 7,15 e 30 dias. Na análise de RANKL prevaleceu um alto padrão de imunomarcação nos grupos 5FU, 5FU/RAR, 5FU/SSL, 5FU/SSS em todos os períodos e o grupo 5FU/PS apresentou aos 7 e 15 dias um moderado padrão de imunomarcação e aos 30 dias predominou um padrão de imunomarcação que variou do moderado ao baixo. Prevaleceu um padrão baixo de imunomarcação em todos os grupos experimentais e períodos, com exceção dos grupos 5FU/PL e 5FU/PS aos 30 dias (moderado padrão de imunomarcação) na análise de OPG. Diante dos resultados obtidos e com a metodologia empregada pode ser concluído que o uso sistêmico do Lactobacillus reuteri promoveu redução da inflamação e beneficiou o processo de reparação dos tecidos periodontais, porém não foi capaz de reduzir a PO na região de furca, demonstrando ser uma terapia periodontal coadjuvante promissora em animais submetidos à quimioterapia com 5-FU. / Probiotics (PROs) have been intensively evaluated to prevent or treat oral cavity diseases, associated with a change in the composition and microbial activity of the biofilm and response of the host. The aim of this study was to evaluate the effect of Lactobacillus reuteri applied locally or systemically as a coadjuvant to the non-surgical periodontal treatment of scaling and root planing (SRP) in experimentally induced periodontitis in animals treated with 5-fluorouracil (5-FU). Induction of experimental periodontitis (EP) was performed by placing a cotton thread around the left lower molars of 108 rats, which were kept there for 7 days. All animals underwent chemotherapy twice. They were 60mg/kg at the time they were subjected to ligature induction and again another 40 mg/kg, 48 hours later. They were randomly divided into 6 groups with 18 animals each and they received the following treatments: 5FU: treated animals with 5-FU; 5FU/SRP: 5-FU treated animals receiving SRP treatment followed by physiological saline (SS) solution; 5FU/SSL group: animals treated with 5-FU, who received SRP treatment and local SS applications; 5FU/SSS: animals treated with 5-FU, who received SRP treatment and systemic treatment with SS; 5FU/PL: animals treated with 5-FU, who received SRP treatment and local applications of PRO; 5FU/PS: animals treated with 5-FU, who received SRP treatment and systemic treatment with PRO (0.16ml x 4 days). Six animals from each group were submitted to euthanasia at 7, 15 and 30 days after treatments. The area of the molar furcation was submitted to histopathological, histometric and immuno-labeling analysis for TRAP, PCNA, RANKL, OPG, OCN and TGF-β1. The data were submitted to statistical analysis (α = 5%). There was greater bone loss (BL) in the 5FU/SSS group compared to the 5FU/SSL group (p˂0.01) in the 7-day evaluation period. In the 15-day period, specimens from the 5FU/SSL and 5FU/SSS groups showed a higher BL compared to the 5FU (p˂0.05) and 5FU/PS (p˂0.05) groups. At 30 days the BL was higher in the 5FU/PL group compared to the 5FU/SRP (p˂0.05), 5FU/SSS (p˂0.05) and 5FU/PS groups (p˂0.05). In the intragroup analysis there was a lower BL in the 5FU/SRP group and 5FU/PS at 30 days compared to 7 days (p˂0.05).In the immunostaining of TRAP-positive cells no significant difference between groups and periods was evidenced; there was greater immunolabeling of PCNA-positive cells at 7 days in the 5FU/SRP group compared to 5FU/SSS. Low prevalence of TGF-β1 and OCN immunostaining in the 5FU, 5FU/RAR, 5FU/SSL and 5FU/SSS groups prevailed at all periods. The 5FU/PS group presented at 7 days a moderate pattern of immunostaining and at 15 and 30 days a high standard of immunoblotting of TGF-β1 and OCN; the 5FU/PL group presented a moderate pattern of TGF-β1 and OCN immunoregulation at 7, 15 and 30 days; for RANKL a high standard of immunostaining in the 5FU, 5FU/SRP, 5FU/SSL, 5FU/SSS groups prevailed at all periods, 5FU/PL prevailed at 7 days a high standard of immunostaining and a moderate immunostaining pattern at 15 and 30 days