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Formulation et immobilisation de la Lipase de Yarrowia lipolytica

Alloué, Wazé Aimé Mireille 09 April 2008 (has links)
La lipase de Yarrowia lipolytica (EC 3.1.1.3) est une enzyme appartenant à la classe des hydrolases. La non pathogénicité et le caractère hyperproducteur en lipase de cette levure lui confèrent une place de choix au sein de lunité de Bio-industries du Centre Wallon de Biologie Industrielle. Ce présent travail sinscrit dans le cadre général du développement industriel de la lipase de Yarrowia lipolytica et concerne plus particulièrement le traitement post-culture de lenzyme afin de réaliser des formes liquides, poudres atomisées, immobilisées et enrobées à laide des polymères acryliques. Latomisation de la lipase en présence ou en absence de poudre de lait a permis lacquisition de poudres fluentes, stables à 4 et 20°C et présentant des températures de transition vitreuse comprises entre 51 et 79°C. Lactivité deau de conservation des poudres était ≤ 0.4. La stabilisation de lenzyme sous forme de liquide concentré réalisée avec le monopropylène glycol (MPG), les inhibiteurs de protéases et lirradiation aux rayons gamma ont révélé que le MPG à 50% et la technique dirradiation au rayon gamma permettaient la stérilisation et la préservation de lactivité enzymatique. Par ailleurs, limmobilisation de cette enzyme par trois techniques (adsorption, inclusion et liaison covalente) a révélé une amélioration de ses propriétés caractéristiques telles que la thermostabilté et la résistance aux solvants. La technique dimmobilisation par adsorption et par liaison covalente a permis une utilisation multiple de lenzyme. Létude préliminaire de faisabilité des formes galéniques à base de la lipase de Y. lipolytica a montré la capacité de cette enzyme à être mise sous forme de comprimés et de poudres encapsulées. La comparaison réalisée in vitro entre le Créon 150mg (produit pharmaceutique) et les formes galéniques à base de la lipase a montré des temps de gastro-résistance et de délitage similaires. Ces différentes formules de la lipase posent des jalons nécessaires pour leurs applications dans des secteurs agroalimentaires, environnementaux et pharmaceutiques. Yarrowia lipolytica lipase (EC.3.1.1.3) is an enzyme which belongs to the class of hydrolases. Nonpathogenicity and the high-lipase producing character of this yeast have emphasised its use within the laboratory of Bio-industry of the Walloon Center of Industrial Biology. The present work lies within the general scope of the industrial development of the lipase from Yarrowia lipolytica. More particularly it relates to the post-culture treatment of the enzyme in order to obtain liquid forms, atomized powders, immobilized and coated enzymes using acrylic polymers. The atomization of lipase in presence or absence of milk powder allowed the achievement of flowing, stable powders at 4 and 20°C, with glass transition temperatures ranging between 51 and 79°C. The water activity of preservation of the powders was ≤ 0.4. Stabilization of the enzyme under the form of concentrated liquid carried out with monopropylen glycol (MPG), proteases inhibitors and gamma irradiation revealed that MPG (50%) and gamma irradiation allowed sterilization and conservation of the enzymatic activity. In addition, the immobilization of the enzyme through three techniques (adsorption, inclusion and covalent bond) revealed an improvement of some properties such as thermostability and resistance to solvents. Immobilization by adsorption and covalent bond allowed multiple uses of the enzyme. The preliminary study of feasibility of galenic forms containing the lipase from Y. lipolytica showed the capacity of this enzyme to be put under the form of tablets and encapsulated powders. The in vitro comparison of Creon 150mg (pharmaceutical product) and galenic forms containing the lipase, showed similar times of acid-resistance and of disintegration. These various formulas of the lipase constitute milestones necessary for their applications in food, environmental and pharmaceutical industries.
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Contribution to the study of semiochemical slow-release formulations as biological control devices