and 5FU/PS showed a moderate immunostaining pattern at 7 and 15 days, and at 30 days a predominance of the immunoblot pattern varied from moderate to low; for OPG a low pattern of immunoblotting prevailed in all experimental groups and periods, except for 5FU/PL and 5FU/PS at 30 days that presented a moderate pattern of immunostaining. Based on the results obtained in this study and the methodology used to work on it, it was concluded that the use of Lactobacillus reuteri promoted reduction of inflamation and benefited the process of repairing periodontal tissues, but it was not able to reduce the BL in the furca region, proving to be a therapy promising adjuvant periodontal in animals submitted to 5-FU chemotherapy. / Capes

O câncer colorretal é um dos tumores humanos mais freqüentes e a terceira causa de morte relacionada ao câncer no mundo. Apesar de importantes progressos terapêuticos, os resultados na doença avançada ainda são muito modestos. Isto deve-se ao fato de que a droga mais utilizada nesta neoplasia, o antimetabólito 5-fluorouracil (5-FU), foi desenvolvido a mais de 40 anos produzindo taxas de respostas de somente 10-15%. Recentemente, o inibidor da topoisomerase I irinotecan (CPT-11) demonstrou, em carcinoma de cólon avançado, respostas comparáveis tanto em pacientes não tratados quanto naqueles que tiveram recaída após terapia com 5-FU. Estes resultados justificam a avaliação da combinação 5-FU/CPT-11 nesta doença. Apesar das respostas dos estudos clínicos serem promissoras, a melhor seqüência de administração destes agentes ainda não foi determinada. Neste estudo, avaliamos a combinação CPT-11/5-FU quanto ao aumento da inibição do crescimento celular quando comparada com os agentes sozinhos nas linhagens celulares de carcinoma de cólon humano SW620, HT-29 e SNU-C4. Para isto, as células foram expostas às drogas sozinhas ou a várias combinações e seqüências de dose baixa e fixa (IC20) de um dos agentes na presença de dose alta e seriada do outro. As células foram avaliadas imediatamente após os tratamentos e/ou cultivadas por mais 2 dias em meio de cultura sem drogas através de coloração com sulforodamina B. As interações entre CPT-11 e 5-FU foram avaliadas por um programa de computador que permite calcular os índices de combinação (CIs) das drogas indicando sinergismo, adição, ou antagonismo (CI < 1, = 1, ou > 1, respectivamente). As respostas celulares foram relacionadas com as atividades das enzimas timidilato sintase, topoisomerase I e carboxil esterase, que foram determinadas através de ensaio que mede os sítios de ligação e atividade catalítica da enzima, ensaio de decatenação do DNA e método espectrofotométrico, respectivamente. Estando a toxicidade no DNA envolvida no mecanismo de ação das duas drogas, também relacionamos as respostas celulares com a introdução de danos ao DNA por método fluorescente. Para melhor entendermos as interações entre as drogas, examinamos os efeitos da exposição à IC20, IC50 e/ou IC80 do CPT-11 ou 5-FU por 2 h ou 24 h em alvos celulares possivelmente relacionados com a citotoxicidade destes agentes. Estes incluem: capacidade de reparo por excisão do 10 DNA, distribuição das células nas fases do ciclo celular, integridade da membrana plasmática e formação de complexos DNA-topoisomerase I. Para isto, utilizamos método de incorporação de [3H-metil]timidina, citometria de fluxo, liberação de lactato desidrogenase (LDH) no meio de cultura e ensaio de precipitação com SDS, respectivamente. Os estudos de inibição do crescimento celular revelaram valores de IC50 do 5-FU nas linhagens SW620, HT-29 e SNU-C4 de aproximadamente 15, 8 e 2 µM, respectivamente, e do CPT-11 próximos a 2, 2 e 4 µM, respectivamente. As diferentes sensibilidades ao 5-FU nas três linhagens foram determinadas principalmente pela diferença na afinidade ao substrato. As respostas comparáveis obtidas pela exposição ao CPT-11 podem ser explicadas pelo equilíbrio entre as diferentes atividades das enzimas topoisomerase I e carboxil esterase, entre as linhagens. O programa de análise da combinação das drogas mostrou adição ou sinergismo após exposição a IC20 do CPT-11 seguido do 5-FU, nas três linhagens celulares. Por outro lado, o pré-tratamento com IC20 do 5-FU antagonizou a inibição do crescimento mediada pelo CPT-11. Nenhum dos tratamentos simultâneos determinou um aumento na inibição do crescimento nas linhagens SW620 e HT-29; mas mostraram adição ou antagonismo na linhagem SNU-C4. Observamos um significativo acréscimo na introdução de danos ao DNA nas linhagens celulares SW620 e HT-29 somente quando a IC20 do CPT-11 precedeu a IC50 do 5-FU. Já na linhagem SNU-C4, não somente este tratamento, mas também a utilização simultânea dos agentes introduziu mais dano ao DNA. Os tratamentos por 2 h ou 24 h com IC20, IC50, e/ou IC80 do 5-FU ou CPT-11 não causaram mudanças significativas na distribuição das células nas fases do ciclo celular, concentração de LDH no meio de cultura, ou formação de complexos DNA-topoisomerse I. Indicando que alterações nestes processos não estão envolvidas com os efeitos modulatórios dos pré-tratamentos na citotoxicidade das drogas. Entretanto, a incorporação de [3H-metil]timidina no DNA de células tratadas com CPT-11, aumentou em função da dose e tempo de exposição à droga. Este resultado sugere que o dano ao DNA introduzido pelo CPT-11 depende da dose e tempo de exposição podendo ser reparado por mecanismos de excisão. Somente foi observada significativa incorporação de [3H-metil]timidina em células tratadas com IC20 do 5-FU por 2 h, sugerindo que o reparo por excisão só ocorre após exposição por curto período e à doses baixas deste agente. Juntos, os resultados deste estudo mostraram que tanto os efeitos anti-proliferativos quanto a introdução de danos ao DNA pela combinação CPT-11/5-FU em dose baixa e fixa de um agente junto com dose alta do outro, nas linhagens celulares de carcinoma de cólon humano SW620, HT-29 e SNU-C4, dependem da seqüência de administração das drogas. Estes achados podem ter sido determinados pelos diferentes efeitos do tratamento com uma dose baixa dos agentes nos mecanismos de reparo por excisão do DNA.

O câncer colorretal é um dos tumores humanos mais freqüentes e a terceira causa de morte relacionada ao câncer no mundo. Apesar de importantes progressos terapêuticos, os resultados na doença avançada ainda são muito modestos. Isto deve-se ao fato de que a droga mais utilizada nesta neoplasia, o antimetabólito 5-fluorouracil (5-FU), foi desenvolvido a mais de 40 anos produzindo taxas de respostas de somente 10-15%. Recentemente, o inibidor da topoisomerase I irinotecan (CPT-11) demonstrou, em carcinoma de cólon avançado, respostas comparáveis tanto em pacientes não tratados quanto naqueles que tiveram recaída após terapia com 5-FU. Estes resultados justificam a avaliação da combinação 5-FU/CPT-11 nesta doença. Apesar das respostas dos estudos clínicos serem promissoras, a melhor seqüência de administração destes agentes ainda não foi determinada. Neste estudo, avaliamos a combinação CPT-11/5-FU quanto ao aumento da inibição do crescimento celular quando comparada com os agentes sozinhos nas linhagens celulares de carcinoma de cólon humano SW620, HT-29 e SNU-C4. Para isto, as células foram expostas às drogas sozinhas ou a várias combinações e seqüências de dose baixa e fixa (IC20) de um dos agentes na presença de dose alta e seriada do outro. As células foram avaliadas imediatamente após os tratamentos e/ou cultivadas por mais 2 dias em meio de cultura sem drogas através de coloração com sulforodamina B. As interações entre CPT-11 e 5-FU foram avaliadas por um programa de computador que permite calcular os índices de combinação (CIs) das drogas indicando sinergismo, adição, ou antagonismo (CI < 1, = 1, ou > 1, respectivamente). As respostas celulares foram relacionadas com as atividades das enzimas timidilato sintase, topoisomerase I e carboxil