Heuskin, Stéphanie 16 May 2011 (has links)
English: Semiochemicals informative molecules used in insect-insect or plant-insect interactions have been widely considered within various integrated pest management (IPM) strategies. In the present thesis, two sesquiterpenoids, E-β-farnesene and E-β-caryophyllene, were formulated for their related properties as aphid enemy attractants. E-β-farnesene, the alarm pheromone of many aphid species, was also identified as a kairomone by attracting and inducing oviposition of aphid predators (Episyrphus balteatus De Geer (Diptera: Syrphidae)) and by attracting aphid parasitoids (Aphidius ervi Haliday (Hymenoptera: Braconidae)). E-β-caryophyllene was identified as a potential component of the aggregation pheromone of the Asian ladybird, Harmonia axyridis Pallas, another aphid predator. The two products were purified from essential oils of Matricaria chamomilla L. (Asteraceae) and Nepeta cataria L. (Lamiaceae) for E-β-farnesene and E-β-caryophyllene, respectively. Natural and biodegradable slow-release formulations were then investigated in order to deliver these molecules on crop fields for a long period of time as biological control devices. Due to their sensitivity to oxidation, both sesquiterpenes needed to be protected from oxygen degradation. For this purpose, alginate hydrophilic matrix with low oxygen permeability was used as polymer for the formulations: the main objective was to deliver semiochemical substances in the air in a controlled way. Consequently, a careful selection of alginates was realised. Formulated beads showed different structural and encapsulation properties depending on various formulation factors. Alginate formulations were characterized by texturometry and by confocal microscopy in order to observe the distribution of semiochemicals in alginate network. The last step of alginate bead characterisation consisted in studying release rate of semiochemicals in laboratory-controlled conditions by optimised trapping and validated Fast-GC procedures. Finally, the efficiency of formulations as aphid predator (Syrphidae) and parasitoids (A. ervi) attractants was demonstrated by field trapping and olfactometry experiments. Français: Les sémiochimiques molécules véhiculant des informations au sein des interactions insecte-insecte ou plante-insecte ont été largement utilisés dans de nombreuses stratégies de lutte intégrée. La présente thèse de doctorat décrit la formulation de deux sesquiterpènes, le E-β-farnésène et le E-β-caryophyllène, pour leurs propriétés relatées dans la littérature en tant quattractants des ennemis des pucerons. En effet, le E-β-farnésène, la phéromone dalarme de nombreuses espèces de pucerons, a également été identifié comme kairomone en attirant des parasitoïdes (Aphidius ervi Haliday (Hymenoptera: Braconidae)) et des prédateurs de pucerons (Episyrphus balteatus De Geer (Diptera: Syrphidae)) et en induisant un comportement doviposition chez ces derniers. Le E-β-caryophyllène a récemment été identifié comme un composé probable de la phéromone dagrégation des coccinelles asiatiques, Harmonia axyridis Pallas, également prédatrices de pucerons. Les deux produits ont été purifiés au départ des huiles essentielles de Matricaria chamomilla L. (Asteraceae) et de Nepeta cataria L. (Lamiaceae) respectivement dans le cas du E-β-farnésène et du E-β-caryophyllène. Des formulations biodégradables et dorigine naturelle ont ensuite été développées comme outil de contrôle biologique afin de libérer les deux composés de façon progressive. En raison de leur sensibilité à loxydation, ces deux sesquiterpènes devaient être protégés de loxygène. A cette fin, de lalginate matrice hydrophile offrant une faible perméabilité à loxygène a été utilisé comme polymère de formulation : le principal objectif était de délivrer les substances sémiochimiques dans lair dune façon contrôlée. En conséquence, lalginate a été sélectionné de façon minutieuse. Les billes formulées ont montrés des propriétés structurelles et dencapsulation différentes en fonction de nombreux facteurs intervenant lors de la formulation. Les formulations ont été caractérisées par texturométrie et par microscopie confocale de façon à observer la distribution des sémiochimiques au sein du réseau dalginate. La dernière étape de caractérisation des billes a consisté en létude du taux de libération des sémiochimiques dans des conditions contrôlées de laboratoire après avoir optimisé la technique de piégeage des volatils et validé la procédure danalyse par GC rapide. Finalement, lefficacité dattraction des formulations envers les prédateurs et les parasitoïdes de pucerons a été démontrée par des expériences de piégeage sur cultures et des essais dolfactométrie.

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