esterase, que foram determinadas através de ensaio que mede os sítios de ligação e atividade catalítica da enzima, ensaio de decatenação do DNA e método espectrofotométrico, respectivamente. Estando a toxicidade no DNA envolvida no mecanismo de ação das duas drogas, também relacionamos as respostas celulares com a introdução de danos ao DNA por método fluorescente. Para melhor entendermos as interações entre as drogas, examinamos os efeitos da exposição à IC20, IC50 e/ou IC80 do CPT-11 ou 5-FU por 2 h ou 24 h em alvos celulares possivelmente relacionados com a citotoxicidade destes agentes. Estes incluem: capacidade de reparo por excisão do 10 DNA, distribuição das células nas fases do ciclo celular, integridade da membrana plasmática e formação de complexos DNA-topoisomerase I. Para isto, utilizamos método de incorporação de [3H-metil]timidina, citometria de fluxo, liberação de lactato desidrogenase (LDH) no meio de cultura e ensaio de precipitação com SDS, respectivamente. Os estudos de inibição do crescimento celular revelaram valores de IC50 do 5-FU nas linhagens SW620, HT-29 e SNU-C4 de aproximadamente 15, 8 e 2 µM, respectivamente, e do CPT-11 próximos a 2, 2 e 4 µM, respectivamente. As diferentes sensibilidades ao 5-FU nas três linhagens foram determinadas principalmente pela diferença na afinidade ao substrato. As respostas comparáveis obtidas pela exposição ao CPT-11 podem ser explicadas pelo equilíbrio entre as diferentes atividades das enzimas topoisomerase I e carboxil esterase, entre as linhagens. O programa de análise da combinação das drogas mostrou adição ou sinergismo após exposição a IC20 do CPT-11 seguido do 5-FU, nas três linhagens celulares. Por outro lado, o pré-tratamento com IC20 do 5-FU antagonizou a inibição do crescimento mediada pelo CPT-11. Nenhum dos tratamentos simultâneos determinou um aumento na inibição do crescimento nas linhagens SW620 e HT-29; mas mostraram adição ou antagonismo na linhagem SNU-C4. Observamos um significativo acréscimo na introdução de danos ao DNA nas linhagens celulares SW620 e HT-29 somente quando a IC20 do CPT-11 precedeu a IC50 do 5-FU. Já na linhagem SNU-C4, não somente este tratamento, mas também a utilização simultânea dos agentes introduziu mais dano ao DNA. Os tratamentos por 2 h ou 24 h com IC20, IC50, e/ou IC80 do 5-FU ou CPT-11 não causaram mudanças significativas na distribuição das células nas fases do ciclo celular, concentração de LDH no meio de cultura, ou formação de complexos DNA-topoisomerse I. Indicando que alterações nestes processos não estão envolvidas com os efeitos modulatórios dos pré-tratamentos na citotoxicidade das drogas. Entretanto, a incorporação de [3H-metil]timidina no DNA de células tratadas com CPT-11, aumentou em função da dose e tempo de exposição à droga. Este resultado sugere que o dano ao DNA introduzido pelo CPT-11 depende da dose e tempo de exposição podendo ser reparado por mecanismos de excisão. Somente foi observada significativa incorporação de [3H-metil]timidina em células tratadas com IC20 do 5-FU por 2 h, sugerindo que o reparo por excisão só ocorre após exposição por curto período e à doses baixas deste agente. Juntos, os resultados deste estudo mostraram que tanto os efeitos anti-proliferativos quanto a introdução de danos ao DNA pela combinação CPT-11/5-FU em dose baixa e fixa de um agente junto com dose alta do outro, nas linhagens celulares de carcinoma de cólon humano SW620, HT-29 e SNU-C4, dependem da seqüência de administração das drogas. Estes achados podem ter sido determinados pelos diferentes efeitos do tratamento com uma dose baixa dos agentes nos mecanismos de reparo por excisão do DNA.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-28 / Mucosite oral é complicação comum no tratamento do câncer. A glicina demonstra efeito antiinflamatório, imunomodulador e citoprotetor. Este estudo tem como objetivo avaliar os efeitos da suplementação de glicina na reparação da mucosite oral induzida por 5-fluorouracil em hamster. Os animais foram divididos em dois grupos: grupo experimental (GI; n=20) e grupo controle (GII; n=20) ambos receberam injeção intraperitoneal de 5-fluorouracil no 1° e 3° dia. Os animais tiveram a sua bolsa jugal direita evertida e arranhada superficialmente no dia 3. O Grupo I, foi submetido ao tratamento com glicina a 5% por infusão intraperitoneal durante 7 dias e o Grupo II, recebeu placebo. A mucosa do GI e GII foi avaliada clinicamente, por meio de escore, no D3 e D7. Ao final do experimento a bolsa jugal dos animais de ambos os grupos foi retirada e avaliada segundo parâmetros histopatológicos e bioquímicos. Os grupos I e II apresentaram acentuado processo inflamatório durante o período inicial, segundo a avaliação clínica. No GI houve redução da severidade da mucosite, diminuição do processo inflamatório, cicatrização acelerada e redução da peroxidação lipídica quando comparado ao GII no final do experimento (p < 0,001). A suplementação com glicina demonstrou ser promissor instrumento para tratamento da mucosite, devido aos seus efeitos no processo inflamatório. Palavras chaves: Glicina; Estomatite; Fluoruracila; Cricetulus. / Oral mucositis is common complication in cancer treatment. Glycine shows a anti-inflammatory, immunomodulatory and cytoprotective. This study aims to evaluate the effects of supplementation of glycine in the repair of oral mucositis induced by 5-fluorouracil in hamsters. The animals were divided into two groups: experimental group (GI, n = 20) and control group (GII, n = 20) both received intraperitoneal injection of 5-fluorouracil in the days 1 and 3. The animals had their right pouch everted and scratched the surface on day 3. Group I was treated with glycine 5% by intraperitoneal infusion for 7 days and Group II, not supplemented. The mucosa of the GI and GII was evaluated clinically, by scoring in D3 and D7. At the end , the cheek pouch of animals from both groups was removed and evaluated by histopathological parameters and biochemical . Groups I and II showed marked inflammatory process during the initial period, according to clinical evaluation. In GI decreased the severity of mucositis, reduction of inflammation, accelerated healing and decreased lipid peroxidation when compared to GII at the end of the experiment. Supplementation with glycine proves to be a promising tool for treatment of mucositis due to its effectson the inflammatory process. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

O câncer colorretal é um dos tumores humanos mais freqüentes e a terceira causa de morte relacionada ao câncer no mundo. Apesar de importantes progressos terapêuticos, os resultados na doença avançada ainda são muito modestos. Isto deve-se ao fato de que a droga mais utilizada nesta neoplasia, o antimetabólito 5-fluorouracil (5-FU), foi desenvolvido a mais de 40 anos produzindo taxas de respostas de somente 10-15%. Recentemente, o inibidor da topoisomerase I irinotecan (CPT-11) demonstrou, em carcinoma de cólon avançado, respostas comparáveis tanto em pacientes não tratados quanto naqueles que tiveram recaída após terapia com 5-FU. Estes resultados justificam a avaliação da combinação 5-FU/CPT-11 nesta doença. Apesar das respostas dos estudos clínicos serem promissoras, a melhor seqüência de administração destes agentes ainda não foi determinada. Neste estudo, avaliamos a combinação CPT-11/5-FU quanto ao aumento da inibição do crescimento celular quando comparada com os agentes sozinhos nas linhagens celulares de carcinoma de cólon humano SW620, HT-29 e SNU-C4. Para isto, as células foram expostas às drogas sozinhas ou a várias combinações e seqüências de dose baixa e fixa (IC20) de um dos agentes na presença de dose alta e seriada do outro. As células foram avaliadas imediatamente após os tratamentos e/ou cultivadas por mais 2 dias em meio de cultura sem drogas através de coloração com sulforodamina B. As interações entre CPT-11 e 5-FU foram avaliadas por um programa de computador que permite calcular os índices de combinação (CIs) das drogas indicando sinergismo, adição, ou antagonismo (CI < 1, = 1, ou > 1, respectivamente). As respostas celulares foram relacionadas com as atividades das enzimas timidilato sintase, topoisomerase I e carboxil esterase, que foram determinadas através de ensaio que mede os sítios de ligação e atividade catalítica da enzima, ensaio de decatenação do DNA e método espectrofotométrico, respectivamente. Estando a toxicidade no DNA envolvida no mecanismo de ação das duas drogas, também relacionamos as respostas celulares com a introdução de danos ao DNA por método fluorescente. Para melhor entendermos as interações entre as drogas, examinamos os efeitos da exposição à IC20, IC50 e/ou IC80 do CPT-11 ou 5-FU por 2 h ou 24 h em alvos celulares possivelmente relacionados com a citotoxicidade destes agentes. Estes incluem: capacidade de reparo por excisão do 10 DNA, distribuição das células nas fases do ciclo celular, integridade da membrana plasmática e formação de complexos DNA-topoisomerase I. Para isto, utilizamos método de incorporação de [3H-metil]timidina, citometria de fluxo, liberação de lactato desidrogenase (LDH) no meio de cultura e ensaio de precipitação com SDS, respectivamente. Os estudos de inibição do crescimento celular revelaram valores de IC50 do 5-FU nas linhagens SW620, HT-29 e SNU-C4 de aproximadamente 15, 8 e 2 µM, respectivamente, e do CPT-11 próximos a 2, 2 e 4 µM, respectivamente. As diferentes sensibilidades ao 5-FU nas três linhagens foram determinadas principalmente pela diferença na afinidade ao substrato. As respostas comparáveis obtidas pela exposição ao CPT-11 podem ser explicadas pelo equilíbrio entre as diferentes atividades das enzimas topoisomerase I e carboxil esterase, entre as linhagens. O programa de análise da combinação das drogas mostrou adição ou sinergismo após exposição a IC20 do CPT-11 seguido do 5-FU, nas três linhagens celulares. Por outro lado, o pré-tratamento com IC20 do 5-FU antagonizou a inibição do crescimento mediada pelo CPT-11. Nenhum dos tratamentos simultâneos determinou um aumento na inibição do crescimento nas linhagens SW620 e HT-29; mas mostraram adição ou antagonismo na linhagem SNU-C4. Observamos um significativo acréscimo na introdução de danos ao DNA nas linhagens celulares SW620 e HT-29 somente quando a IC20 do CPT-11 precedeu a IC50 do 5-FU. Já na linhagem SNU-C4, não somente este tratamento, mas também a utilização simultânea dos agentes introduziu mais dano ao DNA. Os tratamentos por 2 h ou 24 h com IC20, IC50, e/ou IC80 do 5-FU ou CPT-11 não causaram mudanças significativas na distribuição das células nas fases do ciclo celular, concentração de LDH no meio de cultura, ou formação de complexos DNA-topoisomerse I. Indicando que alterações nestes processos não estão envolvidas com os efeitos modulatórios dos pré-tratamentos na citotoxicidade das drogas. Entretanto, a incorporação de [3H-metil]timidina no DNA de células tratadas com CPT-11, aumentou em função da dose e tempo de exposição à droga. Este resultado sugere que o dano ao DNA introduzido pelo CPT-11 depende da dose e tempo de exposição podendo ser reparado por mecanismos de excisão. Somente foi observada significativa incorporação de [3H-metil]timidina em células tratadas com IC20 do 5-FU por 2 h, sugerindo que o reparo por excisão só ocorre após exposição por curto período e à doses baixas deste agente. Juntos, os resultados deste estudo mostraram que tanto os efeitos anti-proliferativos quanto a introdução de danos ao DNA pela combinação CPT-11/5-FU em dose baixa e fixa de um agente junto com dose alta do outro, nas linhagens celulares de carcinoma de cólon humano SW620, HT-29 e SNU-C4, dependem da seqüência de administração das drogas. Estes achados podem ter sido determinados pelos diferentes efeitos do tratamento com uma dose baixa dos agentes nos mecanismos de reparo por excisão do DNA.

Submitted by Luiz Felipe Barbosa (luiz.fbabreu2@ufpe.br) on 2015-04-17T14:27:33Z No. of bitstreams: 2 TESE Flávia Lucena.pdf: 1461854 bytes, checksum: c95dfad3364a7959e3f68649485b4dfb (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T14:27:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Flávia Lucena.pdf: 1461854 bytes, checksum: c95dfad3364a7959e3f68649485b4dfb (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / Relatos na literatura vêm utilizando nanoparticulas com o objetivo de carrear drogas e diminuir seus efeitos colaterais. Dentro dessa perspectiva estão às redes coordenadas a metais orgânicos ou MOFs. Este trabalho teve como objetivo realizar a incorporação de um fármaco antitumoral em uma rede de coordenação, visando melhorar sua biodisponibilidade para o organismo, bem como avaliar a toxicidade deste sistema in vitro e in vivo. Para isso foi realizado estudo teórico-computacional que nos permitiu a escolher o melhor fármaco a ser utilizado (5-fluorouracil) e a melhor rede de coordenação (Cu-BTC MOF), levando em consideração os tamanhos das moléculas dos mesmos em relação ao tamanho dos poros das MOFs Cu-BTC e MIL-53(Al). Os resultados das caracterizações químicas realizadas (UV-VIS, IV, CNHS, DRX, TGA/DTG e DSC) indicaram uma incorporação de 0,82 g de 5-fluorouracil para cada 1 g de MOF Cu-BTC após sete dias de agitação. A cultura celular in vitro demonstrou que o sistema 5-FU + Cu-BTC MOF apresentou atividade citotóxica significante quando comparado ao fármaco em solução. O teste de verificação do mecanismo de morte celular utilizando a citometria de fluxo indicou ser a apoptose o mecanismo de ação responsável para eliminação das células tumorais. O estudo de dissolução indicou uma liberação lenta e controlada de 39% do fármaco nos primeiros 30 minutos seguida da liberação de 82% do fármaco em 48 horas. Alterações histológicas só foram evidenciadas quando utilizada a dose de 750mg/kg sendo esta, a dose letal (DL50) encontrada. O teste da peritonite, verificação dos níveis de citocinas pro-inflamatórias e produção de óxido demonstraram que o sistema 5-FU + Cu-BTC MOF reduziu o número de leucócitos, os níveis de citocinas pró-inflamatórias e óxido nítrico, indicando que o sistema apresentou também atividade antiinflamatória para os testes realizados. Os resultados indicaram ser o sistema 5-FU+Cu-BTC MOF um excelente carreador de fármaco, com indicação de atividade anti-inflamatória, excelente atividade citotóxica via mecanismo de apoptose e liberação lenta e gradual do fármaco, o que possibilitou a diminuição na toxicidade do mesmo acompanhado de uma significante melhora terapêutica.